抗原修复——高压加热的探讨
作者：高凌云 黄爱民 黄雄飞
单位：福建医科大学病理解剖学教研室(福州 350004)
关键词：抗原，修复；高压加热
福建医科大学学报990245
几年来，抗原修复广泛应用于免疫组化检测，以高压锅加热修复应用最广，但缺乏明确的针对性，有时试验结果会出现无法解释的假阳性或假阴性，为此本文根据不同抗体的阳性信号定位即定位于细胞核、细胞浆(或细胞膜)，而采用相应的修复方法和时间，以期提高阳性率。
1 材料与方法
1.1 材料 家用高压锅(20cm,浙江苏泊尔有限公司) ，自制金属玻片架，电炉2000W，烧杯600ml。24例肝癌组织取自附属第一医院肝癌手术切除标本。10%福尔马林固定，石蜡包埋，4μm切片。即用型的试剂、缓冲液、 抗体修复液由福州迈新公司提供。
, http://www.100md.com
1.2 方法
1.2.1 玻片清洁液处理，流水冲洗，95%酒精浸片，100℃烤片，冷却，涂上多聚赖氨酸(1∶10)晾干备用。
1.2.2 切片脱蜡水化至PBS备用。
1.2.3 抗原修复
(1)抗体表达为核阳性的修复 取已配好的pH为6.0的柠檬酸修复液适量于高压锅内，置电炉上加热到沸，直接放入切片，加盖扣上安全阀，加热到喷气即计时，持续5min切断电源维持3min离开火源，置于已备好的水中，打开水龙头冲淋，使其迅速冷却至室温，打开盖子，取出切片，蒸馏水洗2次，PBS洗3次。
(2)抗体表达为浆(或膜)阳性的修复 高压锅内放适量水，置于电炉上加热至沸。在600ml烧杯中放入修复液500ml，置于沸水中，加热约3min后把切片放入修复液中加盖扣安全阀，继续加热至喷气计时持续2min，切断电源维持1min后离开火源，同上法冷却、洗片。
, 百拇医药
1.2.4 免疫组化SP法,按试剂说明。
2 结 果
用不同的修复方法对24例肝癌组织分别进行拓扑异构酶Ⅱ(ToPoⅡ)、谷胱甘肽S转移酶π亚型(GST-π)、P-糖蛋白的检测(附表)。
附表 24例肝癌组织不同修复法结果 抗体
不修复
浆阳性修复法
核阳性修复法
浆阳性
核阳性
浆阳性
核阳性
, 百拇医药
浆阳性
核阳性
ToPo-Ⅱ(核型)
0
0
5
2
0
16
GST-π(浆型)
5
0
18
, 百拇医药 0
5
0
P-糖蛋白(浆型)
0
0
15
0
3
0
n=24
3 讨 论
3.1 从上表可见用不同的修复法得到阳性结果不同，用核型的ToPo-Ⅱ若不进行修复，结果全部阴性，而用浆阳性修复法核阳性仅为2例，浆假阳性则有5例，而用核阳性修复法，有16例阳性，阳性率明显提高。
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3.2 用浆阳性修复法对24例肝癌组织分别用浆型的GST-π和P-糖蛋白检测，阳性率比不修复或用核阳性修复法也明显提高(各抗体间是否存在交叉阳性有待进一步探讨)。
3.3 浆阳性修复法是把抗原修复液和切片放入烧杯，然后把烧杯放入高压锅内隔水加热，所需加热时间短，修复液少。核阳性修复法则是直接把抗原修复液和切片放入高压锅内加热，所需时间长，修复液量多。本文根据不同的阳性定位选用不同的修复方法，更具有针对性、稳定性，阳性率明显提高。
3.4 多数学者认为组织经10%福尔马林固定后，抗原会被溶解，弥散，丢失或产生蛋白质交联产物使抗原被掩盖，导致抗原性降低，免疫组化结果抗原不表达，阳性率较低。特别是那些固定时间长，保存久远的蜡块。而高压加热能把被掩盖或交联变性的抗原暴露或修复，使免疫组化的结果更准确可靠。
3.5 免疫组化是通过抗体特异地与组织中抗原结合而表达出来，所以抗原修复的方法直接影响到组织中抗原的暴露，因此不能用统一的修复方法，特别是核阳性的组织，修复时间一定要超过2min[1]，否则出现浆假阳性或细胞核阳性不表达。而本应浆阳性的组织若不以适当方法加以修复则出现假阳性。因而认为高压加热修复抗原应根据不同抗体以及不同阳性定位选用不同的修复方法和时间。
参考文献
1 顾长芳，张 雷，江 迎.应用锅和微波炉法进行石蜡切片抗原修复的比较.中华病理学杂志，1997;26:125
(收稿:1998-09-16 修回:1999-04-16), http://www.100md.com
单位：福建医科大学病理解剖学教研室(福州 350004)
关键词：抗原，修复；高压加热
福建医科大学学报990245
几年来，抗原修复广泛应用于免疫组化检测，以高压锅加热修复应用最广，但缺乏明确的针对性，有时试验结果会出现无法解释的假阳性或假阴性，为此本文根据不同抗体的阳性信号定位即定位于细胞核、细胞浆(或细胞膜)，而采用相应的修复方法和时间，以期提高阳性率。
1 材料与方法
1.1 材料 家用高压锅(20cm,浙江苏泊尔有限公司) ，自制金属玻片架，电炉2000W，烧杯600ml。24例肝癌组织取自附属第一医院肝癌手术切除标本。10%福尔马林固定，石蜡包埋，4μm切片。即用型的试剂、缓冲液、 抗体修复液由福州迈新公司提供。
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1.2 方法
1.2.1 玻片清洁液处理，流水冲洗，95%酒精浸片，100℃烤片，冷却，涂上多聚赖氨酸(1∶10)晾干备用。
1.2.2 切片脱蜡水化至PBS备用。
1.2.3 抗原修复
(1)抗体表达为核阳性的修复 取已配好的pH为6.0的柠檬酸修复液适量于高压锅内，置电炉上加热到沸，直接放入切片，加盖扣上安全阀，加热到喷气即计时，持续5min切断电源维持3min离开火源，置于已备好的水中，打开水龙头冲淋，使其迅速冷却至室温，打开盖子，取出切片，蒸馏水洗2次，PBS洗3次。
(2)抗体表达为浆(或膜)阳性的修复 高压锅内放适量水，置于电炉上加热至沸。在600ml烧杯中放入修复液500ml，置于沸水中，加热约3min后把切片放入修复液中加盖扣安全阀，继续加热至喷气计时持续2min，切断电源维持1min后离开火源，同上法冷却、洗片。
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1.2.4 免疫组化SP法,按试剂说明。
2 结 果
用不同的修复方法对24例肝癌组织分别进行拓扑异构酶Ⅱ(ToPoⅡ)、谷胱甘肽S转移酶π亚型(GST-π)、P-糖蛋白的检测(附表)。
附表 24例肝癌组织不同修复法结果 抗体
不修复
浆阳性修复法
核阳性修复法
浆阳性
核阳性
浆阳性
核阳性
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浆阳性
核阳性
ToPo-Ⅱ(核型)
0
0
5
2
0
16
GST-π(浆型)
5
0
18
, 百拇医药 0
5
0
P-糖蛋白(浆型)
0
0
15
0
3
0
n=24
3 讨 论
3.1 从上表可见用不同的修复法得到阳性结果不同，用核型的ToPo-Ⅱ若不进行修复，结果全部阴性，而用浆阳性修复法核阳性仅为2例，浆假阳性则有5例，而用核阳性修复法，有16例阳性，阳性率明显提高。
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3.2 用浆阳性修复法对24例肝癌组织分别用浆型的GST-π和P-糖蛋白检测，阳性率比不修复或用核阳性修复法也明显提高(各抗体间是否存在交叉阳性有待进一步探讨)。
3.3 浆阳性修复法是把抗原修复液和切片放入烧杯，然后把烧杯放入高压锅内隔水加热，所需加热时间短，修复液少。核阳性修复法则是直接把抗原修复液和切片放入高压锅内加热，所需时间长，修复液量多。本文根据不同的阳性定位选用不同的修复方法，更具有针对性、稳定性，阳性率明显提高。
3.4 多数学者认为组织经10%福尔马林固定后，抗原会被溶解，弥散，丢失或产生蛋白质交联产物使抗原被掩盖，导致抗原性降低，免疫组化结果抗原不表达，阳性率较低。特别是那些固定时间长，保存久远的蜡块。而高压加热能把被掩盖或交联变性的抗原暴露或修复，使免疫组化的结果更准确可靠。
3.5 免疫组化是通过抗体特异地与组织中抗原结合而表达出来，所以抗原修复的方法直接影响到组织中抗原的暴露，因此不能用统一的修复方法，特别是核阳性的组织，修复时间一定要超过2min[1]，否则出现浆假阳性或细胞核阳性不表达。而本应浆阳性的组织若不以适当方法加以修复则出现假阳性。因而认为高压加热修复抗原应根据不同抗体以及不同阳性定位选用不同的修复方法和时间。
参考文献
1 顾长芳，张 雷，江 迎.应用锅和微波炉法进行石蜡切片抗原修复的比较.中华病理学杂志，1997;26:125
(收稿:1998-09-16 修回:1999-04-16), http://www.100md.com