关节灵对小鼠体液免疫功能影响的实验研究
作者：李先文 左祖英 张凤鸣 夏建萍
单位：川北医学院 南充 637000
关键词：关节灵针剂；小鼠；体液免疫；类风湿性关节炎
川北医学院学报/990206提 要 目的：为进一步探讨关节灵注射液对类风湿关节炎的治疗机理。方法：BALB/C小鼠经不同抗原免疫后，用ELISA测定并分析比较实验组(用关节灵组)和对照组(未用关节灵组)BALB/C小鼠血清IgM、IgG、IgE含量。结果：试验组血清IgM、IgE含量显著低于对照组(P<0.01)，血清IgG含量与对照组比较，无显著差异(P>0.05)。结论：关节灵能选择性抑制实验动物异常增高的IgE、IgM产生；而对发挥主要免疫作用的IgG的产生无明显影响，结果表明关节灵具良好的免疫调节作用。
文章编号：1005-3697(1999)02-0014-02 中图分类号：R392.11 文献标识码：A
, 百拇医药
Experimental Study of the Effect of“Guanjieling”
Injection on the Function of Humoral Immunity in Mice
Li Xianwen et al
North Sichuan Medical College 637007
ABSTRACT Aim:To further investigate the mechanism of the clinical treatment by Guanjieling injection for rheumatoid arthritis. Materials and Methods:The BALB/C mice were immunized with a different antigen, and then ELISA was applied in assaying and analyzing the contents of serum IgM, IgG and IgE in the experimental group (“Guanjieling”group)and the control group(non-Guanjieling group). Results:The contents of serum IgM and IgG were significantly lower in the experimental group than in the control group(p<0.01)， however the content of serum IgG was not significantly different between the two groups(p>0.05). Conclusion:Guanjieling injection can selectively inhibit the production of IgM and IgG, but has no significant effect on the production of IgG which plays a main role in the immune function. The results indicate that the Guanjieling injection has an effective effect on immune regulation.
, 百拇医药
作者在辨证的基础上拟订出关节灵针剂配方：鲜狗骨、当归、威灵仙、稀签草、防己。制作成关节灵注射液应用于临床取得良好疗效。1993年经动物实验证实，该制剂能显著抑制因抗原刺激而增强的细胞免疫和体液免疫的反应[1]；并对小鼠实验性关节炎亦有一定的抗炎、消肿作用[2]。因类风湿关节炎是一种与Ⅲ型超敏反应有关的自身免疫性疾病[3]，故本文观察了关节灵对实验小鼠IgM、IgG、IgE产生的影响作用，以便进一步阐明该制剂治疗类风湿关节炎的机理。
1 材料方法
1.1 试剂
1.1.1 关节灵制剂由内江市第一人民医院制剂室提供。
1.1.2 DNA—BSA.AI(OH)3由北医大免疫学教研室提供。
, http://www.100md.com
1.1.3 HRP标记的羊抗鼠IgG、IgE为北大生物制品所生产。
1.1.4 其余试剂由我院分子生物学研究室提供。
1.2 动物 BALB/c小鼠，雄性，20g—25g由北医大动物室提供。
1.3 方法 以小鼠为实验对象，每一检测项目设实验与对照两组，10只/组。
1.3.1 IgE测定 两组小鼠经腹腔注射DNP—BSA.AL(OH)3混合液0.5ml/只，15 d后加强注射一次。实验组于第一次注射的当天口饲关节灵，0.5ml/d/只，连续两周，第三周改为腹腔注射0.5ml/d/只。第四周两组眼眶采血，分离血清，ELISA法测血清中IgE的含量。
1.3.2 IgG的测定 两组小鼠皮下、足垫、肌肉多点注射破伤风类毒素共2 ml，1次/周，持续注射三周。实验组于第一次注射的当天口饲关节灵，0.5ml/d/只，连喂三周第四周采血，测IgG的含量。
, 百拇医药
1.3.3 IgM的测定 两组小鼠腹腔注射5 %SRBC，0.5ml/只，7 d后加强免疫一次。实验组则在第一次免疫后的当天口饲关节灵，0.5ml/d/只，持续两周，第三周采血，测IgM的含量。
2 结果
用不同抗原刺激后所测两组小鼠血清IgM、IgG、IgE含量见表1。实验组IgM、IgE含量显著低于对照组(P<0.01)血清IgG含量与对照组比较无显著差异(P>0.05)
表1 两组小鼠血清IgM、IgG、IgE含量测定结果分析 分组
动物数
血清含量(
±S)
IgM(mg/ml)
, 百拇医药
IgG(mg/ml)
IgE(ug/ml)
对 照
10
12.42±0.88
17.30±1.13
0.28±0.05
关节灵
10
5.07±0.56*
17.01±0.97**
0.12±0.01*
, http://www.100md.com
*：与对照组比较P<0.01。**：与对照组比较P>0.05。
3 讨论
类风湿关节炎属风湿免疫病类，虽病因未明，发病率日益增高，危及人类健康的难治性疾病。为了提高中医辨证思维，在总结关节炎治疗类风湿关节灵有良好疗效的基础上，笔者从多角度度采用实验的方法进行研究。
本实验是从免疫学的角度，探讨关节灵针剂治疗类风湿性关节炎的机理，其结果表明：
3.1 关节灵能选择性抑制实验动物异常增高的IgE、IgM产生；而对发挥主要免疫作用的IgG的产生无明显影响，表明关节灵具良好的免疫调节作用。
3.2 类风湿关节炎的发生，可能与感染等因素引起机体产生了抗变性IgG的IgM抗体—即类风湿因子(RF)有关，当IgM与变性IgG结合而成的免疫复合物沉积在关节滑膜等部位时，激活补体导致Ⅲ型超敏反应引起免疫炎症性损伤。关节灵能显著抑制IgM抗体产生的实验结果提示：关节灵对类风湿关节炎的良好治疗作用，可能与其选择性抑制IgM型的RF产生，减少异常免疫复合物的形成有关。经关节灵治疗的类风湿关节炎患者RF水平降低的事实无疑证明了上述推断[1]。
, http://www.100md.com
3.3 关节灵能显著抑制IgE抗体产生，不影响IgG抗体产生的结果提示：该制剂治疗因IgE升高所致的I型超敏反应性疾病[1]亦有其实验依据。关节灵不仅可通过抑制IgE产生来发挥治疗作用，而且还通过特异性IgG封闭IgE与变应原结合而发挥治疗作用。
3.4 本实验观察到关节灵具免疫调节作用与文献[7]所观察到的为免疫抑制作用不太一致的原因可能是后者仅检测了特异性总抗体的产生，而未查各种不同类别的抗体产生有关。
综上所述表明关节灵可能具免疫调节作用，故有可能用于免疫异常所致的自身免疫性或超敏反应性疾病的治疗。该实验证实对类风湿性关节炎的临床治疗是与其免疫调节作用有关，从体液免疫学的角度阐述了该方的部分作用机理。
参考文献
1 李先文，等.关节灵注射液治疗类风湿关节炎的初步观察40例临床分析.重庆医药，1983；5：26
, http://www.100md.com
2 李蕊兴，等.关节灵注射液的抗炎消肿作用及毒性实验的初步观察.南充医专学报，1981；2：30
3 Simpson MA, Gozzojj. Spectrophotometric determination of lymphocyte mediated Sheep red blood cell hemolysis in vitro.J immunol methobs 1979;21:159
4 文昭明，变态反应性疾病的诊治.北京：中国医药科技出版社，第一版，1997；21～26
5 毛俊浩，等.白术多糖对小鼠免疫功能的调节.免疫学杂志，1996；12(4)：234
6 陶义训.免疫学与免疫检验学.北京：人民卫生出版社，1997；220
7 李先文，等.关节灵制剂对小鼠免疫功能的影响.川北医学院学报，1993；8(3)：6
(收稿日期：1999-04-27), http://www.100md.com
单位：川北医学院 南充 637000
关键词：关节灵针剂；小鼠；体液免疫；类风湿性关节炎
川北医学院学报/990206提 要 目的：为进一步探讨关节灵注射液对类风湿关节炎的治疗机理。方法：BALB/C小鼠经不同抗原免疫后，用ELISA测定并分析比较实验组(用关节灵组)和对照组(未用关节灵组)BALB/C小鼠血清IgM、IgG、IgE含量。结果：试验组血清IgM、IgE含量显著低于对照组(P<0.01)，血清IgG含量与对照组比较，无显著差异(P>0.05)。结论：关节灵能选择性抑制实验动物异常增高的IgE、IgM产生；而对发挥主要免疫作用的IgG的产生无明显影响，结果表明关节灵具良好的免疫调节作用。
文章编号：1005-3697(1999)02-0014-02 中图分类号：R392.11 文献标识码：A
, 百拇医药
Experimental Study of the Effect of“Guanjieling”
Injection on the Function of Humoral Immunity in Mice
Li Xianwen et al
North Sichuan Medical College 637007
ABSTRACT Aim:To further investigate the mechanism of the clinical treatment by Guanjieling injection for rheumatoid arthritis. Materials and Methods:The BALB/C mice were immunized with a different antigen, and then ELISA was applied in assaying and analyzing the contents of serum IgM, IgG and IgE in the experimental group (“Guanjieling”group)and the control group(non-Guanjieling group). Results:The contents of serum IgM and IgG were significantly lower in the experimental group than in the control group(p<0.01)， however the content of serum IgG was not significantly different between the two groups(p>0.05). Conclusion:Guanjieling injection can selectively inhibit the production of IgM and IgG, but has no significant effect on the production of IgG which plays a main role in the immune function. The results indicate that the Guanjieling injection has an effective effect on immune regulation.
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作者在辨证的基础上拟订出关节灵针剂配方：鲜狗骨、当归、威灵仙、稀签草、防己。制作成关节灵注射液应用于临床取得良好疗效。1993年经动物实验证实，该制剂能显著抑制因抗原刺激而增强的细胞免疫和体液免疫的反应[1]；并对小鼠实验性关节炎亦有一定的抗炎、消肿作用[2]。因类风湿关节炎是一种与Ⅲ型超敏反应有关的自身免疫性疾病[3]，故本文观察了关节灵对实验小鼠IgM、IgG、IgE产生的影响作用，以便进一步阐明该制剂治疗类风湿关节炎的机理。
1 材料方法
1.1 试剂
1.1.1 关节灵制剂由内江市第一人民医院制剂室提供。
1.1.2 DNA—BSA.AI(OH)3由北医大免疫学教研室提供。
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1.1.3 HRP标记的羊抗鼠IgG、IgE为北大生物制品所生产。
1.1.4 其余试剂由我院分子生物学研究室提供。
1.2 动物 BALB/c小鼠，雄性，20g—25g由北医大动物室提供。
1.3 方法 以小鼠为实验对象，每一检测项目设实验与对照两组，10只/组。
1.3.1 IgE测定 两组小鼠经腹腔注射DNP—BSA.AL(OH)3混合液0.5ml/只，15 d后加强注射一次。实验组于第一次注射的当天口饲关节灵，0.5ml/d/只，连续两周，第三周改为腹腔注射0.5ml/d/只。第四周两组眼眶采血，分离血清，ELISA法测血清中IgE的含量。
1.3.2 IgG的测定 两组小鼠皮下、足垫、肌肉多点注射破伤风类毒素共2 ml，1次/周，持续注射三周。实验组于第一次注射的当天口饲关节灵，0.5ml/d/只，连喂三周第四周采血，测IgG的含量。
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1.3.3 IgM的测定 两组小鼠腹腔注射5 %SRBC，0.5ml/只，7 d后加强免疫一次。实验组则在第一次免疫后的当天口饲关节灵，0.5ml/d/只，持续两周，第三周采血，测IgM的含量。
2 结果
用不同抗原刺激后所测两组小鼠血清IgM、IgG、IgE含量见表1。实验组IgM、IgE含量显著低于对照组(P<0.01)血清IgG含量与对照组比较无显著差异(P>0.05)
表1 两组小鼠血清IgM、IgG、IgE含量测定结果分析 分组
动物数
血清含量(
±S)IgM(mg/ml)
, 百拇医药
IgG(mg/ml)
IgE(ug/ml)
对 照
10
12.42±0.88
17.30±1.13
0.28±0.05
关节灵
10
5.07±0.56*
17.01±0.97**
0.12±0.01*
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*：与对照组比较P<0.01。**：与对照组比较P>0.05。
3 讨论
类风湿关节炎属风湿免疫病类，虽病因未明，发病率日益增高，危及人类健康的难治性疾病。为了提高中医辨证思维，在总结关节炎治疗类风湿关节灵有良好疗效的基础上，笔者从多角度度采用实验的方法进行研究。
本实验是从免疫学的角度，探讨关节灵针剂治疗类风湿性关节炎的机理，其结果表明：
3.1 关节灵能选择性抑制实验动物异常增高的IgE、IgM产生；而对发挥主要免疫作用的IgG的产生无明显影响，表明关节灵具良好的免疫调节作用。
3.2 类风湿关节炎的发生，可能与感染等因素引起机体产生了抗变性IgG的IgM抗体—即类风湿因子(RF)有关，当IgM与变性IgG结合而成的免疫复合物沉积在关节滑膜等部位时，激活补体导致Ⅲ型超敏反应引起免疫炎症性损伤。关节灵能显著抑制IgM抗体产生的实验结果提示：关节灵对类风湿关节炎的良好治疗作用，可能与其选择性抑制IgM型的RF产生，减少异常免疫复合物的形成有关。经关节灵治疗的类风湿关节炎患者RF水平降低的事实无疑证明了上述推断[1]。
, http://www.100md.com
3.3 关节灵能显著抑制IgE抗体产生，不影响IgG抗体产生的结果提示：该制剂治疗因IgE升高所致的I型超敏反应性疾病[1]亦有其实验依据。关节灵不仅可通过抑制IgE产生来发挥治疗作用，而且还通过特异性IgG封闭IgE与变应原结合而发挥治疗作用。
3.4 本实验观察到关节灵具免疫调节作用与文献[7]所观察到的为免疫抑制作用不太一致的原因可能是后者仅检测了特异性总抗体的产生，而未查各种不同类别的抗体产生有关。
综上所述表明关节灵可能具免疫调节作用，故有可能用于免疫异常所致的自身免疫性或超敏反应性疾病的治疗。该实验证实对类风湿性关节炎的临床治疗是与其免疫调节作用有关，从体液免疫学的角度阐述了该方的部分作用机理。
参考文献
1 李先文，等.关节灵注射液治疗类风湿关节炎的初步观察40例临床分析.重庆医药，1983；5：26
, http://www.100md.com
2 李蕊兴，等.关节灵注射液的抗炎消肿作用及毒性实验的初步观察.南充医专学报，1981；2：30
3 Simpson MA, Gozzojj. Spectrophotometric determination of lymphocyte mediated Sheep red blood cell hemolysis in vitro.J immunol methobs 1979;21:159
4 文昭明，变态反应性疾病的诊治.北京：中国医药科技出版社，第一版，1997；21～26
5 毛俊浩，等.白术多糖对小鼠免疫功能的调节.免疫学杂志，1996；12(4)：234
6 陶义训.免疫学与免疫检验学.北京：人民卫生出版社，1997；220
7 李先文，等.关节灵制剂对小鼠免疫功能的影响.川北医学院学报，1993；8(3)：6
(收稿日期：1999-04-27), http://www.100md.com