蛇毒蛋白C激活剂的研究进展
作者：侯力强 余清声 管锦霞
单位：广州医学院广州蛇毒研究所，广州 510182
关键词：蛋白C；激活剂；蛇毒；Protac；AB-C；ACC-C
广州医学院学报990231 中图分类号 Q51
蛋白C(Protein C，PC)是一种血浆糖蛋白，为维生素K依赖性蛋白质，在血浆中以酶原形式存在。在内皮细胞表面凝血酶-血栓调节蛋白(Thrombin Thrombomodulin, T-TM)复合物的作用下,它被激活为活化蛋白C(Activated Protein C，APC)，APC有催化蛋白水解作用，能快速而特异地降解血液凝血因子Ⅴa和Ⅷa，抑制内、外源性凝血、从而产生强有力的抗凝效应。同时，APC也能中和组织型纤溶酶原活化物抑制物(t-PAI)，刺激血管内皮细胞释放组织型纤溶酶原激活物(t-PA)，从而发择促纤溶作用[1，2]。
, http://www.100md.com
在体内，T-TM复合物是PC活化的主要生理性激活物[3]；在体外,其它一些非生理性激活物亦能激活PC，这些激活物包括胰蛋白酶、来源于蝰蛇(Russells Viper)毒中的因子X活化组份和来源于多种蛇毒的PC特异性激活剂[3，4]。下面就蛇毒PC特异性激活剂作一综述。
1 蛇毒PC激活剂的分布
自1986年Stocker等首次从铜头蝮(Agkistrodon Contortrix Contortrix)蛇毒中发现并分离出PC活化剂以来，迄今已发现近20种蛇毒中含有PC活化组份，它们几乎都是蝰科蛇毒、其中分布最多的又属蝮亚科蝮属蛇毒。Kogan等曾对9神蝮属蛇毒进行研究，发现除尖吻蝮(Agkistrodon acutus)蛇毒外，其余8种蛇毒均含有PC活化组份。迄今已确认含有PC活化组份的有：Agkistrodon C. contortrix,A .C.Mokasen,A.C.Pictigaster,A.P.Piscivorus,A.P.leucostoma.A.bilineatus,Bothrops pradoi,B.Moojeni,Vipera russellii,V.Lebetina,Cerastes ceraste,A.Saxatilis,A.blomhoffi ussuriensis,A.halys caraganus,A.halys halys[5,6]。
, http://www.100md.com
2 蛇毒PC救活剂的分类及理化性质
经过学者多年的研究表明,一些蝮属蛇(Agkistrodon)毒中肯定含有特异性PC激活剂。但有关它们的分子量、等电点、激活或抑制有许多不同意见，尤其是Agkistrodon halys,A.blomhoffi和A.saxatilis方面的资料存在显著差异。
从目前获得的资料看，Agkistrodon蛇属可分成两组：第一组由A. contortrix contortrix,A.bilineatus和A. piscivorus组成，它们含有的PC激活剂分子量为32～39kDa,能有效地激活人类PC，而对鼠血浆PC的效应较小，其最适pH值为7.5～8.5；另一组包括 A. saxatilis,A.blomhoffi ussuriensis,A halys caraganus和A.halys halys,其PC激活剂分子量为45～55kDa，其最适pH值为5.0～6.5[5]。Protac和AB-C为分别从上述蛇毒中提取的特异性PC激活剂，它们在理化性质、生化特性及作用机理等方面存在显著差别。
, http://www.100md.com
2.1 Protac
自从Stocker等人于1986年从铜头蝮蛇毒(Agkistrodon Contortrix Contortrix Venom,ACCV)中发现并分离出PC活化剂以来，已有多个实验室从ACCV中分离并纯化了特异性PC激活剂，统一命名为“Protac”。
Martinoli和Stocker[1]提纯的Protac在SDS-PAGE中分子量为37，600±550，含糖量约20%，为单链结构，等电点pI＝3.0±0.3。①Protac对酸碱度和温度的变化有较强的耐受性，它可以经受pH3～8、70℃、10min或pH2～8、20℃、24h的处理而保持活性。②Protac对多种生物抑制剂及变性剂有很强的耐受性，不受巯基蛋白酶抑制剂碘乙酸、金属蛋白酶抑制剂(EDTA)、丝氨酸蛋白酶抑制剂二异丙酯氟磷酸(DFP)、凝血酶抑制剂抑肽酶等抑制。③Protac激活血浆PC，活性完全，不需辅因子参加,特异性强,除激活PC外,不引起其它血浆蛋白如因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ、前激肽释放酶、纤溶酶等的激活或活性改变[7]。
, 百拇医药
Klein和Walker[8]报道的Protac在SDS-PAGE中分子量为20，000，有微弱的凝血酶样作用，可使纤维蛋白原凝固、对凝血酶、因子V、X没有生物学作用，亦无酰基水解活性，其生物活性受多种生物抑制刺及变性剂如DFP、EDTA、大豆胰蛋白酶抑制剂(Soybean Trypsin Inhibitor)等抑制。
上述两组科学家从ACCV中提取的Protac,无论从理化性质、生物稳定性方面，还是从生物活性方面都存在一定的差异，这可能是由于蛇的产地、蛇毒的分离手段与条件等因素不同而引起。
2.2 AB-C
Tomohiro等[9]从Agkistrodon bilineatus (tropical moccasin)蛇毒中分离并纯化了一种PC激活剂，作者将其命名为“AB-C’。AB-C是一种糖蛋白、在SDS-PAGE中分子量为38，000，为单链结构，其氨基端的残基为缬氨酸。AB-C能水解许多精氨酸三肽PNA(Arginine tripeptide pnitroanilide)底物，该活性受几种丝氨酸蛋白酶的抑制。AB-C能快速激活人和牛PC。
, http://www.100md.com
Tomohiro[9]对AB-C进行氨基酸末端序列分析，表明在第13位氨基酸残基处为精氨酸，而除了ACC-C、gabonase和Crotalase外，几乎所有丝氨酸蛋白酶序列在这一位置均为脯氨酸。AB-C与Protac的显著差异还在于不同的蛇毒产率，1gTropical Moccasin蛇毒可提取纯AB-C约40mg，而等量的ACCV只能提取8～10mg。这种产出率方面的显著差异，对于选择蛇毒进行大规模PC激活剂的提纯，具有十分重要的意义。
2.3 ACC-C
McMullen 等从铜头蝮蛇毒中分离纯化出一种PC激活剂，将其取名为“ACC-C”。对其一级结构的测定表明，该激活剂是一种由231个氨基酸残基组成的胰蛋白酶型丝氨酸蛋白酶，与其它丝氨酸蛋白酶相似，其活性位点由His40、Asp85和Ser177组成,在Asn21、Asn78和Asn129处分别有一个N端连接的糖化位点。比较研究表明，其氨基酸序列与其它蛇毒蛋白酶具有高度的序列一致性[6]。
, http://www.100md.com
3 蛇毒PC激活剂的作用机制
Protac对PC的激活机制，已知不是象凝血酶那样使PC重链N端裂解下一段短肽后使PC激活，受Protac活化的PC未发生一级结构的改变。用凝胶层析和免疫电泳技术都证明，Protac与PC相互作用后的混合物仍只是分子量为37，600的Protac和分子量为62，000的PC组成，通过偶联有Protac的亲和层析柱而形成的活化PC也未发生分子量的改变[7，10]。
Tomohiro等[9]将AB-C与人类PC以1∶250酶：底物重量比混合温育、30min内PC被完全激活，将温育混合物用SDS-PAGE检测，发现AB-C裂解PC的重链，这种裂解与活化PC的氨基酸水解活性及抗凝活性的形成相一致。进一步研究表明，AB-C对人类PC的激活、是通过从PC重链的氨基末端裂解下一个12肽后实现的。
Francis RB等人[11]认为蛇毒PC激活剂可能通过与凝血酶同样的方式，裂解PC的重链，从而激活PC，但也不能排除激活剂与PC形成复合物的可能性。至于其裂解部位是否与凝血酶的相同，尚不清楚。
, http://www.100md.com
Klein和Walker的研究表明，当高浓度活化剂与PC孵育时，可进一步引起PC轻链裂解，从而导致PC活性的丧失。
4 蛇毒PC激活剂的应用
由于蛇毒PC激活剂具有特异性强的优点。因此把它应用于PC的活性测定可以克服传统方法的缺陷。传统的PC：C测定方法大致分三步：①将血液中的PC吸附到Al(OH)3或枸橼酸钡上。②用磷酸盐缓冲液将PC洗脱下来。③将洗脱出的PC用T-TM复合物去激活，再用抗凝血酶Ⅲ-肝素抑制过量的凝血酶，用硫酸鱼精蛋白中和肝素，最后利用发色底物S2238或KPTT测定其活性。该方法存在三大缺陷：活化时间长、不能直接用血浆进行测定、必须采用较为繁琐的中和步骤来消除凝血酶的干扰。由于蛇毒PC激活剂具有活性完全、特异性强、能快速地激活血浆PC的特点，通过它建立起来的PC：C测定方法避免了多种干扰因素，易于实现标准化、仪器化和自动化。该方法的主要优点为：①能测定全血中PCa的水平。②操作简便、反应迅速，适于大量样品的检测。③可重复性好，与免疫检测值有良好的相关性[7，12，13]。由此可见、蛇毒PC激活剂是一种理想的PC活化剂，其应用于PC活性检测的前景是十分广阔的[14]。
, 百拇医药
自发性深静脉血栓(DVT)在西方发病率为1/1000[15]，其中10%～15%的血栓病与抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)、蛋白C(PC)、蛋白S(PS)、纤溶酶原(Plg)等的遗传性缺乏相关，20%～40%患者与活化蛋白C抵抗症(APCR)相关[16]。APCR是由于因子V基因发生单个位点突变(1691G→A)，导致因子V分子氨基酸序列506Arg→Gln，突变的因子V虽保持促凝活性，但对活化PC的裂解作用敏感性大大降低，使因子Va对活化PC的灭活产生抵抗作用。研究表明，利用蛇毒PC激活剂建立起来的APCR筛选方法，具有简便、快速、高效的优点。适用于大规模人群筛查，为APCR阳性患者的治疗提供准确依据[17，18]。
参考文献
1 Esmon CT，Ding W.The protein c pathway:New insights.Thromb Haemost,1997；78(1):70～74
, http://www.100md.com
2 Vindigni A.White CE.Energetic of thrombin-thrombomodulin interaction.Biochemistry,1997；36(22):6674～6681
3 王振义，李家增，阮长耿.血栓与止血基础理论与临床.上海科学技术出版社，1996；9：93～96
4 王钦红.抗活化的蛋白C是引起静脉血栓形成的一个重要原因.中华血液学杂志，1996；17(9)：499～501
5 Kogan,et al.Comparative study of protein c activators from the Agkistrodon snake venoms.Thromb Rse,1991；62:775～780
6 符民桂，管锦霞.蛇毒蛋白C活化剂的研究进展.国外医学.输血及血液学分册，1996；19(6)：367～369
, 百拇医药
7 黄文瑶.Protac-一种新的蛋白C活化剂.国外医学.输血及血液学分册，1991；14(4)：206～208
8 Walter Kisiel,et al.Isolation of a protein c activators from Southern Copperhead Venom.Biochemical and Biophysical Research Communications,1987；143(3):917～922
9 Tomohiro,et al.Isolation and characterization of a protein c activator from Tropical Moccasin venom.Thromb Res,1990；58:593～602
10 Sturzebecher.Inhibitor of the protein c activator protac,a serine proteinase from the venom of the Southern Copperhead Snake Agkistrodon Contortrix Contortrix,Toxicon,1991；29(2):151～155
, 百拇医药
11 Francis RB,et al.Rapid amidolytic assay of protein c in whole plasma using an activator from the venom of Agkistrodon Contortrix.A.J.C.P,1987；47:85～91
12 Kraus M,et al.The PCAT-a single screening assay for assessing the functionality of the protein c anticoagulant pathway.Thromb Res,1995；79:217
13 瞿国伟，王毅.蝮蛇毒作激活剂的发色底物比色法测定人血浆蛋白C活性.蛇志，1995；7(2)：4～5
14 Kogan,et al.Protein c activator from the venom of Agkistrodon blomhoffi ussuriensis retards thrombus formation in the arteriovenous shunt in rats.Thromb Res,1993；70:385～393
, 百拇医药
15 Nordstrom M，et al.A prospective study of the incidence of deep-vein thrombosis within a defined urban population.J Intern Med,1992；232:155～160
16 郑艳珍，朱定尔，周伯通.PC基因新突变His134Asn所致I型PC缺乏症.中华血液学杂志，1998；19(3)：138～142
17 庄俊华等.活化蛋白C抵抗现象及其实验室检测.中华医学检验杂志，1998；21(3)：182～184
18 Bertina RM,et al.Mutation in blood coagulation factor V associated with resistance to activated protein c.Nature,1994；369:64～67
(收稿：1998-11-01), 百拇医药
单位：广州医学院广州蛇毒研究所，广州 510182
关键词：蛋白C；激活剂；蛇毒；Protac；AB-C；ACC-C
广州医学院学报990231 中图分类号 Q51
蛋白C(Protein C，PC)是一种血浆糖蛋白，为维生素K依赖性蛋白质，在血浆中以酶原形式存在。在内皮细胞表面凝血酶-血栓调节蛋白(Thrombin Thrombomodulin, T-TM)复合物的作用下,它被激活为活化蛋白C(Activated Protein C，APC)，APC有催化蛋白水解作用，能快速而特异地降解血液凝血因子Ⅴa和Ⅷa，抑制内、外源性凝血、从而产生强有力的抗凝效应。同时，APC也能中和组织型纤溶酶原活化物抑制物(t-PAI)，刺激血管内皮细胞释放组织型纤溶酶原激活物(t-PA)，从而发择促纤溶作用[1，2]。
, http://www.100md.com
在体内，T-TM复合物是PC活化的主要生理性激活物[3]；在体外,其它一些非生理性激活物亦能激活PC，这些激活物包括胰蛋白酶、来源于蝰蛇(Russells Viper)毒中的因子X活化组份和来源于多种蛇毒的PC特异性激活剂[3，4]。下面就蛇毒PC特异性激活剂作一综述。
1 蛇毒PC激活剂的分布
自1986年Stocker等首次从铜头蝮(Agkistrodon Contortrix Contortrix)蛇毒中发现并分离出PC活化剂以来，迄今已发现近20种蛇毒中含有PC活化组份，它们几乎都是蝰科蛇毒、其中分布最多的又属蝮亚科蝮属蛇毒。Kogan等曾对9神蝮属蛇毒进行研究，发现除尖吻蝮(Agkistrodon acutus)蛇毒外，其余8种蛇毒均含有PC活化组份。迄今已确认含有PC活化组份的有：Agkistrodon C. contortrix,A .C.Mokasen,A.C.Pictigaster,A.P.Piscivorus,A.P.leucostoma.A.bilineatus,Bothrops pradoi,B.Moojeni,Vipera russellii,V.Lebetina,Cerastes ceraste,A.Saxatilis,A.blomhoffi ussuriensis,A.halys caraganus,A.halys halys[5,6]。
, http://www.100md.com
2 蛇毒PC救活剂的分类及理化性质
经过学者多年的研究表明,一些蝮属蛇(Agkistrodon)毒中肯定含有特异性PC激活剂。但有关它们的分子量、等电点、激活或抑制有许多不同意见，尤其是Agkistrodon halys,A.blomhoffi和A.saxatilis方面的资料存在显著差异。
从目前获得的资料看，Agkistrodon蛇属可分成两组：第一组由A. contortrix contortrix,A.bilineatus和A. piscivorus组成，它们含有的PC激活剂分子量为32～39kDa,能有效地激活人类PC，而对鼠血浆PC的效应较小，其最适pH值为7.5～8.5；另一组包括 A. saxatilis,A.blomhoffi ussuriensis,A halys caraganus和A.halys halys,其PC激活剂分子量为45～55kDa，其最适pH值为5.0～6.5[5]。Protac和AB-C为分别从上述蛇毒中提取的特异性PC激活剂，它们在理化性质、生化特性及作用机理等方面存在显著差别。
, http://www.100md.com
2.1 Protac
自从Stocker等人于1986年从铜头蝮蛇毒(Agkistrodon Contortrix Contortrix Venom,ACCV)中发现并分离出PC活化剂以来，已有多个实验室从ACCV中分离并纯化了特异性PC激活剂，统一命名为“Protac”。
Martinoli和Stocker[1]提纯的Protac在SDS-PAGE中分子量为37，600±550，含糖量约20%，为单链结构，等电点pI＝3.0±0.3。①Protac对酸碱度和温度的变化有较强的耐受性，它可以经受pH3～8、70℃、10min或pH2～8、20℃、24h的处理而保持活性。②Protac对多种生物抑制剂及变性剂有很强的耐受性，不受巯基蛋白酶抑制剂碘乙酸、金属蛋白酶抑制剂(EDTA)、丝氨酸蛋白酶抑制剂二异丙酯氟磷酸(DFP)、凝血酶抑制剂抑肽酶等抑制。③Protac激活血浆PC，活性完全，不需辅因子参加,特异性强,除激活PC外,不引起其它血浆蛋白如因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ、前激肽释放酶、纤溶酶等的激活或活性改变[7]。
, 百拇医药
Klein和Walker[8]报道的Protac在SDS-PAGE中分子量为20，000，有微弱的凝血酶样作用，可使纤维蛋白原凝固、对凝血酶、因子V、X没有生物学作用，亦无酰基水解活性，其生物活性受多种生物抑制刺及变性剂如DFP、EDTA、大豆胰蛋白酶抑制剂(Soybean Trypsin Inhibitor)等抑制。
上述两组科学家从ACCV中提取的Protac,无论从理化性质、生物稳定性方面，还是从生物活性方面都存在一定的差异，这可能是由于蛇的产地、蛇毒的分离手段与条件等因素不同而引起。
2.2 AB-C
Tomohiro等[9]从Agkistrodon bilineatus (tropical moccasin)蛇毒中分离并纯化了一种PC激活剂，作者将其命名为“AB-C’。AB-C是一种糖蛋白、在SDS-PAGE中分子量为38，000，为单链结构，其氨基端的残基为缬氨酸。AB-C能水解许多精氨酸三肽PNA(Arginine tripeptide pnitroanilide)底物，该活性受几种丝氨酸蛋白酶的抑制。AB-C能快速激活人和牛PC。
, http://www.100md.com
Tomohiro[9]对AB-C进行氨基酸末端序列分析，表明在第13位氨基酸残基处为精氨酸，而除了ACC-C、gabonase和Crotalase外，几乎所有丝氨酸蛋白酶序列在这一位置均为脯氨酸。AB-C与Protac的显著差异还在于不同的蛇毒产率，1gTropical Moccasin蛇毒可提取纯AB-C约40mg，而等量的ACCV只能提取8～10mg。这种产出率方面的显著差异，对于选择蛇毒进行大规模PC激活剂的提纯，具有十分重要的意义。
2.3 ACC-C
McMullen 等从铜头蝮蛇毒中分离纯化出一种PC激活剂，将其取名为“ACC-C”。对其一级结构的测定表明，该激活剂是一种由231个氨基酸残基组成的胰蛋白酶型丝氨酸蛋白酶，与其它丝氨酸蛋白酶相似，其活性位点由His40、Asp85和Ser177组成,在Asn21、Asn78和Asn129处分别有一个N端连接的糖化位点。比较研究表明，其氨基酸序列与其它蛇毒蛋白酶具有高度的序列一致性[6]。
, http://www.100md.com
3 蛇毒PC激活剂的作用机制
Protac对PC的激活机制，已知不是象凝血酶那样使PC重链N端裂解下一段短肽后使PC激活，受Protac活化的PC未发生一级结构的改变。用凝胶层析和免疫电泳技术都证明，Protac与PC相互作用后的混合物仍只是分子量为37，600的Protac和分子量为62，000的PC组成，通过偶联有Protac的亲和层析柱而形成的活化PC也未发生分子量的改变[7，10]。
Tomohiro等[9]将AB-C与人类PC以1∶250酶：底物重量比混合温育、30min内PC被完全激活，将温育混合物用SDS-PAGE检测，发现AB-C裂解PC的重链，这种裂解与活化PC的氨基酸水解活性及抗凝活性的形成相一致。进一步研究表明，AB-C对人类PC的激活、是通过从PC重链的氨基末端裂解下一个12肽后实现的。
Francis RB等人[11]认为蛇毒PC激活剂可能通过与凝血酶同样的方式，裂解PC的重链，从而激活PC，但也不能排除激活剂与PC形成复合物的可能性。至于其裂解部位是否与凝血酶的相同，尚不清楚。
, http://www.100md.com
Klein和Walker的研究表明，当高浓度活化剂与PC孵育时，可进一步引起PC轻链裂解，从而导致PC活性的丧失。
4 蛇毒PC激活剂的应用
由于蛇毒PC激活剂具有特异性强的优点。因此把它应用于PC的活性测定可以克服传统方法的缺陷。传统的PC：C测定方法大致分三步：①将血液中的PC吸附到Al(OH)3或枸橼酸钡上。②用磷酸盐缓冲液将PC洗脱下来。③将洗脱出的PC用T-TM复合物去激活，再用抗凝血酶Ⅲ-肝素抑制过量的凝血酶，用硫酸鱼精蛋白中和肝素，最后利用发色底物S2238或KPTT测定其活性。该方法存在三大缺陷：活化时间长、不能直接用血浆进行测定、必须采用较为繁琐的中和步骤来消除凝血酶的干扰。由于蛇毒PC激活剂具有活性完全、特异性强、能快速地激活血浆PC的特点，通过它建立起来的PC：C测定方法避免了多种干扰因素，易于实现标准化、仪器化和自动化。该方法的主要优点为：①能测定全血中PCa的水平。②操作简便、反应迅速，适于大量样品的检测。③可重复性好，与免疫检测值有良好的相关性[7，12，13]。由此可见、蛇毒PC激活剂是一种理想的PC活化剂，其应用于PC活性检测的前景是十分广阔的[14]。
, 百拇医药
自发性深静脉血栓(DVT)在西方发病率为1/1000[15]，其中10%～15%的血栓病与抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)、蛋白C(PC)、蛋白S(PS)、纤溶酶原(Plg)等的遗传性缺乏相关，20%～40%患者与活化蛋白C抵抗症(APCR)相关[16]。APCR是由于因子V基因发生单个位点突变(1691G→A)，导致因子V分子氨基酸序列506Arg→Gln，突变的因子V虽保持促凝活性，但对活化PC的裂解作用敏感性大大降低，使因子Va对活化PC的灭活产生抵抗作用。研究表明，利用蛇毒PC激活剂建立起来的APCR筛选方法，具有简便、快速、高效的优点。适用于大规模人群筛查，为APCR阳性患者的治疗提供准确依据[17，18]。
参考文献
1 Esmon CT，Ding W.The protein c pathway:New insights.Thromb Haemost,1997；78(1):70～74
, http://www.100md.com
2 Vindigni A.White CE.Energetic of thrombin-thrombomodulin interaction.Biochemistry,1997；36(22):6674～6681
3 王振义，李家增，阮长耿.血栓与止血基础理论与临床.上海科学技术出版社，1996；9：93～96
4 王钦红.抗活化的蛋白C是引起静脉血栓形成的一个重要原因.中华血液学杂志，1996；17(9)：499～501
5 Kogan,et al.Comparative study of protein c activators from the Agkistrodon snake venoms.Thromb Rse,1991；62:775～780
6 符民桂，管锦霞.蛇毒蛋白C活化剂的研究进展.国外医学.输血及血液学分册，1996；19(6)：367～369
, 百拇医药
7 黄文瑶.Protac-一种新的蛋白C活化剂.国外医学.输血及血液学分册，1991；14(4)：206～208
8 Walter Kisiel,et al.Isolation of a protein c activators from Southern Copperhead Venom.Biochemical and Biophysical Research Communications,1987；143(3):917～922
9 Tomohiro,et al.Isolation and characterization of a protein c activator from Tropical Moccasin venom.Thromb Res,1990；58:593～602
10 Sturzebecher.Inhibitor of the protein c activator protac,a serine proteinase from the venom of the Southern Copperhead Snake Agkistrodon Contortrix Contortrix,Toxicon,1991；29(2):151～155
, 百拇医药
11 Francis RB,et al.Rapid amidolytic assay of protein c in whole plasma using an activator from the venom of Agkistrodon Contortrix.A.J.C.P,1987；47:85～91
12 Kraus M,et al.The PCAT-a single screening assay for assessing the functionality of the protein c anticoagulant pathway.Thromb Res,1995；79:217
13 瞿国伟，王毅.蝮蛇毒作激活剂的发色底物比色法测定人血浆蛋白C活性.蛇志，1995；7(2)：4～5
14 Kogan,et al.Protein c activator from the venom of Agkistrodon blomhoffi ussuriensis retards thrombus formation in the arteriovenous shunt in rats.Thromb Res,1993；70:385～393
, 百拇医药
15 Nordstrom M，et al.A prospective study of the incidence of deep-vein thrombosis within a defined urban population.J Intern Med,1992；232:155～160
16 郑艳珍，朱定尔，周伯通.PC基因新突变His134Asn所致I型PC缺乏症.中华血液学杂志，1998；19(3)：138～142
17 庄俊华等.活化蛋白C抵抗现象及其实验室检测.中华医学检验杂志，1998；21(3)：182～184
18 Bertina RM,et al.Mutation in blood coagulation factor V associated with resistance to activated protein c.Nature,1994；369:64～67
(收稿：1998-11-01), 百拇医药