四逆汤方药对缺血心肌的影响*
作者：陈建萍 谭红梅 吴伟康 罗汉川 梁天文 黄河清 赵湘茹
单位：中山医科大学中西医结合研究所，广州，510089
关键词：中药复方；缺血心肌；冠脉流量；脂质过氧化
第一军医大学学报990209 摘要：在Langedorff心脏灌流模型上观察了四逆汤方中主药不同配伍及不同比例对大鼠离体心肌冠脉流量影响。同时观察了四逆汤方药中的君臣药物的组配对小鼠心肌超氧化物歧化酶(SOD)的活性、丙二醛(MDA)含量变化的影响。四逆汤不同配伍对冠脉流量有明显的影响，而不同比例对冠脉流量无明显的影响，单味药与君臣配伍对小鼠心肌组织SOD，MDA的作用有明显差异，提示中药配伍运用对机体的作用优于单味药物。
中图分类号：R285.6
四逆汤有保护缺血心肌的作用[1]。为了进一步全面评价四逆汤方药对缺血心肌的影响，本文从四逆汤方药中君臣药物不同配伍(拆方研究)不同比例来观察四逆汤对缺血心肌的保护效应，以探讨中药复方的作用机理。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 四逆汤方药对缺血心肌冠脉流量的影响 动物为SD大鼠，中山医科大学实验动物中心提供，体质量180～250 g，雌雄不拘，随机分为单纯附子组、单纯干姜组、附子与干姜(5:3)组、附子与干姜(5:2)组及单纯缺血组(每组各6只大鼠)。四逆汤各单味(方中君臣)药物，附子，干姜。经广州中医药大学中药鉴定教研室鉴定，采用Langendorff 离体心脏灌流模型[2]，缺血组用Krebs-Henselit液[3](简称K-H液)充入含95% O2和5% CO2的混合气，灌流20 min后，记录冠脉流量，然后用每100 ml灌流液中加入10 U垂体后叶素(简称Pit)的灌流液化气灌流，分别记录pit灌流5、10、15、20、25、30 min 5个时点的冠脉流量，余组为K-H液灌流20 min后，在K-H液中加入pit(剂量同上)的同时，在100 ml上液中加入上述4种不同的药物1 ml(原药浓度为100%，即1 ml 药液中含1 g生药)，其它过程同缺血组。通过实验自身比较待加Pit前后变化百分率。
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1.2 四逆汤方药对缺血心肌收缩力的影响 分组与方法同上，各组用LMS-2B型二导生理记录仪全程记录心肌收缩曲线观察收缩力减一半(1/2)所需的时间[R1/2-T(min)]，即以自身灌流平衡末期收缩幅度为基准，计算缺血后收缩幅度降至基准波幅的50%需要的时间。
1.3四逆汤方药对缺血心肌SOD，MDA的影响 昆明小鼠，中山医科大学实验动物中心提供，体重(23±1)g，分组为正常组、缺血组、单纯附子组、单纯干姜组、附子：干姜(5:2)及附子：干姜(5:3)组。各组雌雄各半，n＝10，处理方法同上，剂量0.1 ml/20 g。连续灌胃3 d，第3天复制心肌缺血(Pit腹腔注射，剂量20 U/kg，注射后60 min取出心脏，在1～4 ℃条件下将心肌制成生理盐水匀浆，用TBA法[4]测定心肌MDA含量，用邻笨三酚法[5]测定心肌SOD活性。并就各药物作用强度采用MDA生成抑制率表示：
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实验数据采用多样本的方差分析进行统计学处理。
2 结果
2.1 四逆汤方药对缺血心肌冠脉流量的影响(表1)。
表1 四逆汤方药拆方对缺血心肌冠脉流量的比较(
±s,n=6) T(min)
附子：干姜(5:3)组
附子：干姜(5:2)组
单纯附子组
缺血组
单纯干姜组
5
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71.00±4.82
79.91±11.76*△
59.66±13.30
55.11±14.31
58.21±10.10
10
71.65±6.13*▲
70.69±8.57*△
46.67±10.84
46.85±19.10
43.65±13.39
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15
69.05±7.49*△
68.65±7.34*△
37.79±9.22
36.56±20.06
34.33±9.88
20
66.78±6.36*△
68.26±9.00*△
33.61±8.07
28.91±13.14
, 百拇医药
29.41±8.68
25
63.56±8.64*△
65.92±7.87 *△
29.81±7.72▲
19.87±7.40
22.32±7.80
30
62.06±10.51*△
64.31±7.86*△
, 百拇医药
26.66±9.60▲
16.32±4.16
19.22±6.65
*：与同一时间单纯附子组，单纯干姜组比较，P<0.01；△：与同一时间对照组比较；P<0.01；▲：与同一时间缺血组比较，P<0.05
2.2 四逆汤方药对缺血心肌收缩力的影响(表2)。
表2 再灌期间心肌收缩力衰竭减一半的时间比较(±s,n=6)
附子：干姜(5:3)组
附子：干姜(5:2)组
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单纯附子组
缺血组
单纯干姜组
T(min)
18.08±5.71*△
18.54±7.13*△
5.50±2.56
4.92±2.00
5.57±3.23
*：表示与纯附子组比较，P<0.01；△：表示与缺血组比较，P<0.01
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2.3 四逆汤方药对心肌MDA的影响(表3)。
表3 四逆汤方药对缺血心肌MDA的影响(±s,n=6) 分 组
心肌MDA含量(nmol/0.1g)
心肌MDA生成抑制率(%)
对 照
48.6±5.9
缺 血
71.5±12.9▲
附 子
57.2±4.9
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59.6
干 姜
66.8±2.9
20.5
附子+干姜
52.8±10.0
81.7
▲：表示与对照组，干姜+附子组比较，P<0.05
2.4 四逆汤方药对心肌SOD的影响(表4)。
表4 四逆汤方药对心肌SOD的影响(±s,n=6) 分 组
, 百拇医药
心肌SOD活性(U/0.1g)
对 照
114.8±16.6*
缺 血
94.4±9.5
附 子
95.2±9.7
干 姜
99.3±10.2
附子+干姜
110.5±12.2*
*：表示与缺血组，单纯附子组比较，P<0.05
, 百拇医药
以上实验表明四逆汤方主要药物合用对缺血心肌有双重保护作用。既增加冠脉流量，又能清除自由基，增强机体抗氧化的能力。
3 讨论
四逆汤具有明显抗自由基损伤，改善冠脉流量的作用[5]。本实验结果表明：单纯附子对改善冠脉流量与对照组比较未见明显的差异，而附子中加入干姜其冠脉流量明显得以改善(P <0.01)，对心肌收缩力的影响也呈现出同样的结果。单纯附子组对心肌收缩力影响与对照组比较在最初的时间段(缺血20 min以内)未见明显的差异，25 min以后开始表现出一定的差异，而附子组与甘姜配伍对心肌收缩力衰减一半的时间明显延长(P <0.01)。在一定范围内附子、干姜两药配伍比例不同，对离体大鼠心冠脉流量及心肌收缩力没有显著性的差异。干姜的实验研究并未提示干姜有增加冠脉流量及对心肌收缩力的作用[6]，但与附子组成方药则有显著的变化，自由基生成及脂质过氧化是心肌缺血损伤的主要原因，本文从自由基损伤的角度，观察了药物对SOD、MDA的影响，其作用与冠脉流量的作用一致，都是单味药物不及君臣二药合用，君臣药物合用能明显升高SOD的活性，降低MDA的含量，这些结果进一步佐证了附子与干姜的协同作用[5]，中药复方并非两药的简单相加，而具有相须、相使、相乘、相恶的关系。故《本草求真》论干姜云："合以附子同投，则能回阳立效"，附子，干姜不同比例研究为四逆汤临床运用的配伍比例提供了良好的理论基础，也为四逆汤的剂改及成方研究奠定了基础。
, 百拇医药
参考文献
1 吴伟康，尧宏斌，侯 灿等. 四逆汤保护缺血心肌功能实验研究.中国中医基础医学杂志，1995,(2):24
2 徐淑云主编. 药理实验方法学. 第二版.北京: 人民卫生出版社, 1992.865～866
3 Guarnieri C, Flamigni F, Caldarra CM. Role of oxygen in the celluardamage induced by reoxygenation of hypixic heart. J Mol Cell Cardiol ,1980,12:797
4 Ohkawa H, Ohishi N, Yagi K. Assay for lipid peroxiodes in animal tissues by thiobarbiturie acid reaction. Analy Biochem, 1979,95:351
5 Marklund S, Marklund G. Involvement of the superoxide anion radical in the autoxidation of pyrogallol and a convenient assay for superroxide dismutase. Eur J Biochem, 1974,47:469
6 吴伟康,侯 灿,罗汉川等.四逆汤保护缺血心肌作用的实验研究.中国中西医结合杂志,1994,(14)90:549
(收稿日期：1998-10-12), 百拇医药
单位：中山医科大学中西医结合研究所，广州，510089
关键词：中药复方；缺血心肌；冠脉流量；脂质过氧化
第一军医大学学报990209 摘要：在Langedorff心脏灌流模型上观察了四逆汤方中主药不同配伍及不同比例对大鼠离体心肌冠脉流量影响。同时观察了四逆汤方药中的君臣药物的组配对小鼠心肌超氧化物歧化酶(SOD)的活性、丙二醛(MDA)含量变化的影响。四逆汤不同配伍对冠脉流量有明显的影响，而不同比例对冠脉流量无明显的影响，单味药与君臣配伍对小鼠心肌组织SOD，MDA的作用有明显差异，提示中药配伍运用对机体的作用优于单味药物。
中图分类号：R285.6
四逆汤有保护缺血心肌的作用[1]。为了进一步全面评价四逆汤方药对缺血心肌的影响，本文从四逆汤方药中君臣药物不同配伍(拆方研究)不同比例来观察四逆汤对缺血心肌的保护效应，以探讨中药复方的作用机理。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 四逆汤方药对缺血心肌冠脉流量的影响 动物为SD大鼠，中山医科大学实验动物中心提供，体质量180～250 g，雌雄不拘，随机分为单纯附子组、单纯干姜组、附子与干姜(5:3)组、附子与干姜(5:2)组及单纯缺血组(每组各6只大鼠)。四逆汤各单味(方中君臣)药物，附子，干姜。经广州中医药大学中药鉴定教研室鉴定，采用Langendorff 离体心脏灌流模型[2]，缺血组用Krebs-Henselit液[3](简称K-H液)充入含95% O2和5% CO2的混合气，灌流20 min后，记录冠脉流量，然后用每100 ml灌流液中加入10 U垂体后叶素(简称Pit)的灌流液化气灌流，分别记录pit灌流5、10、15、20、25、30 min 5个时点的冠脉流量，余组为K-H液灌流20 min后，在K-H液中加入pit(剂量同上)的同时，在100 ml上液中加入上述4种不同的药物1 ml(原药浓度为100%，即1 ml 药液中含1 g生药)，其它过程同缺血组。通过实验自身比较待加Pit前后变化百分率。
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1.2 四逆汤方药对缺血心肌收缩力的影响 分组与方法同上，各组用LMS-2B型二导生理记录仪全程记录心肌收缩曲线观察收缩力减一半(1/2)所需的时间[R1/2-T(min)]，即以自身灌流平衡末期收缩幅度为基准，计算缺血后收缩幅度降至基准波幅的50%需要的时间。
1.3四逆汤方药对缺血心肌SOD，MDA的影响 昆明小鼠，中山医科大学实验动物中心提供，体重(23±1)g，分组为正常组、缺血组、单纯附子组、单纯干姜组、附子：干姜(5:2)及附子：干姜(5:3)组。各组雌雄各半，n＝10，处理方法同上，剂量0.1 ml/20 g。连续灌胃3 d，第3天复制心肌缺血(Pit腹腔注射，剂量20 U/kg，注射后60 min取出心脏，在1～4 ℃条件下将心肌制成生理盐水匀浆，用TBA法[4]测定心肌MDA含量，用邻笨三酚法[5]测定心肌SOD活性。并就各药物作用强度采用MDA生成抑制率表示：
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实验数据采用多样本的方差分析进行统计学处理。
2 结果
2.1 四逆汤方药对缺血心肌冠脉流量的影响(表1)。
表1 四逆汤方药拆方对缺血心肌冠脉流量的比较(
±s,n=6) T(min)附子：干姜(5:3)组
附子：干姜(5:2)组
单纯附子组
缺血组
单纯干姜组
5
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71.00±4.82
79.91±11.76*△
59.66±13.30
55.11±14.31
58.21±10.10
10
71.65±6.13*▲
70.69±8.57*△
46.67±10.84
46.85±19.10
43.65±13.39
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69.05±7.49*△
68.65±7.34*△
37.79±9.22
36.56±20.06
34.33±9.88
20
66.78±6.36*△
68.26±9.00*△
33.61±8.07
28.91±13.14
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29.41±8.68
25
63.56±8.64*△
65.92±7.87 *△
29.81±7.72▲
19.87±7.40
22.32±7.80
30
62.06±10.51*△
64.31±7.86*△
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26.66±9.60▲
16.32±4.16
19.22±6.65
*：与同一时间单纯附子组，单纯干姜组比较，P<0.01；△：与同一时间对照组比较；P<0.01；▲：与同一时间缺血组比较，P<0.05
2.2 四逆汤方药对缺血心肌收缩力的影响(表2)。
表2 再灌期间心肌收缩力衰竭减一半的时间比较(
±s,n=6)附子：干姜(5:3)组
附子：干姜(5:2)组
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单纯附子组
缺血组
单纯干姜组
T(min)
18.08±5.71*△
18.54±7.13*△
5.50±2.56
4.92±2.00
5.57±3.23
*：表示与纯附子组比较，P<0.01；△：表示与缺血组比较，P<0.01
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2.3 四逆汤方药对心肌MDA的影响(表3)。
表3 四逆汤方药对缺血心肌MDA的影响(
±s,n=6) 分 组心肌MDA含量(nmol/0.1g)
心肌MDA生成抑制率(%)
对 照
48.6±5.9
缺 血
71.5±12.9▲
附 子
57.2±4.9
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59.6
干 姜
66.8±2.9
20.5
附子+干姜
52.8±10.0
81.7
▲：表示与对照组，干姜+附子组比较，P<0.05
2.4 四逆汤方药对心肌SOD的影响(表4)。
表4 四逆汤方药对心肌SOD的影响(
±s,n=6) 分 组, 百拇医药
心肌SOD活性(U/0.1g)
对 照
114.8±16.6*
缺 血
94.4±9.5
附 子
95.2±9.7
干 姜
99.3±10.2
附子+干姜
110.5±12.2*
*：表示与缺血组，单纯附子组比较，P<0.05
, 百拇医药
以上实验表明四逆汤方主要药物合用对缺血心肌有双重保护作用。既增加冠脉流量，又能清除自由基，增强机体抗氧化的能力。
3 讨论
四逆汤具有明显抗自由基损伤，改善冠脉流量的作用[5]。本实验结果表明：单纯附子对改善冠脉流量与对照组比较未见明显的差异，而附子中加入干姜其冠脉流量明显得以改善(P <0.01)，对心肌收缩力的影响也呈现出同样的结果。单纯附子组对心肌收缩力影响与对照组比较在最初的时间段(缺血20 min以内)未见明显的差异，25 min以后开始表现出一定的差异，而附子组与甘姜配伍对心肌收缩力衰减一半的时间明显延长(P <0.01)。在一定范围内附子、干姜两药配伍比例不同，对离体大鼠心冠脉流量及心肌收缩力没有显著性的差异。干姜的实验研究并未提示干姜有增加冠脉流量及对心肌收缩力的作用[6]，但与附子组成方药则有显著的变化，自由基生成及脂质过氧化是心肌缺血损伤的主要原因，本文从自由基损伤的角度，观察了药物对SOD、MDA的影响，其作用与冠脉流量的作用一致，都是单味药物不及君臣二药合用，君臣药物合用能明显升高SOD的活性，降低MDA的含量，这些结果进一步佐证了附子与干姜的协同作用[5]，中药复方并非两药的简单相加，而具有相须、相使、相乘、相恶的关系。故《本草求真》论干姜云："合以附子同投，则能回阳立效"，附子，干姜不同比例研究为四逆汤临床运用的配伍比例提供了良好的理论基础，也为四逆汤的剂改及成方研究奠定了基础。
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参考文献
1 吴伟康，尧宏斌，侯 灿等. 四逆汤保护缺血心肌功能实验研究.中国中医基础医学杂志，1995,(2):24
2 徐淑云主编. 药理实验方法学. 第二版.北京: 人民卫生出版社, 1992.865～866
3 Guarnieri C, Flamigni F, Caldarra CM. Role of oxygen in the celluardamage induced by reoxygenation of hypixic heart. J Mol Cell Cardiol ,1980,12:797
4 Ohkawa H, Ohishi N, Yagi K. Assay for lipid peroxiodes in animal tissues by thiobarbiturie acid reaction. Analy Biochem, 1979,95:351
5 Marklund S, Marklund G. Involvement of the superoxide anion radical in the autoxidation of pyrogallol and a convenient assay for superroxide dismutase. Eur J Biochem, 1974,47:469
6 吴伟康,侯 灿,罗汉川等.四逆汤保护缺血心肌作用的实验研究.中国中西医结合杂志,1994,(14)90:549
(收稿日期：1998-10-12), 百拇医药