肺炎衣原体感染与哮喘急性发作的关系
作者：潘频华① 吴鄂生② 陈清兰 海镇环 李固本 黄益宇
单位：附属湘雅医院呼吸科 长沙 410008 ①博士研究生 ②导师
关键词：支气管哮喘；肺炎衣原体；感染
湖南医科大学学报990239 肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae)是1989年定名的衣原体新种，它与呼吸系统感染密切相关。肺炎衣原体感染后可引起喘息症状，部分病人感染后被诊断为支气管哮喘或原有哮喘症状加重[1]，这说明肺炎衣原体感染与哮喘发作有关，为此，笔者采用微量免疫荧光试验对近期支气管哮喘反复发作病人进行肺炎衣原体感染检测，旨在探讨其与哮喘发作诱因的关系。
1 对象与方法
1.1 对象 51例哮喘患者，其中男35例，女16例，年龄13～67岁，均为我院1997年9月～1998年1月间门诊及住院病人。所有患者检测前1个月内有急性哮喘发作病史。所有病人均详细记录病史，做血常规+嗜酸粒细胞计数，胸透或胸片检查。
, 百拇医药
对照组为20例无呼吸系统疾病志愿者。其中男11例，女9例，年龄23～55岁。均在1月内无呼吸道感染史。
1.2 方法
1.2.1 血标本 所有受试者均于就诊时取单次外周静脉血1ml，血标本于6h内分离出血清置于-20℃冰箱中待检。
1.2.2 微量免疫荧光试验 取5%甲醛化卵黄囊液与等量TWAR抗原(购自美国华盛顿大学研究基金会)混悬，取微量混悬液轻点于洁净载玻片上，丙酮固定，干燥，依次滴加倍比稀释待检血清(1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256，1∶512，1∶1024)置37℃水浴箱内孵育(IgG 30?!min，IgM 60?!min)，取出用PBS冲洗，再滴加1∶40稀释羊抗人IgG/FITC和兔抗人IgM/FITC(购自华美生物工程公司)，再次同条件孵育，然后用PBS冲洗，Evan's blue复染，缓冲甘油封片，置于荧光显微镜下观察(Nikon, Japan)每组试验用PBS设一阴性对照。
, 百拇医药
1.2.3 急性肺炎衣原体感染判断标准[2] 符合以下三个条件之一者即为阳性：①IgG≥512,②IgM≥32,③双份血清抗体(IgG或IgM)滴度升高4倍以上。既往感染标准为1∶16≤IgG≤1∶256。总感染数即IgG≥1∶16。
1.2.4 类风湿因子(RF)检测 采用速率散射比浊法(美国贝克曼公司Amay-360型仪)对上述所有IgM阳性标本进行RF定量测定，定义RF≥30IU.ml-1为阳性。
1.2.5 统计学处理 采用χ2检验。
2 结果
2.1 肺炎衣原体感染的比较 附表示51例哮喘患者中IgG≥1∶16者41例，总感染率达80.3%，显著高于对照组45%(P<0.01)；其中10例哮喘患者(19.6%)为急性肺炎衣原体感染(IgG≥1∶512，9例，IgM≥1∶32，1例)；全部病人中共发现IgM阳性6例，类风湿因子检测均阴性。
, 百拇医药
附表 肺炎衣原体感染比较 组别
例数
IgG≥1∶16
(总感染率)
IgG≥1∶512
或IgM≥1∶32
哮喘组
51
41(80.3%)①
10
对照组
20
, 百拇医药
9(45%)
0
①与对照组比较P<0.01
2.2 肺炎衣原体感染与哮喘发作诱因的关系 51例哮喘患者中在哮喘急性发作前有急性呼吸道感染诱因者24例，表现为哮喘发作前有不同程度咳嗽、咳痰、咽痛及发热症状。其中8例检出急性肺炎衣原体感染，占33.3%(8/24)，10例急性肺炎衣原体感染患者中2例的胸片示有肺部感染。另有2例符合急性肺炎衣原体感染病人哮喘发作前无明显呼吸道感染史。
3 讨论
肺炎衣原体的常规检测方法有分离培养和免疫荧光试验。分离培养必须在细胞内或鸡胚中才能生长，且分离率低；PCR技术具有快速、特异性强的特点，但尚处于方法建立阶段[3]。目前主要检测方法是采用微量免疫荧光试验检测血清中IgG和IgM抗体，IgM抗体易受血清中类风湿因子(RF)影响。类风湿因子阳性率随年龄增加而增加，在大于50岁时人群中类风湿因子阳性高达15%，因此，检测肺炎衣原体IgM抗体时，需常规检测RF[4]。
, 百拇医药
本组结果显示支气管哮喘患者肺炎衣原体总感染率高达80.3%，显著高于正常人，可能与哮喘病人平时易发生呼吸道感染有关。其中10例为急性肺炎衣原体感染(19.6%)，国内操乐杰等[2]曾检测10例哮喘急性发作病人，3例为急性肺炎衣原体感染，阳性率(30%)高于本结果，但其未做类风湿因子的检测。在24例有急性呼吸道感染诱因的哮喘发作病人中，8例检出急性肺炎衣原体感染。另有2例哮喘患者血清学检测符合急性肺炎衣源体感染，但病史中哮喘发作前无明显呼吸道感染症状，可能为隐性感染。以上表明肺炎衣原体感染为哮喘急性发作的重要诱因之一，对因急性呼吸道感染而诱发哮喘发作的患者，在非特异性抗炎治疗同时，可适当兼顾抗肺炎衣原体的治疗。
中国图书分类号 R563.1 R562.25
参考文献
[1]Hahn DL, Doge RW, Golubjatnikov R. Association of Chla-
, 百拇医药
mydia pneumoniae (strain TWAR) infection with wheezing, asthmatic bronchitis, and adult-onset asthma. JAMA, 1991,266(2):225-230
[2]操乐杰，王明丽，吴向辉，等.痰培养及血清学联合检测肺炎衣原体性急性呼吸道感染.中华结核和呼吸杂志，1997，20(2)：95-97
[3]苏明权，穆士杰，马越云，等.聚合酶链反应检测肺炎衣原体方法的建立与初步应用.中华医学检验杂志，1997，20(4)：223-225
[4]Verkooyen RP, Hazenberg MA, van Haaren GH, et al. Age-related interference with Chlamydia pneumoniae microimmunofluorescence serology due to circulating rheumtoid factor. J Clin Microbiol, 1992,30(5):1287-1290
收稿日期：1998-01-16, 百拇医药(潘频华① 吴鄂生② 陈清兰 海镇环 李固本 黄益宇)
单位：附属湘雅医院呼吸科 长沙 410008 ①博士研究生 ②导师
关键词：支气管哮喘；肺炎衣原体；感染
湖南医科大学学报990239 肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae)是1989年定名的衣原体新种，它与呼吸系统感染密切相关。肺炎衣原体感染后可引起喘息症状，部分病人感染后被诊断为支气管哮喘或原有哮喘症状加重[1]，这说明肺炎衣原体感染与哮喘发作有关，为此，笔者采用微量免疫荧光试验对近期支气管哮喘反复发作病人进行肺炎衣原体感染检测，旨在探讨其与哮喘发作诱因的关系。
1 对象与方法
1.1 对象 51例哮喘患者，其中男35例，女16例，年龄13～67岁，均为我院1997年9月～1998年1月间门诊及住院病人。所有患者检测前1个月内有急性哮喘发作病史。所有病人均详细记录病史，做血常规+嗜酸粒细胞计数，胸透或胸片检查。
, 百拇医药
对照组为20例无呼吸系统疾病志愿者。其中男11例，女9例，年龄23～55岁。均在1月内无呼吸道感染史。
1.2 方法
1.2.1 血标本 所有受试者均于就诊时取单次外周静脉血1ml，血标本于6h内分离出血清置于-20℃冰箱中待检。
1.2.2 微量免疫荧光试验 取5%甲醛化卵黄囊液与等量TWAR抗原(购自美国华盛顿大学研究基金会)混悬，取微量混悬液轻点于洁净载玻片上，丙酮固定，干燥，依次滴加倍比稀释待检血清(1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256，1∶512，1∶1024)置37℃水浴箱内孵育(IgG 30?!min，IgM 60?!min)，取出用PBS冲洗，再滴加1∶40稀释羊抗人IgG/FITC和兔抗人IgM/FITC(购自华美生物工程公司)，再次同条件孵育，然后用PBS冲洗，Evan's blue复染，缓冲甘油封片，置于荧光显微镜下观察(Nikon, Japan)每组试验用PBS设一阴性对照。
, 百拇医药
1.2.3 急性肺炎衣原体感染判断标准[2] 符合以下三个条件之一者即为阳性：①IgG≥512,②IgM≥32,③双份血清抗体(IgG或IgM)滴度升高4倍以上。既往感染标准为1∶16≤IgG≤1∶256。总感染数即IgG≥1∶16。
1.2.4 类风湿因子(RF)检测 采用速率散射比浊法(美国贝克曼公司Amay-360型仪)对上述所有IgM阳性标本进行RF定量测定，定义RF≥30IU.ml-1为阳性。
1.2.5 统计学处理 采用χ2检验。
2 结果
2.1 肺炎衣原体感染的比较 附表示51例哮喘患者中IgG≥1∶16者41例，总感染率达80.3%，显著高于对照组45%(P<0.01)；其中10例哮喘患者(19.6%)为急性肺炎衣原体感染(IgG≥1∶512，9例，IgM≥1∶32，1例)；全部病人中共发现IgM阳性6例，类风湿因子检测均阴性。
, 百拇医药
附表 肺炎衣原体感染比较 组别
例数
IgG≥1∶16
(总感染率)
IgG≥1∶512
或IgM≥1∶32
哮喘组
51
41(80.3%)①
10
对照组
20
, 百拇医药
9(45%)
0
①与对照组比较P<0.01
2.2 肺炎衣原体感染与哮喘发作诱因的关系 51例哮喘患者中在哮喘急性发作前有急性呼吸道感染诱因者24例，表现为哮喘发作前有不同程度咳嗽、咳痰、咽痛及发热症状。其中8例检出急性肺炎衣原体感染，占33.3%(8/24)，10例急性肺炎衣原体感染患者中2例的胸片示有肺部感染。另有2例符合急性肺炎衣原体感染病人哮喘发作前无明显呼吸道感染史。
3 讨论
肺炎衣原体的常规检测方法有分离培养和免疫荧光试验。分离培养必须在细胞内或鸡胚中才能生长，且分离率低；PCR技术具有快速、特异性强的特点，但尚处于方法建立阶段[3]。目前主要检测方法是采用微量免疫荧光试验检测血清中IgG和IgM抗体，IgM抗体易受血清中类风湿因子(RF)影响。类风湿因子阳性率随年龄增加而增加，在大于50岁时人群中类风湿因子阳性高达15%，因此，检测肺炎衣原体IgM抗体时，需常规检测RF[4]。
, 百拇医药
本组结果显示支气管哮喘患者肺炎衣原体总感染率高达80.3%，显著高于正常人，可能与哮喘病人平时易发生呼吸道感染有关。其中10例为急性肺炎衣原体感染(19.6%)，国内操乐杰等[2]曾检测10例哮喘急性发作病人，3例为急性肺炎衣原体感染，阳性率(30%)高于本结果，但其未做类风湿因子的检测。在24例有急性呼吸道感染诱因的哮喘发作病人中，8例检出急性肺炎衣原体感染。另有2例哮喘患者血清学检测符合急性肺炎衣源体感染，但病史中哮喘发作前无明显呼吸道感染症状，可能为隐性感染。以上表明肺炎衣原体感染为哮喘急性发作的重要诱因之一，对因急性呼吸道感染而诱发哮喘发作的患者，在非特异性抗炎治疗同时，可适当兼顾抗肺炎衣原体的治疗。
中国图书分类号 R563.1 R562.25
参考文献
[1]Hahn DL, Doge RW, Golubjatnikov R. Association of Chla-
, 百拇医药
mydia pneumoniae (strain TWAR) infection with wheezing, asthmatic bronchitis, and adult-onset asthma. JAMA, 1991,266(2):225-230
[2]操乐杰，王明丽，吴向辉，等.痰培养及血清学联合检测肺炎衣原体性急性呼吸道感染.中华结核和呼吸杂志，1997，20(2)：95-97
[3]苏明权，穆士杰，马越云，等.聚合酶链反应检测肺炎衣原体方法的建立与初步应用.中华医学检验杂志，1997，20(4)：223-225
[4]Verkooyen RP, Hazenberg MA, van Haaren GH, et al. Age-related interference with Chlamydia pneumoniae microimmunofluorescence serology due to circulating rheumtoid factor. J Clin Microbiol, 1992,30(5):1287-1290
收稿日期：1998-01-16, 百拇医药(潘频华① 吴鄂生② 陈清兰 海镇环 李固本 黄益宇)