nm23-H1和P53表达与乳腺肿瘤浸润转移的关系*
作者：韦义萍 马韵
单位：韦义萍：广西医科大学附设护士学校 南宁 530021; 马韵：广西医科大学病理学教研室
关键词：乳腺肿瘤；nm23-H1；P53；免疫组化
广西医科大学学报990202
摘要 目的：研究nm23-H1、P53蛋白在乳腺肿瘤中表达与浸润转移的关系。方法：应用免疫组织化学S-P法对81例乳腺肿瘤组织进行检测。结果：良性肿瘤两种基因产物nm23-H1、P53的阳性率分别为100%和9.1%，乳腺癌则分别为52.9%和55.7%。在70例乳腺癌中，nm23-H1低表达、P53过表达与浸润程度和淋巴结转移有关(P<0.05)，P53过表达与nm23-H1低表达呈负相关(P<0.05)。结论：nm23-H1与P53的相关性表明两者在乳腺癌的浸润转移中存在一定的相互影响作用，检测nm23-H1、P53对临床预测乳腺癌淋巴结转移趋势、评价恶性程度和判断预后均有重要意义。
, http://www.100md.com
中国图书资料分类法分类号 R737.9
THE RELATION BETWEEN THE EXPRESSION OF nm23，P53 AND INVASION AND METASTASIS OF HUMAN BREAST NEOPLASM
Wei Yiping,Ma Yun
(Pathology Department and affiliated Nurse School of Guangxi Medical University,Nanning 530021)
Abstract Objective:To study the relation between invasion,metastasis and the expression of nm23-H1,P53 in human breast neoplasms.Methods:81 cases of human breast neoplasms were detected with S-P immunohistochemocal technique.Results:The positive rates of nm23-H1 and P53protein products in benign group were 100% and 9.1% respectively,while they were 52.9% and 55.7% respectively in malignant group.In the 70 cases of breast carcinoma,a significant correlation was found that both nm23-H1 low-expression and P53 overexpression were related to tissues invasion and lymph node metastasis (P<0.01,P<0.05).There was negative correlation between nm23-H1 and P53 expression (P=0.0006).Conclusions:The correlation of nm23-H1 and P53 expression indicates that they play an important role in breast carcinoma invasion and metastasis,and predict the grade of malignancy and prognosis.
, 百拇医药
Key words breast neoplasms;nm23-H1;P53;immunohistochemistry
大量研究表明，肿瘤的浸润与转移是多因素、多阶段、多基因变异所致的结果。nm23基因具有肿瘤转移抑制特性，nm23亚型nm23-H1在某些具有高转移性的肿瘤中表达明显下降[1]。P53基因是迄今发现的与人类肿瘤相关性最高的一种抑癌基因[2]，突变型P53丧失抑癌作用并促进细胞恶性增殖和转化，具有使肿瘤细胞发生早期转移的能力[3]。本实验应用免疫组化法研究nm23-H1、P53表达变化与乳腺癌浸润程度和淋巴结转移的关系。
1 材料和方法
1.1 材料：选取广西医科大学病理学教研室1993～1997年的存档资料共81例。年龄16～70岁，平均45岁。病理诊断：良性肿瘤(乳腺导管内乳头状瘤)11例；恶性肿瘤(导管内癌11例，早期浸润性导管癌10例，单纯癌33例，髓样癌11例，硬癌2例，粘液癌2例，乳头状癌1例)共70例，其中有淋巴结转移39例，无淋巴结转移31例。标本经福尔马林固定，石蜡包埋，重新制备4μm厚切片。
, 百拇医药
1.2 方法：采用链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组化染色法(S-P)。抗nm23-H1抗体(NM301，工作浓度1∶50)、S-P试剂盒均购自北京中山公司；抗P53抗体(DO-7)购自福州迈新公司，用微波修复抗原。操作按说明书进行，DAB显色。PBS代替一抗作阴性对照，用已知阳性标本作阳性对照。
1.3 结果判断：染色阳性信号呈棕黄色。参照Tokunaga[10]标准，当大于40%的瘤细胞染色就判定为阳性。统计学分析采用χ2检验。
2 结果
2.1 乳腺肿瘤中nm23-H1、P53蛋白的表达：nm23-H1表达主要位于细胞浆内，也可见于胞核内。P53表达主要位于细胞核内，胞浆偶见弱阳性。两种基因产物表达情况见表1。
, 百拇医药
表1 乳腺肿瘤nm23-H1、P53基因产物表达 组 别
n
nm23蛋白
P53蛋白
n(%)
n(%)
良性肿瘤
11
11(100.0)*
1(9.1)**
恶性肿瘤
, 百拇医药
70
37(52.9)*
39(55.7)**
*χ2=6.907 1，P<0.01 **χ2=9.6931，P<0.01
2.2 nm23-H1、P53蛋白表达与乳腺癌淋巴结转移、浸润性质、年龄及肿瘤大小的关系，见表2。
表2 nm23-H1、P53在乳腺癌中表达 临床病理学指标
n
nm23-H1
, 百拇医药
P
P53
P
-
+
%
-
+
%
总例数
70
33
37
52.9
, 百拇医药
31
39
55.7
年龄
<50岁
43
24
19
44.2
21
22
51.2
≥50岁
, 百拇医药 27
9
18
66.7
>0.05
10
17
63.0
>0.05
肿瘤大小
≤2 cm
13
7
, http://www.100md.com 6
46.2
5
8
61.5
>2 cm
57
26
31
54.4
>0.05
26
31
54.4
, http://www.100md.com
>0.05
淋巴结转移
无
31
7
24
77.4
18
13
42.0
有
39
26
, 百拇医药 13
33.3
<0.01
13
26
66.7
<0.05
组织类型
非浸润性癌
11
2
9
81.8
, 百拇医药 9
2
18.2
早期浸润性癌
10
2
8
80.0
<0.01
5
5
50.0
<0.05
浸润性癌
, 百拇医药
49
29
20
40.8
17
32
65.3
2.3 nm23-H1、P53表达之间的关系见表3。表3 乳腺癌中nm23-H1与P53表达的相关分析 nm23-H1
P53(%)
合计
, http://www.100md.com
+
-
+
13(35.1)
24(64.9)
37
-
26(78.8)
7(21.2)
33
合计
39(55.7)
31(44.2)
, 百拇医药
70
χ2=11.760 2，P=0.000 6，r=-0.4387
3 讨论
nm23基因是Steeg等[4]在1988年首先从小鼠黑色素瘤细胞系中分离出来的细胞克隆，是一种与恶性肿瘤转移有关的基因即转移表型抑制基因，其在肿瘤中低表达、缺失或突变都使肿瘤细胞的转移更为明显[4～6]。本组结果显示，nm23-H1表达的高低与乳腺癌浸润程度和淋巴结转移有关。70例乳腺癌nm23-H1阳性表达率，有淋巴结转移组和无淋巴结转移组分别为33.0%和77.4%，两组差异有非常显著意义(P<0.01)；非浸润性癌和早期浸润性癌分别为81.8%和80.0%显著高于浸润性癌的40.8%(P<0.01)，说明nm23-H1的高度表达可抑制转移。
, 百拇医药
肿瘤抑制基因P53的失活在肿瘤发生发展中起着重要作用。正常细胞内P53基因为野生型，半衰期短且极不稳定，用常规免疫组化方法难以检出P53蛋白，当P53基因突变后其蛋白构型发生改变，半衰期明显延长，其蛋白产物在恶性肿瘤细胞核内聚集，可用免疫组化测出[7]。有文献报道，具有突变型P53蛋白表达的非小细胞肺癌、食管鳞状细胞癌与分化程度、浸润深度和淋巴结转移有显著相关性[8，9]。本实验良性肿瘤仅1例P53阳性表达，P53在乳腺癌中异常表达与淋巴结转移和浸润程度有关，有淋巴结转移组阳性率为66.7%高于无淋巴结转移组的42.0%，两组差异有显著意义(P<0.05)，且P53表达随癌组织浸润程度增加而增强，非浸润性癌、早期浸润性癌和浸润性癌3组比较差异有显著性(P<0.05)，显示突变型P53基因在乳腺癌的初始浸润与转移中可能起重要作用，其过度表达使肿瘤细胞具有更大侵袭、转移扩散能力。
, 百拇医药
本实验结果还显示，nm23-H1阴性组乳腺癌的P53阳性率显著高于nm23-H1阳性组(χ2=11.760 2，P=0.0006)。进行列联相关分析，nm23-H1低表达与P53过表达呈负相关(r=-0.438 7)。此外，随着浸润增加，P53阳性表达率上升而nm23-H1阳性表达率降低。表明在细胞癌变过程P53基因突变后可能对nm23-H1基因失活有一定影响。
鉴于以上结果，认为进行nm23-H1、P53相关性检测对临床预测乳腺癌淋巴结转移趋势、评价恶性程度和判断预后均有重要意义。
*广西教委资助项目
参考文献
, 百拇医药
1 Cohn KH,Wang F,Desoto-Lapaix F,et al.Association of nm23-H1 allelic deletions with distant metastases in colorectal carcinoma.Lancet,1991,338:722～724
2 Levine AJ,Momand J,Finlay CA.The P53 tumor suppressor gene.Nature,1991,351:453～456
3 Greenblatt MS,Bennet WP,Hollstein M,et al.Mutations in the P53 tumor suppressor gene:clues to cancer etiology and molecular pathogenesis.Cancer Res,1994,54:4855～4878
, http://www.100md.com
4 Steeg PS,Bevilacqua G,Kopper L,et al.Evidence for a novel gene associated with low tumor metastatic potential.J Natl Cancer Inst,1988,80:200～204
5 Bevilacqua G,Mark E,Sobel,et al.Association of low nm23 RNA levels in human primary infiltrating ductal breast carcinomas with lymph node involvement and other histopathological indicators of high metastatic potential.Cancer Res,1989,49:5 185～5190
6 Yamaguchi A,Urano T,Goi T,et al.Expression of human nm23-H1 and nm23-H2 proteins in hepatocellular carcinoma.Cancer,1994,73:2280～2284
, http://www.100md.com
7 Remvikos Y,Laurent-Puig P,Salmon RJ,et al.Simultaneous monitoring of P53 protein and DNA cotent of colorectal adenocarcinomas by flow cytometry.Int J Cancer,1990,45:450～456
8 Marchetti A,Buttitta F,Merlo G,et al.P53 alterations in non-small cell lung cancers correlate with metastatic involvement of hilar and mediastinal lymph nodes.Cancer Res,1993,53:2 846～2 851
9 刘节，张 玲.食管鳞状细胞癌P53蛋白的免疫组化研究.癌症，1997，16(2)：105～106
10 Tokunaga Y,Urano T,Furukawa K,et al.Reduced expression of nm23-H1,but not of nm23-H2,is concordant with the frequency of lymph-node metastasis of human breast cancer.Int J Cancer,1993,55:66～71
收稿日期：1998-07-20, 百拇医药
单位：韦义萍：广西医科大学附设护士学校 南宁 530021; 马韵：广西医科大学病理学教研室
关键词：乳腺肿瘤；nm23-H1；P53；免疫组化
广西医科大学学报990202
摘要 目的：研究nm23-H1、P53蛋白在乳腺肿瘤中表达与浸润转移的关系。方法：应用免疫组织化学S-P法对81例乳腺肿瘤组织进行检测。结果：良性肿瘤两种基因产物nm23-H1、P53的阳性率分别为100%和9.1%，乳腺癌则分别为52.9%和55.7%。在70例乳腺癌中，nm23-H1低表达、P53过表达与浸润程度和淋巴结转移有关(P<0.05)，P53过表达与nm23-H1低表达呈负相关(P<0.05)。结论：nm23-H1与P53的相关性表明两者在乳腺癌的浸润转移中存在一定的相互影响作用，检测nm23-H1、P53对临床预测乳腺癌淋巴结转移趋势、评价恶性程度和判断预后均有重要意义。
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中国图书资料分类法分类号 R737.9
THE RELATION BETWEEN THE EXPRESSION OF nm23，P53 AND INVASION AND METASTASIS OF HUMAN BREAST NEOPLASM
Wei Yiping,Ma Yun
(Pathology Department and affiliated Nurse School of Guangxi Medical University,Nanning 530021)
Abstract Objective:To study the relation between invasion,metastasis and the expression of nm23-H1,P53 in human breast neoplasms.Methods:81 cases of human breast neoplasms were detected with S-P immunohistochemocal technique.Results:The positive rates of nm23-H1 and P53protein products in benign group were 100% and 9.1% respectively,while they were 52.9% and 55.7% respectively in malignant group.In the 70 cases of breast carcinoma,a significant correlation was found that both nm23-H1 low-expression and P53 overexpression were related to tissues invasion and lymph node metastasis (P<0.01,P<0.05).There was negative correlation between nm23-H1 and P53 expression (P=0.0006).Conclusions:The correlation of nm23-H1 and P53 expression indicates that they play an important role in breast carcinoma invasion and metastasis,and predict the grade of malignancy and prognosis.
, 百拇医药
Key words breast neoplasms;nm23-H1;P53;immunohistochemistry
大量研究表明，肿瘤的浸润与转移是多因素、多阶段、多基因变异所致的结果。nm23基因具有肿瘤转移抑制特性，nm23亚型nm23-H1在某些具有高转移性的肿瘤中表达明显下降[1]。P53基因是迄今发现的与人类肿瘤相关性最高的一种抑癌基因[2]，突变型P53丧失抑癌作用并促进细胞恶性增殖和转化，具有使肿瘤细胞发生早期转移的能力[3]。本实验应用免疫组化法研究nm23-H1、P53表达变化与乳腺癌浸润程度和淋巴结转移的关系。
1 材料和方法
1.1 材料：选取广西医科大学病理学教研室1993～1997年的存档资料共81例。年龄16～70岁，平均45岁。病理诊断：良性肿瘤(乳腺导管内乳头状瘤)11例；恶性肿瘤(导管内癌11例，早期浸润性导管癌10例，单纯癌33例，髓样癌11例，硬癌2例，粘液癌2例，乳头状癌1例)共70例，其中有淋巴结转移39例，无淋巴结转移31例。标本经福尔马林固定，石蜡包埋，重新制备4μm厚切片。
, 百拇医药
1.2 方法：采用链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组化染色法(S-P)。抗nm23-H1抗体(NM301，工作浓度1∶50)、S-P试剂盒均购自北京中山公司；抗P53抗体(DO-7)购自福州迈新公司，用微波修复抗原。操作按说明书进行，DAB显色。PBS代替一抗作阴性对照，用已知阳性标本作阳性对照。
1.3 结果判断：染色阳性信号呈棕黄色。参照Tokunaga[10]标准，当大于40%的瘤细胞染色就判定为阳性。统计学分析采用χ2检验。
2 结果
2.1 乳腺肿瘤中nm23-H1、P53蛋白的表达：nm23-H1表达主要位于细胞浆内，也可见于胞核内。P53表达主要位于细胞核内，胞浆偶见弱阳性。两种基因产物表达情况见表1。
, 百拇医药
表1 乳腺肿瘤nm23-H1、P53基因产物表达 组 别
n
nm23蛋白
P53蛋白
n(%)
n(%)
良性肿瘤
11
11(100.0)*
1(9.1)**
恶性肿瘤
, 百拇医药
70
37(52.9)*
39(55.7)**
*χ2=6.907 1，P<0.01 **χ2=9.6931，P<0.01
2.2 nm23-H1、P53蛋白表达与乳腺癌淋巴结转移、浸润性质、年龄及肿瘤大小的关系，见表2。
表2 nm23-H1、P53在乳腺癌中表达 临床病理学指标
n
nm23-H1
, 百拇医药
P
P53
P
-
+
%
-
+
%
总例数
70
33
37
52.9
, 百拇医药
31
39
55.7
年龄
<50岁
43
24
19
44.2
21
22
51.2
≥50岁
, 百拇医药 27
9
18
66.7
>0.05
10
17
63.0
>0.05
肿瘤大小
≤2 cm
13
7
, http://www.100md.com 6
46.2
5
8
61.5
>2 cm
57
26
31
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>0.05
26
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>0.05
淋巴结转移
无
31
7
24
77.4
18
13
42.0
有
39
26
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33.3
<0.01
13
26
66.7
<0.05
组织类型
非浸润性癌
11
2
9
81.8
, 百拇医药 9
2
18.2
早期浸润性癌
10
2
8
80.0
<0.01
5
5
50.0
<0.05
浸润性癌
, 百拇医药
49
29
20
40.8
17
32
65.3
2.3 nm23-H1、P53表达之间的关系见表3。表3 乳腺癌中nm23-H1与P53表达的相关分析 nm23-H1
P53(%)
合计
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+
-
+
13(35.1)
24(64.9)
37
-
26(78.8)
7(21.2)
33
合计
39(55.7)
31(44.2)
, 百拇医药
70
χ2=11.760 2，P=0.000 6，r=-0.4387
3 讨论
nm23基因是Steeg等[4]在1988年首先从小鼠黑色素瘤细胞系中分离出来的细胞克隆，是一种与恶性肿瘤转移有关的基因即转移表型抑制基因，其在肿瘤中低表达、缺失或突变都使肿瘤细胞的转移更为明显[4～6]。本组结果显示，nm23-H1表达的高低与乳腺癌浸润程度和淋巴结转移有关。70例乳腺癌nm23-H1阳性表达率，有淋巴结转移组和无淋巴结转移组分别为33.0%和77.4%，两组差异有非常显著意义(P<0.01)；非浸润性癌和早期浸润性癌分别为81.8%和80.0%显著高于浸润性癌的40.8%(P<0.01)，说明nm23-H1的高度表达可抑制转移。
, 百拇医药
肿瘤抑制基因P53的失活在肿瘤发生发展中起着重要作用。正常细胞内P53基因为野生型，半衰期短且极不稳定，用常规免疫组化方法难以检出P53蛋白，当P53基因突变后其蛋白构型发生改变，半衰期明显延长，其蛋白产物在恶性肿瘤细胞核内聚集，可用免疫组化测出[7]。有文献报道，具有突变型P53蛋白表达的非小细胞肺癌、食管鳞状细胞癌与分化程度、浸润深度和淋巴结转移有显著相关性[8，9]。本实验良性肿瘤仅1例P53阳性表达，P53在乳腺癌中异常表达与淋巴结转移和浸润程度有关，有淋巴结转移组阳性率为66.7%高于无淋巴结转移组的42.0%，两组差异有显著意义(P<0.05)，且P53表达随癌组织浸润程度增加而增强，非浸润性癌、早期浸润性癌和浸润性癌3组比较差异有显著性(P<0.05)，显示突变型P53基因在乳腺癌的初始浸润与转移中可能起重要作用，其过度表达使肿瘤细胞具有更大侵袭、转移扩散能力。
, 百拇医药
本实验结果还显示，nm23-H1阴性组乳腺癌的P53阳性率显著高于nm23-H1阳性组(χ2=11.760 2，P=0.0006)。进行列联相关分析，nm23-H1低表达与P53过表达呈负相关(r=-0.438 7)。此外，随着浸润增加，P53阳性表达率上升而nm23-H1阳性表达率降低。表明在细胞癌变过程P53基因突变后可能对nm23-H1基因失活有一定影响。
鉴于以上结果，认为进行nm23-H1、P53相关性检测对临床预测乳腺癌淋巴结转移趋势、评价恶性程度和判断预后均有重要意义。
*广西教委资助项目
参考文献
, 百拇医药
1 Cohn KH,Wang F,Desoto-Lapaix F,et al.Association of nm23-H1 allelic deletions with distant metastases in colorectal carcinoma.Lancet,1991,338:722～724
2 Levine AJ,Momand J,Finlay CA.The P53 tumor suppressor gene.Nature,1991,351:453～456
3 Greenblatt MS,Bennet WP,Hollstein M,et al.Mutations in the P53 tumor suppressor gene:clues to cancer etiology and molecular pathogenesis.Cancer Res,1994,54:4855～4878
, http://www.100md.com
4 Steeg PS,Bevilacqua G,Kopper L,et al.Evidence for a novel gene associated with low tumor metastatic potential.J Natl Cancer Inst,1988,80:200～204
5 Bevilacqua G,Mark E,Sobel,et al.Association of low nm23 RNA levels in human primary infiltrating ductal breast carcinomas with lymph node involvement and other histopathological indicators of high metastatic potential.Cancer Res,1989,49:5 185～5190
6 Yamaguchi A,Urano T,Goi T,et al.Expression of human nm23-H1 and nm23-H2 proteins in hepatocellular carcinoma.Cancer,1994,73:2280～2284
, http://www.100md.com
7 Remvikos Y,Laurent-Puig P,Salmon RJ,et al.Simultaneous monitoring of P53 protein and DNA cotent of colorectal adenocarcinomas by flow cytometry.Int J Cancer,1990,45:450～456
8 Marchetti A,Buttitta F,Merlo G,et al.P53 alterations in non-small cell lung cancers correlate with metastatic involvement of hilar and mediastinal lymph nodes.Cancer Res,1993,53:2 846～2 851
9 刘节，张 玲.食管鳞状细胞癌P53蛋白的免疫组化研究.癌症，1997，16(2)：105～106
10 Tokunaga Y,Urano T,Furukawa K,et al.Reduced expression of nm23-H1,but not of nm23-H2,is concordant with the frequency of lymph-node metastasis of human breast cancer.Int J Cancer,1993,55:66～71
收稿日期：1998-07-20, 百拇医药