麝香保心丸对心肌一氧化氮合酶及左室功能的影响△
作者：罗心平 曾治宇 施海明 范维琥 载瑞鸿
单位：上海医科大学华山医院(200040)
关键词：麝香保心丸；心肌梗死；一氧化氮；心功能
中草药/990216 摘 要 观察了麝香保心丸对心肌组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达及左室功能的影响。在大鼠心梗模型上治疗组给予麝香保心丸33 mg/d 2或6周，用心导管测定心脏功能，免疫组织化学法测定心肌eNOS水平，结果表明：麝香保心丸可同时增加心肌eNOS的表达水平、改善心梗后左室收缩及舒张功能。
Effects of Heart-protecting Musk Pill on
the Expression of Myocardial Endothelial
, http://www.100md.com
Nitric Oxide Synthase and Left Ventricular
Function after Myocardial Infarction in Rats
Luo Xinping, Zeng Zhiyu, Shi Haiming, et al
.(Department of Cardiology, Huashan Hospital, Shanghai University of Medical Sciences， Shanghai 200040)
Abstract Effects of heart protecting musk pill (HMP), a traditional medical preparation for the treatment of myocardial infarction, on the expression of myocardial endothelial NO synthase (eNOS) and left ventricular function of acute myocardial infarcition (AMI) rat model were studied. AMI rat models were prepared by coronary artery ligation and randomized into 4 groups: Two groups of AMI-2 and AMI-6 were kept as controls, and the other two, were treated with HMP 33 mg/d by intubation for 2 weeks (HMP-2) or 6 weeks (HMP-6). Cardiac functions (LVESP, LVEDP, dp/dtmax, dp/dtmin) were measured at the end of 2nd and sixth week of treatment with left ventricular catheter insertion. The level of myocardial eNOS were measured by immunohistochemical staining and image analysis. Results showed that the 2 HMP treated groups resulted in an increase of expression of myocardial eNOS (P<0.05) and an improved systolic, and diastolic functions of left ventricular at the end of 2nd and sixth week of treatment as compared with the control (P<0.05) .It may be concluded that HMP can increase the level of myocardial eNOS and improve cardiac functions after myocardial infarction at the same time.
, 百拇医药
Key words heart-protecting musk pill (HMP) endothelial ntric oxide synthaes (eNOS)
内皮型一氧化氮合酶(eNOS)是心肌组织内的主要存在形式；一氧化氮(NO)对心功能的影响是目前研究的热点，至今仍未阐明〔1～3〕。Paulus报道NO有负性肌力作用〔2〕，Crystal等则认为NO不改变心肌收缩力及心肌氧耗量〔3〕。麝香保心丸作为一种有效的急救中成药，其减少实验性心肌梗死面积，增加冠心病患者缺血区的血流灌注等作用已被证实〔1～3〕，还发现其有增加血管壁eNOS表达的作用。笔者就它对心梗后左室功能及心肌eNOS表达的影响进行了探讨。
1 材料与方法
1.1 动物分组及心肌梗死模型的建立：选用250～300 g雄性SD大鼠60只(中科院上海分院实验动物中心提供)，参照文献〔1〕的方法结扎冠脉形成心肌梗死动物模型；结扎部位位于左侧冠状动脉起源点下1～2 mm处。动物随 机分为5组：①假手术对照组(Sham)12只，开胸打开心包后立即缝合，常规饲养2周。②心肌梗死对照组(AMI2和AMI6)各15只，心梗造模后分别常规饲养2周或6周。③麝香保心丸2周组(HMP2)及6周组(HMP6)各12只，心梗造模后立即用麝香保心丸33 mg/d(上海中药一厂，批号961029)+生理盐水1 mL ig 2或6周。2周及6周时分别称重并处死动物，进行下列指标测定。共49只大鼠完成实验。
, http://www.100md.com
1.2 心功能测定：大鼠10%水合氯醛麻醉固定后分离右侧颈总动脉，插入内充37 ℃肝素生理盐水1 mm径的塑料管至左室腔，用NIHON KOHOEN RM-6018型多道生理记录仪描记左室收缩末压(LVESP)、左室舒张末压(LVEDP)以及左室最大收缩、舒张期压力微分(dp/dtmax、dp/dtmin)，以反映左室功能。所有电信号均用SMUP计算机软件分析处理(上海医科大学生理教研室提供)。
1.3 免疫组织化学技术测量左室非梗死区(含梗死周边区)心肌组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达量：取材心肌后冰冻切片(厚度5～8 μm )，按标准技术进行免疫组化切片染色操作(大鼠eNOS单抗购自Gene公司；BA-4000 ABC试剂盒购自美国Vector Laboratories公司)，染色后在LEICA图象分析仪上进行eNOS的表达量的定量分析。主要步骤为：每张切片在非梗死区左室壁采样测量3处，读取测量总面积(View area)、eNOS阳性染色区域面积(Area)及平均光亮度(light)；平均计值后分别计算每只大鼠单位面积下(μm2)eNOS平均光亮度，后进行组间比较。公式=Area×light/View area
, 百拇医药
1.4 统计处理：所有计量资源均以均数±标准差(
±s)表示，用SAS软件分析数据、进行两两均数的比较。
2 结果
2.1 麝香保心丸对心梗大鼠早期、晚期心功能的影响：见表1。与AMI组相比，2周时麝香保心丸可轻度升高LVESP，但6周时不明显。2周及6周时，麝香保心丸均可降低LVEDP(P<0.05)；dp/dtmax、dp/dtmin值与AMI组相比均有增加(P<0.05)，提示它可改善左室收缩及舒张功能。
2.2 麝香保心丸对心梗大鼠左室非梗死区
表1 麝香保心丸对心梗大鼠早期及远期心功能的影响(±s) 组别
, http://www.100md.com
例数
LVESP
LVEDP
dp/dtmax
dp/dtmin
(mmHg)
(mmHg)
(mmHg/s)
(mmHg/s)
Sham
10
123.67±10.33
, 百拇医药
-3.00±5.36
4 292.63±637.99
4 321.24±597.50
AMI2
12
103.00±9.94△
12.25±7.94△
2 572.69±573.14△
2 444.38±396.88△
HMP2
, http://www.100md.com
9
116.57±13.55*
5.71±3.09*
3 490.15±485.93**
3 147.29±591.29*
AMI6
11
106.38±10.26△
9.46±8.45△
2 657.77±476.04△
, http://www.100md.com
2 500.27±149.38△
HMP6
7
109.56±11.29
2.00±7.55**
3 351.48±424.89*
2 981.83±502.56*
与Sham组相比：△P<0.05； 与AMI组相比：*P<0.05 **P<0.01心肌组织eNOS表达量的影响：显微镜下见eNOS阳性染色区域主要分布于心肌间质；与AMI组相比，早期(2周)及6周时，麝香保心丸均增加了心肌组织eNOS的表达，见表2。表2 麝香保心丸对心梗大鼠左室非梗死区心肌eNOS平均光亮度的影响(±s) 组别
, 百拇医药
例数
eNOS平均光亮度/(μm2)
AMI2
12
13.89±8.83
HMP2
9
51.94±6.79*
AMI6
11
19.36±11.07
HMP6
, http://www.100md.com
7
66.21±13.82*
与相应AMI组相比：*P<0.05
3 讨论
文献报道心脏中的一氧化氮合酶主要为eNOS，它主要分布于心肌间动脉、静脉及毛细血管网，其作用是催化L-精氨酸产生NO，NO可快速地扩散至邻近的心肌细胞，它对心肌收缩性的影响是目前的研究热点〔1〕。多数研究认为NO的急性效果是增加心肌细胞内的cGMP浓度，进而抑制心肌收缩力、改善心肌的舒张期顺应性〔2〕；但也有作者认为NO对心肌收缩力无明显影响〔3〕。
麝香保心丸作为一种常用的急救中成药，已用于冠心病的治疗中〔5～7〕，它对心梗后左室功能有何影响却不清楚。我们的研究表明：麝香保心丸对心梗后的左室收缩及舒张功能都有不同程度的改善。同时与心梗对照组相比，麝香保心丸还能增加心肌组织eNOS的表达；推断eNOS的表达增加会增加心肌内NO的产量，而NO的增加会引起心肌收缩性能的降低〔2〕；但本文结果却同时出现了左室功能的改善和eNOS表达的增加，提示：1)NO长期作用的效果可能有改善心功能的作用；2)NO对心功能也可能无明显影响，本文心功能的改善可能是其他原因所致；阐明这些问题都有待于进一步的研究。
, 百拇医药
麝香保心丸对左室功能影响除了NO的可能作用以外，还可能与下列因素有关。文献报道该药的作用主要在以下几个方面：1)扩张血管，增加缺血区的血流灌注，减少心肌梗死面积；2)增加血浆超氧歧化酶的水平，减少氧自由基的产生；3)增加血浆前列环素I2的浓度〔5～7〕；这些都有助于改善左室功能。另外，麝香保心丸组分中的人参、蟾酥等均有正性肌力作用〔8〕，也可能有助于改善心功能。但麝香保心丸增加心肌组织eNOS的表达的机制尚无法推断，有待于更深入的研究。
麝香保心丸可同时增加左室非心梗区心肌组织eNOS的表达及改善左室功能，对心梗后的心功能恢复可产生有益的影响。
*Address:Lou Xinping,Huashan Jospital ,Shanghai University of Medical Sciences ,Shanghai
, 百拇医药 作者简介：罗心平，男，35岁，医学博士，主治医师，主要研究方向，中西医结合治疗冠心病，参加过《临床心律失常学》、《心血管疾病临床流行病学实践》等专著的编写；发表论文20余篇。近年来主要从事中草药对冠状动脉内皮功能影响方面的研究，1998年在国家一级刊物上发表论文5篇。
参 考 文 献
[1] Kelly R A,et al. Cire Res ,1996,79:363
[2] Paulus W J,et al, Circulation,1995,92:2119
[3] Crystal G,et al, Am J Physiol,1996,270:H1568
[4] Fishbein M C， et al, Am J Pathel,1978,90:57
[5] 王智慧，等.上海医药，1996，8：21
[6] 储 敏，等.中成药，1996，18：30
[7] 罗海明，等.中国中西医结合杂志，1996，16：323
[8] 王浴生主编.中药药理与临床.北京：人民卫生出版社，1993：1258
(1998-09-09收稿), 百拇医药
单位：上海医科大学华山医院(200040)
关键词：麝香保心丸；心肌梗死；一氧化氮；心功能
中草药/990216 摘 要 观察了麝香保心丸对心肌组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达及左室功能的影响。在大鼠心梗模型上治疗组给予麝香保心丸33 mg/d 2或6周，用心导管测定心脏功能，免疫组织化学法测定心肌eNOS水平，结果表明：麝香保心丸可同时增加心肌eNOS的表达水平、改善心梗后左室收缩及舒张功能。
Effects of Heart-protecting Musk Pill on
the Expression of Myocardial Endothelial
, http://www.100md.com
Nitric Oxide Synthase and Left Ventricular
Function after Myocardial Infarction in Rats
Luo Xinping, Zeng Zhiyu, Shi Haiming, et al
.(Department of Cardiology, Huashan Hospital, Shanghai University of Medical Sciences， Shanghai 200040)
Abstract Effects of heart protecting musk pill (HMP), a traditional medical preparation for the treatment of myocardial infarction, on the expression of myocardial endothelial NO synthase (eNOS) and left ventricular function of acute myocardial infarcition (AMI) rat model were studied. AMI rat models were prepared by coronary artery ligation and randomized into 4 groups: Two groups of AMI-2 and AMI-6 were kept as controls, and the other two, were treated with HMP 33 mg/d by intubation for 2 weeks (HMP-2) or 6 weeks (HMP-6). Cardiac functions (LVESP, LVEDP, dp/dtmax, dp/dtmin) were measured at the end of 2nd and sixth week of treatment with left ventricular catheter insertion. The level of myocardial eNOS were measured by immunohistochemical staining and image analysis. Results showed that the 2 HMP treated groups resulted in an increase of expression of myocardial eNOS (P<0.05) and an improved systolic, and diastolic functions of left ventricular at the end of 2nd and sixth week of treatment as compared with the control (P<0.05) .It may be concluded that HMP can increase the level of myocardial eNOS and improve cardiac functions after myocardial infarction at the same time.
, 百拇医药
Key words heart-protecting musk pill (HMP) endothelial ntric oxide synthaes (eNOS)
内皮型一氧化氮合酶(eNOS)是心肌组织内的主要存在形式；一氧化氮(NO)对心功能的影响是目前研究的热点，至今仍未阐明〔1～3〕。Paulus报道NO有负性肌力作用〔2〕，Crystal等则认为NO不改变心肌收缩力及心肌氧耗量〔3〕。麝香保心丸作为一种有效的急救中成药，其减少实验性心肌梗死面积，增加冠心病患者缺血区的血流灌注等作用已被证实〔1～3〕，还发现其有增加血管壁eNOS表达的作用。笔者就它对心梗后左室功能及心肌eNOS表达的影响进行了探讨。
1 材料与方法
1.1 动物分组及心肌梗死模型的建立：选用250～300 g雄性SD大鼠60只(中科院上海分院实验动物中心提供)，参照文献〔1〕的方法结扎冠脉形成心肌梗死动物模型；结扎部位位于左侧冠状动脉起源点下1～2 mm处。动物随 机分为5组：①假手术对照组(Sham)12只，开胸打开心包后立即缝合，常规饲养2周。②心肌梗死对照组(AMI2和AMI6)各15只，心梗造模后分别常规饲养2周或6周。③麝香保心丸2周组(HMP2)及6周组(HMP6)各12只，心梗造模后立即用麝香保心丸33 mg/d(上海中药一厂，批号961029)+生理盐水1 mL ig 2或6周。2周及6周时分别称重并处死动物，进行下列指标测定。共49只大鼠完成实验。
, http://www.100md.com
1.2 心功能测定：大鼠10%水合氯醛麻醉固定后分离右侧颈总动脉，插入内充37 ℃肝素生理盐水1 mm径的塑料管至左室腔，用NIHON KOHOEN RM-6018型多道生理记录仪描记左室收缩末压(LVESP)、左室舒张末压(LVEDP)以及左室最大收缩、舒张期压力微分(dp/dtmax、dp/dtmin)，以反映左室功能。所有电信号均用SMUP计算机软件分析处理(上海医科大学生理教研室提供)。
1.3 免疫组织化学技术测量左室非梗死区(含梗死周边区)心肌组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达量：取材心肌后冰冻切片(厚度5～8 μm )，按标准技术进行免疫组化切片染色操作(大鼠eNOS单抗购自Gene公司；BA-4000 ABC试剂盒购自美国Vector Laboratories公司)，染色后在LEICA图象分析仪上进行eNOS的表达量的定量分析。主要步骤为：每张切片在非梗死区左室壁采样测量3处，读取测量总面积(View area)、eNOS阳性染色区域面积(Area)及平均光亮度(light)；平均计值后分别计算每只大鼠单位面积下(μm2)eNOS平均光亮度，后进行组间比较。公式=Area×light/View area
, 百拇医药
1.4 统计处理：所有计量资源均以均数±标准差(
±s)表示，用SAS软件分析数据、进行两两均数的比较。2 结果
2.1 麝香保心丸对心梗大鼠早期、晚期心功能的影响：见表1。与AMI组相比，2周时麝香保心丸可轻度升高LVESP，但6周时不明显。2周及6周时，麝香保心丸均可降低LVEDP(P<0.05)；dp/dtmax、dp/dtmin值与AMI组相比均有增加(P<0.05)，提示它可改善左室收缩及舒张功能。
2.2 麝香保心丸对心梗大鼠左室非梗死区
表1 麝香保心丸对心梗大鼠早期及远期心功能的影响(
±s) 组别, http://www.100md.com
例数
LVESP
LVEDP
dp/dtmax
dp/dtmin
(mmHg)
(mmHg)
(mmHg/s)
(mmHg/s)
Sham
10
123.67±10.33
, 百拇医药
-3.00±5.36
4 292.63±637.99
4 321.24±597.50
AMI2
12
103.00±9.94△
12.25±7.94△
2 572.69±573.14△
2 444.38±396.88△
HMP2
, http://www.100md.com
9
116.57±13.55*
5.71±3.09*
3 490.15±485.93**
3 147.29±591.29*
AMI6
11
106.38±10.26△
9.46±8.45△
2 657.77±476.04△
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2 500.27±149.38△
HMP6
7
109.56±11.29
2.00±7.55**
3 351.48±424.89*
2 981.83±502.56*
与Sham组相比：△P<0.05； 与AMI组相比：*P<0.05 **P<0.01心肌组织eNOS表达量的影响：显微镜下见eNOS阳性染色区域主要分布于心肌间质；与AMI组相比，早期(2周)及6周时，麝香保心丸均增加了心肌组织eNOS的表达，见表2。表2 麝香保心丸对心梗大鼠左室非梗死区心肌eNOS平均光亮度的影响(
±s) 组别, 百拇医药
例数
eNOS平均光亮度/(μm2)
AMI2
12
13.89±8.83
HMP2
9
51.94±6.79*
AMI6
11
19.36±11.07
HMP6
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7
66.21±13.82*
与相应AMI组相比：*P<0.05
3 讨论
文献报道心脏中的一氧化氮合酶主要为eNOS，它主要分布于心肌间动脉、静脉及毛细血管网，其作用是催化L-精氨酸产生NO，NO可快速地扩散至邻近的心肌细胞，它对心肌收缩性的影响是目前的研究热点〔1〕。多数研究认为NO的急性效果是增加心肌细胞内的cGMP浓度，进而抑制心肌收缩力、改善心肌的舒张期顺应性〔2〕；但也有作者认为NO对心肌收缩力无明显影响〔3〕。
麝香保心丸作为一种常用的急救中成药，已用于冠心病的治疗中〔5～7〕，它对心梗后左室功能有何影响却不清楚。我们的研究表明：麝香保心丸对心梗后的左室收缩及舒张功能都有不同程度的改善。同时与心梗对照组相比，麝香保心丸还能增加心肌组织eNOS的表达；推断eNOS的表达增加会增加心肌内NO的产量，而NO的增加会引起心肌收缩性能的降低〔2〕；但本文结果却同时出现了左室功能的改善和eNOS表达的增加，提示：1)NO长期作用的效果可能有改善心功能的作用；2)NO对心功能也可能无明显影响，本文心功能的改善可能是其他原因所致；阐明这些问题都有待于进一步的研究。
, 百拇医药
麝香保心丸对左室功能影响除了NO的可能作用以外，还可能与下列因素有关。文献报道该药的作用主要在以下几个方面：1)扩张血管，增加缺血区的血流灌注，减少心肌梗死面积；2)增加血浆超氧歧化酶的水平，减少氧自由基的产生；3)增加血浆前列环素I2的浓度〔5～7〕；这些都有助于改善左室功能。另外，麝香保心丸组分中的人参、蟾酥等均有正性肌力作用〔8〕，也可能有助于改善心功能。但麝香保心丸增加心肌组织eNOS的表达的机制尚无法推断，有待于更深入的研究。
麝香保心丸可同时增加左室非心梗区心肌组织eNOS的表达及改善左室功能，对心梗后的心功能恢复可产生有益的影响。
*Address:Lou Xinping,Huashan Jospital ,Shanghai University of Medical Sciences ,Shanghai
, 百拇医药 作者简介：罗心平，男，35岁，医学博士，主治医师，主要研究方向，中西医结合治疗冠心病，参加过《临床心律失常学》、《心血管疾病临床流行病学实践》等专著的编写；发表论文20余篇。近年来主要从事中草药对冠状动脉内皮功能影响方面的研究，1998年在国家一级刊物上发表论文5篇。
参 考 文 献
[1] Kelly R A,et al. Cire Res ,1996,79:363
[2] Paulus W J,et al, Circulation,1995,92:2119
[3] Crystal G,et al, Am J Physiol,1996,270:H1568
[4] Fishbein M C， et al, Am J Pathel,1978,90:57
[5] 王智慧，等.上海医药，1996，8：21
[6] 储 敏，等.中成药，1996，18：30
[7] 罗海明，等.中国中西医结合杂志，1996，16：323
[8] 王浴生主编.中药药理与临床.北京：人民卫生出版社，1993：1258
(1998-09-09收稿), 百拇医药