24例儿童非霍奇金淋巴瘤IgH和TCR基因重排的研究
作者：步嵘 王耀平 张宗德 林梓 应大明
单位：200092 上海第二医科大学附属新华医院
关键词：非霍奇金淋巴瘤；抗原受体基因重排；聚合酶链反应
上海医学990209 【摘要】 目的 检测24例儿童非霍奇金淋巴瘤(NHL)IgH和TCR基因重排，以便选择恰当的引物组合用于NHL VI期患儿微小残留病(MRD)的检测。方法 以Chelex 100为介质，从初诊的NHL患儿病理切片中提取DNA，采用聚合酶链反应(PCR)技术检测IgH、TCRβ、TCRδ和TCRγ基因重排。结果 在B-NHL中，IgH、TCRβ、TCRδ和TCRγ基因重排的检出结果分别为10/13(77%)例、13/13(100%)例、4/13(31%)例和8/13(62%)例；在T-NHL中，上述不同基因重排的检出结果分别为3/11(27%)例、10/11(91%)例、3/11(27%)例和3/11(27%)例。在13例B-NHL中，用TCRγ和TCRβ中的D1 J2引物组合至少可检出有单一条带的有11例(85%)，再加IgH引物时可达13例(100%)。而在11例T-NHL中，用TCRγ和TCRβ中的D2 J2引物组合至少可检出单一条带的有8例(73%)，再增加其他引物，不能显著提高单一条带的检出率。结论 可用TCRγ和TCRβ D1 J1基因做为B-NHL的MRD检测标记，必要时加用IgH基因重排；选用TCRγ和TCRβ D2 J2基因为T-NHL的MRD检测标记。
, 百拇医药
The IgH and TCR gene rearrangements in 24 children with NHL
BU Rong, WANG Yaoping, ZHANG Zonde, et al.
Xinhua Hospital, Shanghai Second Medical University, 200092
【Abstract】 Objective To study the IgH and TCR gene rearrangements in diagnosis of non-Hodgkins lymphoma (NHL) in 24 pediatric patients to choose the optimal regimen for those with MRD.Methods After extraction of DNA from the paraffin-fixed blocks with chelex 100, IgH, TCRβ, TCRδ and TCRγ gene rearrangements were detected by using polymerase chain reaction (PCR) technique.Results In 13 B-NHL, clonal gene rearragements of IgH, TCRβ, TCRδ and TCRγ were detected in 10/13(77%),13/13(100%),4/13(31%) and 8/13(62%), respectively. In 11 T-NHL, clonal gene rearrangements of IgH, TCRβ, TCRδ and TCRγ were detected in 3/11(27%),10/11(91%),3/11(27%) and 3/11(27%), respectively. The frequencies of one band amplified by using TCRγ and TCRβ D1 J2 primers or TCRγ, TCRβ D1 J2 and IgH primers were 11/13(85%) in B-NHL; and that amplified by using TCRγ and TCRβ D2 J2 primers were 8/11(73%) in T-NHL. Conclusion It is optimal to detect MRD by using PCR-mediated amplification of TCRγ and TCRβ D2 J2 gene rearrangements for T-NHL; TCRγ and TCRβ D1 J2 gene rearrangements for B-NHL, then IgH gene rearrangement if necessary in addition.
, 百拇医药
【Key words】 Lymphoma/non-Hodgkin's Antigen receptor gene rearrangements Polymerase chain reaction
应用聚合酶链反应(PCR)技术检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)细胞免疫球蛋白重链(Immunogloblin Heavy Chain, IgH)和T细胞受体(T Cell Receptor, TCR)基因克隆性重排的研究已有不少报道。但以往主要对其中的一个或少数几个标记进行检测，且标本量不多。我们在以往工作的基础上检测了24例NHL患儿病理切片的IgH、 TCRβ、TCRδ和TCRγ基因重排，以便选择恰当的组合用于肿瘤微小残留病(Minimal residual disease, MRD)的检测。
材料与方法
一、材料
本文收集我院1996年3月～1997年5月24例儿童NHL患者病理切片，其中B-NHL 13例，T-NHL 11例。
, 百拇医药
二、DNA的提取
1. 用清洁无污染的刀片切取10μm厚切片1～2片，碾碎，置于Eppendorf管中，加二甲苯1ml，间歇震荡30分钟，15 000r/min离心3分钟，弃上清液脱蜡；加无水乙醇2ml，间歇震荡10分钟弃上清液，重复2次；挥发净乙醇，加去离子水300μl，间歇震荡30分钟。
2. 15 000r/min离心5分钟，弃上清液，加10% Chelex 100 200μl，56℃温育30分钟。
3. 超速震荡15秒，沸水浴8分钟，再超速震荡5秒钟，15 000r/min离心5分钟，上清液即可作为模板进行PCR扩增[1，2，3]。
三、PCR引物及产物
1. 以FR3A，LJH和VLJH[4]为引物，用半巢式PCR检测IgH基因重排，典型产物为100bp左右的条带，可为一条或多条。
, 百拇医药
2. 检测TCR β基因重排的引物有5条，分别为V，D1，D2，J1和J2，分别扩增VJ1，VJ2，D1J1，D1J2，D2J1和D2J2六类重排片段，所得产物为55～90bp[5]。
3. 检测TCRγ基因重排的引物为混合引物，其中V区的V2，V3，V4，V8，V9和J区的JGT12，JGT3，JGT4引物组成混合引物I；V5，V10，V11，V12和JGT12，JGT3，JGT4组成混合引物II。先用混合引物I扩增，阴性标本再用混合引物II扩增，阳性条带位于170～230bp之间[4]。
, 百拇医药
4. TCRδ基因重排检测的引物分别为V2和D3，扩增产物为140bp左右[6]。
上述引物由赛百胜公司(美国)合成。
四、PCR方法
1. PCR反应体系为25μl，含模板DNA 5μl，10Xbuffer 2.5μl，dNTPs200μmol/L，引物15pmol,Taq酶0.5U。每管加等体积无菌石蜡油。
2. PCR循环程序为94℃预变性5分钟，然后94℃ 1分钟，58℃ 1分钟，72℃ 1分钟，最后一循环结束时，72℃再延长10分钟。其中，在检测IgH基因重排的第二轮扩增时，复性温度升至60℃，余不变。循环圈数在检测TCR β基因重排时为40圈，余为35圈。
五、产物检测
, 百拇医药
取20μl反应产物，于8%聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳：150V，2小时，EB染色后紫外灯下观察并拍照。
结果
一、B-NHL各项重排的检出结果
10/13(77%)例检出IgH基因重排。4/13(31%)检出TCRδ基因重排，8/13(62%)检出TCRγ基因重排(见表1)。13/13(100%)检测TCRβ基因重排(具体不同重排形式的检出结果见表2)。
二、T-NHL各项重排的检出结果
3/11(27%)检出IgH基因重排，3/11(27%)例检出TCRδ基因重排，3/11(27%)例检出TCRγ基因重排，10/11(91%)例检出有TCRβ基因重排(见表1)。
三、单一条带检出结果
, 百拇医药
各重排形式单一条带的检出结果见表1，2。
表1 24例NHL患儿IgH，TCRγ和TCR δV2-D3
基因重排检出结果 类型
例数
检出例数
检出率(%)
IgH
TCRγ
TCR δV2-D3
IgH
TCRγ
, 百拇医药
TCR δV2-D3
B-NHL
13
10(10)
8(8)
4(3)
77
62
31
T-NHL
11
3(1)
, 百拇医药 3(2)
3(3)
27
27
27
B-NHL患者中，用TCRγ和TCRβ中的D1 J2引物组合至少可检出单一条带的有11例(85%)，再加IgH引物时可达13例(100%)。对于T-NHL患者，用TCRγ和TCRβ中的D2 J2引物组合至少可检出单一条带的有8例(73%)，再增加其他引物，不能显著提高单一条带的检出率。表2 24例NHL患儿TCRβ基因不同重排及其单一条带重排的检出结果 类型
例数
不同重排检出例数
, http://www.100md.com
检出率(%)
VJ1
VJ2
D1J1
D1J2
D2J1
D2J2
VJ1
VJ2
D1J1
, 百拇医药
D1J2
D2J1
D2J2
B-NHL
13
2(2)
4(4)
0
12(10)
0
9(4)
, 百拇医药 15
31
0
92
0
69
T-NHL
11
5(2)
2(2)
0
2(2)
0
8(6)
, 百拇医药
45
18
0
18
0
73
四、统计学处理结果
经χ2检验，IgH的检出率及单一条带的检出率在B-NHL和T-NHL间的差异有显著性，P值分别为0.0071和0.043；TCRβ中的D1 J2重排的检出率及其单一条带重排的检出率在B-NHL和T-NHL间的差异有显著性，P值分别为0.0011和0.0140。其余标记的重排检出率及其单一条带重排的检出率在T-NHL和B-NHL间的差异均无显著性，P>0.05。讨论
, http://www.100md.com
Chelex 100为介质提取DNA进行PCR扩增，省时且不易污染，有很高的实用价值。
在本组13例B-NHL中，IgH基因重排检出率与国外具有可比性的相关资料相比，差异无显著性[4，7]；与国内成人的相关资料相比，结果也无差异[8]。但在TCRγ基因重排方面，本组数据同时明显高于国内外运用相同引物进行的有关研究的结果[4，8]，年龄因素的影响需充分考虑。在TCRβ重排方面，本组13例标本全部至少检出一种形式的重排，明显高于国内张建中等[9]有关成人及国外Diss等[10]的相关报道，但由于选用的引物不同，或标本选择无随机性，可比性不大。
经STATISTICA 4.5统计软件进行χ2检验，B-NHL中的IgH基因重排率高于T-NHL中的，这与国内外的有关报道一致；而TCRγ，TCRVδ2-Dδ3及检出至少一项TCRβ重排的检出率在两组标本间的差异无显著性；但TCRβ重排中的D1J2引物对的基因重排检出率在B-NHL中明显高于T-NHL，而其余各引物对的基因重排检出率则无差异。
, 百拇医药
从本组B-NHL的数据来看，11/13例(85%)至少出现TCRγ和TCRβ D1J2两种基因中的一种重排，且至少有一种的PCR产物为单一条带，再增加IgH引物时可达100%(13/13例)，但两种组合的差异无显著性，P=0.4617。而在T-NHL中，8/11例(73%)至少出现TCRγ和TCRβ D2J2两种基因中的一种重排，且至少有一种的PCR产物为单一条带，再增加其他引物时不能提高单一条带重排的检出率。在以IgH和TCR基因重排为标记进行MRD检测时，由于肿瘤细胞的寡克隆性可导致假阴性的结果[11，12]，同时上述抗原受体基因各自在不同淋巴系统肿瘤中的重排率不够广，因此，如何选择恰当的引物组合以减少寡克隆性重排的干扰，关系到临床实际运用的可靠性。故仅从本组数据的结果来看，可考虑首选TCRγ和TCRβ D1J2基因为B-NHL的MRD检测标记，必要时加用IgH基因重排；选用TCRγ和TCRβ D2J2基因为T-NHL的MRD检测标记。
, 百拇医药
参考文献
[1] Walsh SP, Metzger DA, Higuchi R, et al. Chelex 100 as medium for simple extraction of DNA for PCR-based typing from forensic material. Bio Techniques, 1991,10:506-513.
[2] Sepp R, Szabo I, Uda H, et al. Rapid techniques for DNA extraction from routinely processed archival tissue for use in PCR. J Clin Pathol, 1994,47:318-323.
[3] 步嵘，王耀平，林梓.47例儿童急性淋巴细胞性白血病IgH和TCR基因重排.中华儿科杂志，1998，36：346-348.
, 百拇医药
[4] Trainor KJ, Brisco MJ, Wan JH, et al. Gene rearrangement in B-and T-lymphoproliferative disease detected by the polymerase chain reaction. Blood, 1991,78:192-196.
[5] Mc Carthy KP, Sloane JP, Kabarowski JS, et al. The rapid detection of T-cell proliferation in patients with lymphoid disorders. Am J Pathol, 1991,138:821-828.
[6] Steward CG, Goulden NJ, Katz F, et al. A polymerase chain reaction studies of the stability of Ig Heavy-chain and T-cell receptor δ gene rearrangements between presentation and relapse of childhood B-lineage cell lymphoblastic leukemia. Blood, 1994,83:1355-1362.
, http://www.100md.com
[7] Aubin J, Davi F, Nguyeb-Salomon F, et al. Description of a novel FR1 IgH PCR strategy and its comparison with three other strategies for the detection of clonality in B cell malignancies. 1995;9:471-479.
[8] 张建中，晏良遂.PCR技术检测IgH和TCRγ基因重排及其在淋巴瘤诊断中的初步应用.中华病理学杂志，22：337-340.
[9] 张建中，晏良遂，白炎，等.Southern blot分析Ig和TCR基因重排及其在非何杰金氏淋巴瘤诊断中的应用.中华肿瘤杂志，1993；15：259-262.
[10] Diss T C, Watts M, Burke L X, et al. The PCR in the demonstration of monoclonality in T cell lymphomas. J Clin Pathol, 1995;48:1045-1050.
, 百拇医药
[11] van Dongen JJM, Breit TM, Adriaansen HJ, et al. Detection of minimal residual disease in acute leukemia by immunological marker analysis and polymerase chain reaction. Leukemia, 1992,6[suppl]:47-59.
[12] Potter MN, Cross NCP, van Dongen JJM, et al. Molecular evidence of minimal residual disease after treatment for leukemia and lymphoma: an updated meeting report and review. Leukemia, 1993,7:1302-1314.
(收稿：1998-11-12), 百拇医药
单位：200092 上海第二医科大学附属新华医院
关键词：非霍奇金淋巴瘤；抗原受体基因重排；聚合酶链反应
上海医学990209 【摘要】 目的 检测24例儿童非霍奇金淋巴瘤(NHL)IgH和TCR基因重排，以便选择恰当的引物组合用于NHL VI期患儿微小残留病(MRD)的检测。方法 以Chelex 100为介质，从初诊的NHL患儿病理切片中提取DNA，采用聚合酶链反应(PCR)技术检测IgH、TCRβ、TCRδ和TCRγ基因重排。结果 在B-NHL中，IgH、TCRβ、TCRδ和TCRγ基因重排的检出结果分别为10/13(77%)例、13/13(100%)例、4/13(31%)例和8/13(62%)例；在T-NHL中，上述不同基因重排的检出结果分别为3/11(27%)例、10/11(91%)例、3/11(27%)例和3/11(27%)例。在13例B-NHL中，用TCRγ和TCRβ中的D1 J2引物组合至少可检出有单一条带的有11例(85%)，再加IgH引物时可达13例(100%)。而在11例T-NHL中，用TCRγ和TCRβ中的D2 J2引物组合至少可检出单一条带的有8例(73%)，再增加其他引物，不能显著提高单一条带的检出率。结论 可用TCRγ和TCRβ D1 J1基因做为B-NHL的MRD检测标记，必要时加用IgH基因重排；选用TCRγ和TCRβ D2 J2基因为T-NHL的MRD检测标记。
, 百拇医药
The IgH and TCR gene rearrangements in 24 children with NHL
BU Rong, WANG Yaoping, ZHANG Zonde, et al.
Xinhua Hospital, Shanghai Second Medical University, 200092
【Abstract】 Objective To study the IgH and TCR gene rearrangements in diagnosis of non-Hodgkins lymphoma (NHL) in 24 pediatric patients to choose the optimal regimen for those with MRD.Methods After extraction of DNA from the paraffin-fixed blocks with chelex 100, IgH, TCRβ, TCRδ and TCRγ gene rearrangements were detected by using polymerase chain reaction (PCR) technique.Results In 13 B-NHL, clonal gene rearragements of IgH, TCRβ, TCRδ and TCRγ were detected in 10/13(77%),13/13(100%),4/13(31%) and 8/13(62%), respectively. In 11 T-NHL, clonal gene rearrangements of IgH, TCRβ, TCRδ and TCRγ were detected in 3/11(27%),10/11(91%),3/11(27%) and 3/11(27%), respectively. The frequencies of one band amplified by using TCRγ and TCRβ D1 J2 primers or TCRγ, TCRβ D1 J2 and IgH primers were 11/13(85%) in B-NHL; and that amplified by using TCRγ and TCRβ D2 J2 primers were 8/11(73%) in T-NHL. Conclusion It is optimal to detect MRD by using PCR-mediated amplification of TCRγ and TCRβ D2 J2 gene rearrangements for T-NHL; TCRγ and TCRβ D1 J2 gene rearrangements for B-NHL, then IgH gene rearrangement if necessary in addition.
, 百拇医药
【Key words】 Lymphoma/non-Hodgkin's Antigen receptor gene rearrangements Polymerase chain reaction
应用聚合酶链反应(PCR)技术检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)细胞免疫球蛋白重链(Immunogloblin Heavy Chain, IgH)和T细胞受体(T Cell Receptor, TCR)基因克隆性重排的研究已有不少报道。但以往主要对其中的一个或少数几个标记进行检测，且标本量不多。我们在以往工作的基础上检测了24例NHL患儿病理切片的IgH、 TCRβ、TCRδ和TCRγ基因重排，以便选择恰当的组合用于肿瘤微小残留病(Minimal residual disease, MRD)的检测。
材料与方法
一、材料
本文收集我院1996年3月～1997年5月24例儿童NHL患者病理切片，其中B-NHL 13例，T-NHL 11例。
, 百拇医药
二、DNA的提取
1. 用清洁无污染的刀片切取10μm厚切片1～2片，碾碎，置于Eppendorf管中，加二甲苯1ml，间歇震荡30分钟，15 000r/min离心3分钟，弃上清液脱蜡；加无水乙醇2ml，间歇震荡10分钟弃上清液，重复2次；挥发净乙醇，加去离子水300μl，间歇震荡30分钟。
2. 15 000r/min离心5分钟，弃上清液，加10% Chelex 100 200μl，56℃温育30分钟。
3. 超速震荡15秒，沸水浴8分钟，再超速震荡5秒钟，15 000r/min离心5分钟，上清液即可作为模板进行PCR扩增[1，2，3]。
三、PCR引物及产物
1. 以FR3A，LJH和VLJH[4]为引物，用半巢式PCR检测IgH基因重排，典型产物为100bp左右的条带，可为一条或多条。
, 百拇医药
2. 检测TCR β基因重排的引物有5条，分别为V，D1，D2，J1和J2，分别扩增VJ1，VJ2，D1J1，D1J2，D2J1和D2J2六类重排片段，所得产物为55～90bp[5]。
3. 检测TCRγ基因重排的引物为混合引物，其中V区的V2，V3，V4，V8，V9和J区的JGT12，JGT3，JGT4引物组成混合引物I；V5，V10，V11，V12和JGT12，JGT3，JGT4组成混合引物II。先用混合引物I扩增，阴性标本再用混合引物II扩增，阳性条带位于170～230bp之间[4]。
, 百拇医药
4. TCRδ基因重排检测的引物分别为V2和D3，扩增产物为140bp左右[6]。
上述引物由赛百胜公司(美国)合成。
四、PCR方法
1. PCR反应体系为25μl，含模板DNA 5μl，10Xbuffer 2.5μl，dNTPs200μmol/L，引物15pmol,Taq酶0.5U。每管加等体积无菌石蜡油。
2. PCR循环程序为94℃预变性5分钟，然后94℃ 1分钟，58℃ 1分钟，72℃ 1分钟，最后一循环结束时，72℃再延长10分钟。其中，在检测IgH基因重排的第二轮扩增时，复性温度升至60℃，余不变。循环圈数在检测TCR β基因重排时为40圈，余为35圈。
五、产物检测
, 百拇医药
取20μl反应产物，于8%聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳：150V，2小时，EB染色后紫外灯下观察并拍照。
结果
一、B-NHL各项重排的检出结果
10/13(77%)例检出IgH基因重排。4/13(31%)检出TCRδ基因重排，8/13(62%)检出TCRγ基因重排(见表1)。13/13(100%)检测TCRβ基因重排(具体不同重排形式的检出结果见表2)。
二、T-NHL各项重排的检出结果
3/11(27%)检出IgH基因重排，3/11(27%)例检出TCRδ基因重排，3/11(27%)例检出TCRγ基因重排，10/11(91%)例检出有TCRβ基因重排(见表1)。
三、单一条带检出结果
, 百拇医药
各重排形式单一条带的检出结果见表1，2。
表1 24例NHL患儿IgH，TCRγ和TCR δV2-D3
基因重排检出结果 类型
例数
检出例数
检出率(%)
IgH
TCRγ
TCR δV2-D3
IgH
TCRγ
, 百拇医药
TCR δV2-D3
B-NHL
13
10(10)
8(8)
4(3)
77
62
31
T-NHL
11
3(1)
, 百拇医药 3(2)
3(3)
27
27
27
B-NHL患者中，用TCRγ和TCRβ中的D1 J2引物组合至少可检出单一条带的有11例(85%)，再加IgH引物时可达13例(100%)。对于T-NHL患者，用TCRγ和TCRβ中的D2 J2引物组合至少可检出单一条带的有8例(73%)，再增加其他引物，不能显著提高单一条带的检出率。表2 24例NHL患儿TCRβ基因不同重排及其单一条带重排的检出结果 类型
例数
不同重排检出例数
, http://www.100md.com
检出率(%)
VJ1
VJ2
D1J1
D1J2
D2J1
D2J2
VJ1
VJ2
D1J1
, 百拇医药
D1J2
D2J1
D2J2
B-NHL
13
2(2)
4(4)
0
12(10)
0
9(4)
, 百拇医药 15
31
0
92
0
69
T-NHL
11
5(2)
2(2)
0
2(2)
0
8(6)
, 百拇医药
45
18
0
18
0
73
四、统计学处理结果
经χ2检验，IgH的检出率及单一条带的检出率在B-NHL和T-NHL间的差异有显著性，P值分别为0.0071和0.043；TCRβ中的D1 J2重排的检出率及其单一条带重排的检出率在B-NHL和T-NHL间的差异有显著性，P值分别为0.0011和0.0140。其余标记的重排检出率及其单一条带重排的检出率在T-NHL和B-NHL间的差异均无显著性，P>0.05。讨论
, http://www.100md.com
Chelex 100为介质提取DNA进行PCR扩增，省时且不易污染，有很高的实用价值。
在本组13例B-NHL中，IgH基因重排检出率与国外具有可比性的相关资料相比，差异无显著性[4，7]；与国内成人的相关资料相比，结果也无差异[8]。但在TCRγ基因重排方面，本组数据同时明显高于国内外运用相同引物进行的有关研究的结果[4，8]，年龄因素的影响需充分考虑。在TCRβ重排方面，本组13例标本全部至少检出一种形式的重排，明显高于国内张建中等[9]有关成人及国外Diss等[10]的相关报道，但由于选用的引物不同，或标本选择无随机性，可比性不大。
经STATISTICA 4.5统计软件进行χ2检验，B-NHL中的IgH基因重排率高于T-NHL中的，这与国内外的有关报道一致；而TCRγ，TCRVδ2-Dδ3及检出至少一项TCRβ重排的检出率在两组标本间的差异无显著性；但TCRβ重排中的D1J2引物对的基因重排检出率在B-NHL中明显高于T-NHL，而其余各引物对的基因重排检出率则无差异。
, 百拇医药
从本组B-NHL的数据来看，11/13例(85%)至少出现TCRγ和TCRβ D1J2两种基因中的一种重排，且至少有一种的PCR产物为单一条带，再增加IgH引物时可达100%(13/13例)，但两种组合的差异无显著性，P=0.4617。而在T-NHL中，8/11例(73%)至少出现TCRγ和TCRβ D2J2两种基因中的一种重排，且至少有一种的PCR产物为单一条带，再增加其他引物时不能提高单一条带重排的检出率。在以IgH和TCR基因重排为标记进行MRD检测时，由于肿瘤细胞的寡克隆性可导致假阴性的结果[11，12]，同时上述抗原受体基因各自在不同淋巴系统肿瘤中的重排率不够广，因此，如何选择恰当的引物组合以减少寡克隆性重排的干扰，关系到临床实际运用的可靠性。故仅从本组数据的结果来看，可考虑首选TCRγ和TCRβ D1J2基因为B-NHL的MRD检测标记，必要时加用IgH基因重排；选用TCRγ和TCRβ D2J2基因为T-NHL的MRD检测标记。
, 百拇医药
参考文献
[1] Walsh SP, Metzger DA, Higuchi R, et al. Chelex 100 as medium for simple extraction of DNA for PCR-based typing from forensic material. Bio Techniques, 1991,10:506-513.
[2] Sepp R, Szabo I, Uda H, et al. Rapid techniques for DNA extraction from routinely processed archival tissue for use in PCR. J Clin Pathol, 1994,47:318-323.
[3] 步嵘，王耀平，林梓.47例儿童急性淋巴细胞性白血病IgH和TCR基因重排.中华儿科杂志，1998，36：346-348.
, 百拇医药
[4] Trainor KJ, Brisco MJ, Wan JH, et al. Gene rearrangement in B-and T-lymphoproliferative disease detected by the polymerase chain reaction. Blood, 1991,78:192-196.
[5] Mc Carthy KP, Sloane JP, Kabarowski JS, et al. The rapid detection of T-cell proliferation in patients with lymphoid disorders. Am J Pathol, 1991,138:821-828.
[6] Steward CG, Goulden NJ, Katz F, et al. A polymerase chain reaction studies of the stability of Ig Heavy-chain and T-cell receptor δ gene rearrangements between presentation and relapse of childhood B-lineage cell lymphoblastic leukemia. Blood, 1994,83:1355-1362.
, http://www.100md.com
[7] Aubin J, Davi F, Nguyeb-Salomon F, et al. Description of a novel FR1 IgH PCR strategy and its comparison with three other strategies for the detection of clonality in B cell malignancies. 1995;9:471-479.
[8] 张建中，晏良遂.PCR技术检测IgH和TCRγ基因重排及其在淋巴瘤诊断中的初步应用.中华病理学杂志，22：337-340.
[9] 张建中，晏良遂，白炎，等.Southern blot分析Ig和TCR基因重排及其在非何杰金氏淋巴瘤诊断中的应用.中华肿瘤杂志，1993；15：259-262.
[10] Diss T C, Watts M, Burke L X, et al. The PCR in the demonstration of monoclonality in T cell lymphomas. J Clin Pathol, 1995;48:1045-1050.
, 百拇医药
[11] van Dongen JJM, Breit TM, Adriaansen HJ, et al. Detection of minimal residual disease in acute leukemia by immunological marker analysis and polymerase chain reaction. Leukemia, 1992,6[suppl]:47-59.
[12] Potter MN, Cross NCP, van Dongen JJM, et al. Molecular evidence of minimal residual disease after treatment for leukemia and lymphoma: an updated meeting report and review. Leukemia, 1993,7:1302-1314.
(收稿：1998-11-12), 百拇医药