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编号:10231595
护肝茶保肝及提高免疫功能作用的研究
http://www.100md.com 《广西医学》 1999年第2期
     作者:李茂 覃良 周军 李伟芳 樊亦军

    单位:广西中医药研究所

    关键词:护肝茶;护肝作用;免疫作用

    广西医学990202

    摘要 目的:研究护肝茶对护肝及免疫功能的影响。方法:观察其对诱发动物三种肝炎模型细胞免疫、体液免疫及非特异性免疫试验的影响;以及对体外抗乙肝病毒试验、对肝药酶的影响。结果:研究表明,该药对四氯化碳、硫代乙酰胺和氨基半乳糖引起小鼠及大鼠的急性肝损伤有明显的保护作用,能降低谷丙转氨酶;缩短CCl4肝损伤小鼠戊巴比妥钠的睡眠时间;抑制体外乙肝病毒表面抗原;对非特异性免疫有一定增强作用。

    Effects of Hugancha Tea on Liver Protection and Immunity Function in Mice and Rats.
, 百拇医药
    Li Mao,Qin Liang,Zhou Jun,et al.Guangxi Institute of Traditional Medical and Pharmaceutical Sciences(Nanning 530022).

    Abstract Objective:To study the effects of Hugancha tea on liver protection and immunity functions.Methods:In three kinds of experimental hepatitis,specific and non-specific immunological tests,anti-hepatitis virus tests in vitro and drug-metabolic enzymes in liver were observed. Results:It is suggested that the drug significantly protectes liver from CCl4,thioacetamide and galactosamine in mice and rats,lowers the activity of enzyme ALT in serum,shorten the sleep duration of CCl4-damaged mice induced by embuter,inhibites HBsAg in vitro,and potentiates non-specific immunity in mice and rats.
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    Keywords:Hugancha tea;Liver protection;Immunity

    病毒性乙型肝炎是我国的常见病,多发病,严重危害人民的健康。虽然现代医学对本病的病原及其免疫发病机理有较深入的研究(1,2,3),并提出了抗病毒、调控免疫、恢复肝功、纠正代谢、活跃微循环等治则,但迄今未找到理想的药物。护肝茶系遵循中医理论,结合民间用药经验研制而成的有效处方,具有清热利湿、凉血解毒等功能,主要用于湿热的黄疸、肝气郁结及气滞血瘀等症。作者对护肝、降酶及免疫等方面进行药效学研究,结果如下。

    1 材料

    1.1 药品与试剂:护肝茶由广西陆川制药厂提供,将药粉加开水浸泡2h,过滤,连续2次,去渣,合并滤液,水浴浓缩成1.5g/ml,临用前蒸馏水稀释成所需浓度。联苯双酯,医科院药物研究所制药厂出品,批号941205。芸芝肝泰冲剂,吉林省通化市制药厂出品,批号940502。CCl4,上海长江化工厂,批号910714。D-氨基半乳糖,广州市医药工业研究所,批号860701。硫代乙酰胺,上海化剂采购供应站。印度墨汁,Schmid GMBH公司。HBs-Ag血清,广西中医二附院检验科分离的乙肝强阳性血清。血清稀释液,卫生部北京生物制品研究所,批号9424-3。冻干乙肝表面抗原诊断血球,卫生部北京生物制品研究所,批号9502-2。
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    1.2 动物:CFW小鼠,昆明种小鼠,普通级,雌雄兼用,体重20±2g,SD大鼠,普通级,雌雄兼用,体重200±50g。全部动物由广西中医药研究所动物室提供。

    2 方法与结果

    2.1对CCl4造成小鼠肝损伤的影响:取小鼠50只,随机分为给药组ig护肝茶4.5、15g/kg,阳性药ig联苯双酯0.2g/kg,肝损伤模型组及正常对照组ig蒸馏水20ml/kg,1次/d,连续3d。末次药后24h,正常对照组ip生理盐水10ml/kg,其余各组ip0.1%CCl4石蜡油10ml/kg,同时将小鼠再给药1次,16h后眼眶取血,分离血清,按赖氏法测定ALT,同时取肝组织,常规石蜡包埋切片染色进行病理组织学观察,病理程度按文献(4)划分。结果(表1)表明该药有明显护肝作用。

    表1对CCl4所致小鼠肝损伤的影响(±s) 组 别
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    剂量

    ( /kg)

    ALT

    (u/L)

    肝损伤程度分级

    -

    +

    

    

    护肝茶+CCl4

    4.5g+10ml

    286.1±34.4

    1
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    2

    7

    0

    护肝茶+CCl4

    15.0g+10ml

    182.0±19.3**

    3

    5

    2

    0

    联苯双酯+CCl4

    0.2g+10ml
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    143.4±20.7**

    5

    3

    2

    0

    肝损伤模型组(CCl4)

    10ml

    315.2±36.5

    0

    0

    8

    2

, 百拇医药     对照组

    蒸馏水

    87.3±17.4**

    10

    0

    0

    0

    注:①与肝损伤模型组比较**P<0.01;*P<0.05,下同。

    ②“-”正常肝组织,“+”中央静脉扩张,出现中心性坏死,不超过小叶的1/3;“”中心性坏死在1/3~1/2之间;“”中心性坏死超过2/3的肝小叶。
, 百拇医药
    ③全部试验结果均用t检验统计,下同。2.2 对硫代乙酰胺(TAA)所致小鼠肝损伤的影响:取小鼠50只,分组、剂量及给药次数同2.1试验。末次药后24h,正常对照组ip生理盐水10ml/kg,其余各组ipTAA50mg/kg,同时给小鼠再给药1次,16h后取血测定ALT。与TAA组比较,作组间t测验。结果,护肝茶4.5、15g/kg组均显著降低小鼠的ALT(表2)。

    表2对TAA所致小鼠ALT升高的影响(±s) 组 别

    剂量

    (g/kg)

    ALT

    (u/L)

    护肝茶+TAA
, 百拇医药
    4.5+0.05

    227.6±20.6*

    护肝茶+TAA

    15.0+0.05

    177.5±23.8**

    联苯双酯+TAA

    0.2+0.05

    103.9±19.5**

    肝损伤模型组(TAA)

    0.05

    259.3±41.7
, 百拇医药
    对照组

    蒸馏水

    68.0±18.2**

    2.3 对D-氨基半乳糖(D-GlaN)引起大鼠ALT升高的影响:选取大鼠37只,分成5组。各组大鼠分别ig护肝茶4.5、15g/kg、联苯双酯0.2g/kg及蒸馏水20ml/kg,1次/d,连续4d。给药的第2d,正常对照组ip生理盐水10mg/kg,其余各组ip D-GlaN0.5g/kg,末次药后24h,眼眶取血测定ALT,并取肝组织作病理学检查。结果,护肝茶15g/kg组明显降低大鼠的ALT(表3)。表3对大鼠D-GlaN所致肝损伤的影响(±s) 组 别

    剂量

    (g/kg)
, 百拇医药
    动物数

    (只)

    ALT

    (μ/L)

    肝损伤程度分级

    -

    +

    

    

    护肝茶+GlaN

    4.5+0.5

    8

    206.4±37.1
, 百拇医药
    1

    1

    4

    0

    护肝茶+GlaN

    15.0+0.5

    8

    192.7±21.5*

    2

    2

    2

    0

    联苯双酯+GlaN
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    0.2+0.5

    6

    145.6±25.3**

    3

    2

    1

    0

    肝损伤模型组(GlaN)

    0.5

    7

    237.0±34.7

    0

    2
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    4

    1

    对照组

    蒸馏水

    8

    79.5±13.2**

    5

    0

    0

    0

    2.4 对体外乙肝病毒表面抗原的影响:将护肝茶液调pH为7.0,流通蒸汽灭菌后,配成2500、1250、625、312、156、78、40、20μg生药/50μl共8种浓度。将HBsAg血清用稀释液配成1∶4倍的等比血清稀释液7种。将血清稀释液分别加入医用血凝滴定极的V型孔中,每孔25μl,随后加入各种浓度护肝茶液50μl,再滴加25μl单克隆抗体诊断血球,同时设木通提取液及空白对照组,于振荡仪上振荡2min,放置37℃温箱2h,取出观察,血球100%凝集为阳性,不凝集为阴性,药物最高稀释度不凝集,表示药物对病毒抗原有抑制作用。结果该药和木通组78μg生药/50μl时均对1∶32乙肝病毒有抑制作用。
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    2.5 对肝损伤小鼠戊巴比妥钠睡眠时间的影响:取小鼠20只,均分为对照组ig蒸馏水20ml/kg,给药组ig护肝茶15g/kg,1次/d,连续3d。末次药后8h ip0.1%CCl4 石蜡油10ml/kg,16h后ip戊巴比妥钠50mg/kg,记录小鼠翻正反射消失至恢复的时间作为睡眠时间。与对照组比较,作t组间检验。结果,护肝茶15g/kg组缩短小鼠的睡眠时间。

    2.6 对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响:取小鼠40只,随机分为4组,每组10只。各组小鼠分别ig护肝茶4.5,15g/kg、芸芝肝泰0.4g/kg及蒸馏水20ml/kg,1次/d,连续7d,于给药后第5d,各组小鼠ip小牛血清0.3ml/鼠,末次给药后24h,小鼠ip2%鸡RBC悬液1ml/鼠,30min后ip生理盐水,吸取腹腔液1ml,置37℃恒温水箱湿浴1h,染色计数,算吞噬百分率及吞噬指数。结果,护肝茶4.5,1.5g/kg组均提高小鼠吞噬功能。

    2.7 对小鼠碳粒廓清指数的影响:取小鼠40只,分组、剂量及给药次数同2.6试验。末次药后24h,尾静脉注射印度墨汁0.1ml/10g,注射后2(t1)和7(t2)min,眼眶取血20μl,溶于0.1%Na2CO32ml溶液中,于722分光光度计波长650nm测定OD值,按下式计算廓清指数K值。
, 百拇医药
    结果,护肝茶15g/kg组明显提高小鼠的碳粒廓清指数(表4)。

    表4对巨噬细胞功能的影响(±s) 组 别

    剂量

    (g/kg)

    吞噬率

    (%)

    吞噬指数

    廓清指数

    (10-3)

    护肝茶

, 百拇医药     4.5

    39.0±5.4

    1.7±0.6**

    6.2±4.3

    护肝茶

    15.0

    39.5±6.2

    1.7±0.4**

    8.8±8.0*

    芸芝肝泰

    0.4

    44.6±4.8
, 百拇医药
    1.8±0.4**

    8.5±5.3*

    对照组

    20.7±6.4

    1.3±0.2

    3.9±2.0

    2.8 对小鼠外周血T淋巴细胞的影响(5):取小鼠40只,分组、剂量及给药次数同2.6试验。末次药后24h,剪鼠尾取血、涂片、孵育、染色镜检,每鼠镜检1000个淋巴细胞,求出ANAE阳性百分率。结果,护肝茶15g/kg组明显增加小鼠外周血T淋巴细胞。

    2.9 对小鼠抗体形成细胞功能的影响:取小鼠40只,分组、剂量及给药次数同2.6试验。给药后第3d,各组小鼠ip5%SRBC0.2ml/鼠,免疫后4h ip环磷酰胺40mg/kg。末次药后24h,取脾于冷的Hanks液中捣碎,调整细胞数至5×106/ml,每管加脾细胞悬液1ml,1∶30豚鼠补体1ml,0.2%SRBC1ml。置37℃水箱中孵育1h,2000rpm离心10min,吸上清液测光密度。结果,护肝茶对小鼠抗体形成细胞功能无明显增强作用(表5)。表5对小鼠淋巴细胞的影响(±s) 组 别
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    剂量

    (g/kg)

    T淋巴细胞

    (%)

    QHS

    (OD)

    护肝茶

    4.5

    54±9

    0.206±0.012

    护肝茶

    15.0

    59±8*
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    0.205±0.052

    芸芝肝泰

    0.4

    65±14*

    0.216±0.011

    对照组

    49±10

    0.198±0.014

    2.10 对小鼠免疫器官重量的影响:取小鼠40只,分组、剂量及给药次数同2.6试验。停药48h,处死小鼠,剖取胸腺及脾脏称重。结果,护肝茶对小鼠胸腺及脾系数无明显影响。

    3 讨论
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    一般认为CCl4在肝微粒体内,经还原活化而产生自由基,通过脂质过氧化物的破坏,使肝细胞受损,造成血清ALT升高;TAA并不引起脂质过氧化,而通过其它途径造成肝损害;而D-GlaN进入机体后,在肝细胞内代谢与二磷酸尿苷结合,生成尿苷衍生物,造成体内二磷酸尿苷耗竭,从而使依赖其进行合成的核酸、糖蛋白、细胞膜、脂糖和糖元等物质减少,造成肝细胞损伤及坏死(6)。护肝茶对多种化学性急性肝损伤均有保护作用,说明其护肝作用较为广泛。护肝茶缩短CCl4所致肝损伤小鼠戊巴比妥钠的睡眠时间,提示该药可能有药酶诱导作用。这对乙肝病人在解毒及利胆退黄均有利。

    单核巨噬细胞系统的吞噬功能是机体免疫功能的重要指标之一。护肝茶提高小鼠腹腔巨噬细胞的百分率和吞噬指数;提高小鼠碳粒廓清指数及其外周血T淋巴细胞的数量。表明该药具有明显提高抗体单核-巨噬细胞系统的吞噬功能,对非特异性免疫和细胞免疫有一定增强作用。

    参考文献
, 百拇医药
    [1]Dudley FJ.Cellular immunity and hepatitis associated australian antigen in liver disease.Lancet 1972;1:723

    [2]Eddleston ALWF.Inadequate antibody response to HBsAg or suppressor T-cell development of active chronic hepatitis.Lancet 1974;2:1543

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    [4]包无桐,刘耕陶,徐桂芳,等.二苯乙烯(芮)的一些药理作用.药学学报 1979;14(4):227

    [5]陈奇主编.中药药理研究方法学.北京:人民卫生出版社,1993:744

    [6]王 淳,刘礼意,吉 兰.D-胺基半乳糖盐诱发的肝损伤模型.中草药 1980;11(6):262, http://www.100md.com