过敏性哮喘血浆、淋巴细胞内Ca2+和白细胞分类的变化及糖皮质激素的干预作用
作者：曹慧玲 国瑞祺 符 波
单位：解放军第四六五医院(132011)曹慧玲 国瑞祺；解放军第四七八医院 符 波
关键词：哮喘；钙；白细胞；糖皮质激素
实用医学杂志990232摘 要 目的：观察过敏性哮喘中钙离子含量和分布，及与周围血白细胞分类关系。方法：检测过敏性哮喘豚鼠模型血浆及淋巴细胞内钙离子浓度，同时涂片检查其周围血白细胞分类。结果：单因素分析见过敏性哮喘发作后期血浆钙上升，激素干预后下降；淋巴细胞内钙离子浓度在哮喘发作后即有一定程度上升，并有时间依存性，激素干预后仍呈上升趋势。周围血白细胞分类以嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞增多明显，但升高速度较慢，激素对淋巴细胞比率有早期干预作用。多因素分析见嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞的增高趋势与钙离子一致，糖皮质激素对淋巴细胞和血浆钙的即刻降低作用一致。结论：过敏性哮喘发作后，血浆与淋巴细胞内钙离子升高，且有时间依存性，嗜酸细胞和淋巴细胞比率后期上升，两者呈正相关。激素对血浆钙离子浓度有控制作用，对嗜酸及淋巴细胞有抑制作用。
, 百拇医药
支气管哮喘是在支气管高反应状态下，由于变应原或其他因素引起的广泛气道狭窄的疾病。支气管哮喘发作原因复杂，钙离子是一个重要的参与因子。为研究过敏性哮喘与钙离子的关系，我们以豚鼠哮喘动物模型，探讨哮喘发作前后血浆及淋巴细胞内Ca2+浓度及白细胞分类的变化。
1 材料与方法
1.1 动物及模型制备 健康、短毛豚鼠40只，雌雄不限，体重200～250 g，2～2.5月龄，由第四军医大学动物实验中心提供，过敏性哮喘模型的制备用卵蛋白法[1]。
1.2 动物分组 依要求共分为5组，每组8只。OB组：对照组；OA1组：哮喘激发后1小时组；OA2组：哮喘激发后24小时组；DEX1组：激发前2小时腹腔内注射地塞米松1 mg/kg，激发后1小时组；DEX2组：激发前腹腔内注射地塞米松1 mg/kg，激发后24小时组。
, 百拇医药
1.3 仪器及检测方法 取标本后用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞，调细胞浓度为2×106/ml。钙离子用快速脉冲微量进样火焰原子吸收法，所用仪器为日立180-80原子吸收分光光度计。白细胞分类用玻片法记数分类。
1.4 数据处理方法：所获数据分别经方差分析，配对t检验和相关性分析。
2 结果
2.1 过敏性哮喘豚鼠血浆和淋巴细胞内钙离子浓度与白细胞分类，见表1。
表1 过敏性哮喘豚鼠血浆和淋巴细胞内钙离子浓度与白细胞分类
钙离子(Ca2+)
周围血涂片白细胞分类(%)
, 百拇医药 血浆(μg/ml)
细胞内(μg/2×106 cells)
单核细胞
嗜中性细胞
嗜酸细胞
淋巴细胞
OB
36.2±3.0
0.77±0.37
4.2±1.7
46.5±1.2
3.9±1.2
, 百拇医药
45.4±1.3
OA1
34.8±3.9
1.04±0.39
9.5±1.9
46.5±2.9
6.0±1.4
48.0±8.6
OA2
41.4±5.5
1.57±0.46
5.0±1.4
, http://www.100md.com
16.5±2.1
7.0±2.1
71.5±3.4
DEX1
35.4±3.8
1.35±0.19
6.5±2.3
49.5±6.2
6.0±1.8
38.0±7.0
DEX2
36.6±1.9
, 百拇医药
1.72±0.40
4.7±1.9
45.5±8.1
3.3±0.9
46.0±9.9
2.2 单因素分析：血浆钙离子在哮喘发作后期升高(OA2组高于OB和OA1组，P<0.05)，激素干预后可使其水平下降(OA2组低于DEX2组，P<0.05)。淋巴细胞内钙离子在哮喘发作后期高于早期(OA2高于OA1，P<0.05)，激素干预后血浆保持稳定而细胞内钙持续上升(DEX2高于DEX1，P<0.05)。单核细胞在哮喘发作早期(OA1组)高于其他各组(P<0.01)；嗜中性粒细胞在哮喘发作中升高，早期更明显(OA1组P<0.01)；嗜酸细胞在哮喘后期增高明显，激素干预后下降，且有时间依存性(OA2组高于OB及DEX2组)；淋巴细胞在哮喘发作后期增高(OA2高于其他各组，P<0.01)，激素对其有早期干预作用(DEX1低于其它各组，P<0.01)。
, 百拇医药
2.3 多因素相关分析：血浆与细胞内钙离子浓度呈正相关，r=0.708，但有时间差；淋巴细胞及嗜酸细胞的比率与血浆钙离子浓度呈正相关，r=0.842，时间趋势相同。
3 讨论
支气管哮喘发作原因复杂，钙离子亦是一重要参与因子。在某些刺激影响下，胞液中钙离子升高，待达到一定浓度时，即与钙调节蛋白结合，发挥调节作用。但钙离子浓度的增高是一蓄积过程，需要一定时间，我们的检测结果符合这一趋势(OA2组血浆钙离子浓度明显高于OA1组)。钙离子的生理作用绝大多数是通过与调钙蛋白结合而实现的。肌浆中的钙离子超出一定水平，可开始引起平滑肌收缩，与哮喘发作时支气管痉挛有关。钙离子还参与cAMP和cGMP的磷酸化过程，使它们分别转化为ATP和GTP，前者为肥大细胞脱颗粒提供能量，后者大量消耗cGMP[2]，使哮喘发作时，cAMP/cGMP[3]比值失常，进而促进哮喘发作。钙离子和钙调蛋白可激活环核苷酸磷酸二酯酶的活性，在大多数组织中抑制腺苷酸环化酶，减少cAMP的产量，起促喘作用。我们检测哮喘发作后24小时血浆钙明显上升，激素干预后明显下降，而细胞内钙却持续上升，说明血浆钙离子水平可通过激素对钙的重新分布而受到调节和控制。孙保君等[4]用哮喘豚鼠模型检测了肺组织钙ATP酶，发现其活性明显下降，推测哮喘发作时的确存在钙离子调节和/或分布异常。哮喘发作后期嗜酸细胞和淋巴细胞比率达到高峰，表明两者在哮喘发作中即刻反应较弱，而后期应答较强。此趋势与血浆钙变化一致，这两类细胞比率增高、功能活跃，与钙离子调节Ca2+-Mg2+-ATP酶，为其提供能量有关。目前认为哮喘是以嗜酸细胞浸润为主的慢性炎症，我们的检测发现哮喘激发后钙离子及嗜酸细胞、淋巴细胞后期上升明显，与慢性反应性质相符。激素对上述两种细胞的干预作用明显，尤其对哮喘激发后1小时组，表明激素的抗炎作用是即刻性的，与对钙离子的调节有时间一致性。淋巴细胞是体内重要的免疫细胞，激素可使其比率较快降低，这一结果与糖皮质激素有免疫抑制作用[5]的理论相一致。
, 百拇医药
综上所述，过敏性哮喘发作后，血浆与淋巴细胞内钙离子升高，且有时间依存性。嗜酸细胞和淋巴细胞比率后期上升，两者呈正相关。激素对血浆钙离子浓度有稳定作用，对嗜酸及淋巴细胞有抑制作用。
4 参考文献
1 于化鹏，李平升，府 军. 过敏性哮喘豚鼠血小板激活因子的变化及川芎嗪的影响. 中国病理生理学杂志，1995，11(3)：317～320.
2 Nathan C. Nitric oxide as a secretory product of mammalian cells. FASEB J,1992,6(12):3051～3064.
3 曹慧玲，王良瑾，孙 滨. 糖皮质激素对过敏性哮喘血浆及淋巴细胞内cAMP和cGMP的影响. 吉林医学，1997，18(3)：146～147.
4 孙保君，黄念秋，董 伟，等. 钙ATP酶在豚鼠过敏性哮喘发病过程中的作用. 中华结核和呼吸杂志，1993，16(3)：176～178.
5 Anastassiou ED,Paliogianni F,Balow JP,et al. Prostaglandin E2 and other cyclic AMP-elevating agents modulate IL-2 and IL-2R alpha gene expression at multiple levels. J Immunol,1992,148(9):2845～2851., http://www.100md.com
单位：解放军第四六五医院(132011)曹慧玲 国瑞祺；解放军第四七八医院 符 波
关键词：哮喘；钙；白细胞；糖皮质激素
实用医学杂志990232摘 要 目的：观察过敏性哮喘中钙离子含量和分布，及与周围血白细胞分类关系。方法：检测过敏性哮喘豚鼠模型血浆及淋巴细胞内钙离子浓度，同时涂片检查其周围血白细胞分类。结果：单因素分析见过敏性哮喘发作后期血浆钙上升，激素干预后下降；淋巴细胞内钙离子浓度在哮喘发作后即有一定程度上升，并有时间依存性，激素干预后仍呈上升趋势。周围血白细胞分类以嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞增多明显，但升高速度较慢，激素对淋巴细胞比率有早期干预作用。多因素分析见嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞的增高趋势与钙离子一致，糖皮质激素对淋巴细胞和血浆钙的即刻降低作用一致。结论：过敏性哮喘发作后，血浆与淋巴细胞内钙离子升高，且有时间依存性，嗜酸细胞和淋巴细胞比率后期上升，两者呈正相关。激素对血浆钙离子浓度有控制作用，对嗜酸及淋巴细胞有抑制作用。
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支气管哮喘是在支气管高反应状态下，由于变应原或其他因素引起的广泛气道狭窄的疾病。支气管哮喘发作原因复杂，钙离子是一个重要的参与因子。为研究过敏性哮喘与钙离子的关系，我们以豚鼠哮喘动物模型，探讨哮喘发作前后血浆及淋巴细胞内Ca2+浓度及白细胞分类的变化。
1 材料与方法
1.1 动物及模型制备 健康、短毛豚鼠40只，雌雄不限，体重200～250 g，2～2.5月龄，由第四军医大学动物实验中心提供，过敏性哮喘模型的制备用卵蛋白法[1]。
1.2 动物分组 依要求共分为5组，每组8只。OB组：对照组；OA1组：哮喘激发后1小时组；OA2组：哮喘激发后24小时组；DEX1组：激发前2小时腹腔内注射地塞米松1 mg/kg，激发后1小时组；DEX2组：激发前腹腔内注射地塞米松1 mg/kg，激发后24小时组。
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1.3 仪器及检测方法 取标本后用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞，调细胞浓度为2×106/ml。钙离子用快速脉冲微量进样火焰原子吸收法，所用仪器为日立180-80原子吸收分光光度计。白细胞分类用玻片法记数分类。
1.4 数据处理方法：所获数据分别经方差分析，配对t检验和相关性分析。
2 结果
2.1 过敏性哮喘豚鼠血浆和淋巴细胞内钙离子浓度与白细胞分类，见表1。
表1 过敏性哮喘豚鼠血浆和淋巴细胞内钙离子浓度与白细胞分类
钙离子(Ca2+)
周围血涂片白细胞分类(%)
, 百拇医药 血浆(μg/ml)
细胞内(μg/2×106 cells)
单核细胞
嗜中性细胞
嗜酸细胞
淋巴细胞
OB
36.2±3.0
0.77±0.37
4.2±1.7
46.5±1.2
3.9±1.2
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45.4±1.3
OA1
34.8±3.9
1.04±0.39
9.5±1.9
46.5±2.9
6.0±1.4
48.0±8.6
OA2
41.4±5.5
1.57±0.46
5.0±1.4
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16.5±2.1
7.0±2.1
71.5±3.4
DEX1
35.4±3.8
1.35±0.19
6.5±2.3
49.5±6.2
6.0±1.8
38.0±7.0
DEX2
36.6±1.9
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1.72±0.40
4.7±1.9
45.5±8.1
3.3±0.9
46.0±9.9
2.2 单因素分析：血浆钙离子在哮喘发作后期升高(OA2组高于OB和OA1组，P<0.05)，激素干预后可使其水平下降(OA2组低于DEX2组，P<0.05)。淋巴细胞内钙离子在哮喘发作后期高于早期(OA2高于OA1，P<0.05)，激素干预后血浆保持稳定而细胞内钙持续上升(DEX2高于DEX1，P<0.05)。单核细胞在哮喘发作早期(OA1组)高于其他各组(P<0.01)；嗜中性粒细胞在哮喘发作中升高，早期更明显(OA1组P<0.01)；嗜酸细胞在哮喘后期增高明显，激素干预后下降，且有时间依存性(OA2组高于OB及DEX2组)；淋巴细胞在哮喘发作后期增高(OA2高于其他各组，P<0.01)，激素对其有早期干预作用(DEX1低于其它各组，P<0.01)。
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2.3 多因素相关分析：血浆与细胞内钙离子浓度呈正相关，r=0.708，但有时间差；淋巴细胞及嗜酸细胞的比率与血浆钙离子浓度呈正相关，r=0.842，时间趋势相同。
3 讨论
支气管哮喘发作原因复杂，钙离子亦是一重要参与因子。在某些刺激影响下，胞液中钙离子升高，待达到一定浓度时，即与钙调节蛋白结合，发挥调节作用。但钙离子浓度的增高是一蓄积过程，需要一定时间，我们的检测结果符合这一趋势(OA2组血浆钙离子浓度明显高于OA1组)。钙离子的生理作用绝大多数是通过与调钙蛋白结合而实现的。肌浆中的钙离子超出一定水平，可开始引起平滑肌收缩，与哮喘发作时支气管痉挛有关。钙离子还参与cAMP和cGMP的磷酸化过程，使它们分别转化为ATP和GTP，前者为肥大细胞脱颗粒提供能量，后者大量消耗cGMP[2]，使哮喘发作时，cAMP/cGMP[3]比值失常，进而促进哮喘发作。钙离子和钙调蛋白可激活环核苷酸磷酸二酯酶的活性，在大多数组织中抑制腺苷酸环化酶，减少cAMP的产量，起促喘作用。我们检测哮喘发作后24小时血浆钙明显上升，激素干预后明显下降，而细胞内钙却持续上升，说明血浆钙离子水平可通过激素对钙的重新分布而受到调节和控制。孙保君等[4]用哮喘豚鼠模型检测了肺组织钙ATP酶，发现其活性明显下降，推测哮喘发作时的确存在钙离子调节和/或分布异常。哮喘发作后期嗜酸细胞和淋巴细胞比率达到高峰，表明两者在哮喘发作中即刻反应较弱，而后期应答较强。此趋势与血浆钙变化一致，这两类细胞比率增高、功能活跃，与钙离子调节Ca2+-Mg2+-ATP酶，为其提供能量有关。目前认为哮喘是以嗜酸细胞浸润为主的慢性炎症，我们的检测发现哮喘激发后钙离子及嗜酸细胞、淋巴细胞后期上升明显，与慢性反应性质相符。激素对上述两种细胞的干预作用明显，尤其对哮喘激发后1小时组，表明激素的抗炎作用是即刻性的，与对钙离子的调节有时间一致性。淋巴细胞是体内重要的免疫细胞，激素可使其比率较快降低，这一结果与糖皮质激素有免疫抑制作用[5]的理论相一致。
, 百拇医药
综上所述，过敏性哮喘发作后，血浆与淋巴细胞内钙离子升高，且有时间依存性。嗜酸细胞和淋巴细胞比率后期上升，两者呈正相关。激素对血浆钙离子浓度有稳定作用，对嗜酸及淋巴细胞有抑制作用。
4 参考文献
1 于化鹏，李平升，府 军. 过敏性哮喘豚鼠血小板激活因子的变化及川芎嗪的影响. 中国病理生理学杂志，1995，11(3)：317～320.
2 Nathan C. Nitric oxide as a secretory product of mammalian cells. FASEB J,1992,6(12):3051～3064.
3 曹慧玲，王良瑾，孙 滨. 糖皮质激素对过敏性哮喘血浆及淋巴细胞内cAMP和cGMP的影响. 吉林医学，1997，18(3)：146～147.
4 孙保君，黄念秋，董 伟，等. 钙ATP酶在豚鼠过敏性哮喘发病过程中的作用. 中华结核和呼吸杂志，1993，16(3)：176～178.
5 Anastassiou ED,Paliogianni F,Balow JP,et al. Prostaglandin E2 and other cyclic AMP-elevating agents modulate IL-2 and IL-2R alpha gene expression at multiple levels. J Immunol,1992,148(9):2845～2851., http://www.100md.com