血栓性疾病患者血浆可溶性细胞间粘附分子1水平与微血栓形成
作者：李公宝 李大启 纪恩美 许福亮 马传香
单位：261031 山东，潍坊医学院附属医院
关键词：可溶性细胞间粘附分子1；微血栓形成
中国微循环990212 【摘要】 目的 探讨东菱克栓酶(DF-521)对大鼠肠系膜微动脉血栓的溶栓时间和机制。方法 采用光化学诱导法和静脉注射荧光素钠制作大鼠肠系膜微动脉血栓模型，经显微电视摄像系统和多媒体计算机图像处理技术相结合，定量分析不同剂量组DF-521的溶栓时间以及血管再通程度。结果 DF-521治疗后，8U/kg和16U/kg组平均再通时间分别为26.7±9.4min和45±43.6min；溶栓后血管再通管径与该部位血管初始直径之比大于25%时，再通血管不会出现再闭塞现象。讨论 东菱克栓酶对大鼠微动脉血栓具有可靠的治疗效果。
Experimental Study on Effects of Batroxobin (DF-521) in Treating Microartery Thrombosis of Rat Mesentery
, http://www.100md.com
Gen Yu，Chen Huaihong，Zhen Xiaoxiang，et al.
Shao Yifu Hospital Affiliated to Zhejiang University，Hangzhou 310016
【Abstract】 Objective To evaluate the duration and the mechanism of batroxobin (DF-521) in treating microarterythrombosis of rat mesentery.Methods Microarterythrombus formation model was made by the filtered light irradiation and intravascular fluorescein sodium administration，the duration and extent of recanalization in different dosagegroups were measured using computer image subtraction.Results The mean time of recanalization is 26.7±9.4min in 8U/kg group and 45±43.6min in 16U/kg group respectively，the reocclusion doesnt happen when the caliber of the recanalization is over 25% of the diameter of the microartery.Conclusion Batroxobin shows a good curative effect on microarterythrombus of rat mesentery.
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【Key words】 Batroxobin(DF-521) Microartery Thrombosis Rat
东菱克栓酶(Batroxobin，DF-521)是由affinity-chromatography精制而成的分子量为36000的单链glycopeptide。大量临床和动物实验表明其具有显著抗凝、降酶、去纤、降低血粘度和溶栓多种作用，已广泛用于缺血性脑血管疾病的治疗[1]。目前有关DF-521溶栓治疗后的血管再通时间、血管再通后管径的大小与DF-521疗效之间的关系尚缺乏深入研究。本文选用活体微血栓模型，结合显微电视成像和计算机处理，动态研究DF-521对微动脉血栓的疗效机制。
材料和方法
健康Sprague-Dawley大鼠24只，雌雄兼有，体重250～350克(系由浙江省医学科学院实验动物中心提供)随机分为三组： 对照组、中剂量组、高剂量组，每组8只。用1%戊巴比妥钠按40mg/kg体重腹腔内注射麻醉。DF-521(批号B0513E、东菱药业)的剂量为： 中剂量组8U/kg、高剂量组16U/kg。对照组注入等量的生理盐水。
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动物麻醉后，做气管、股静脉和左侧颈总动脉插管。其中，荧光素钠由大腿股静脉插管注入，颈总动脉插管供注入DF-521和生理盐水用。剖腹，取出肠系膜，放入37℃±0.5℃的Krebs恒温溶液槽内，将膜铺平在一嵌有玻璃片的圆环上，以固定膜的位置。在显微镜下寻找一条50～80μm的微动脉作为目标血管，经大鼠股静脉注射荧光素钠(FINa，MW376)50mg/kg，然后用激发光照射，直至微动脉血栓形成后1分钟，以形成稳固的血栓。然后按实验要求，经颈总动脉注入DF-521，对照组注入等剂量的生理盐水。整个血栓形成和溶解的动态过程用电视摄像机拍摄后，用录像机进行录像。图像经计算机输入图像数据采集版，经图像处理后，在计算机图像显示器上分析处理DF-521溶栓的过程[1]。
统计学方法： 经统计软件POMS04进行t检验。
结 果
1 动态观察显示： 闭塞血管开始再通时，常出现再通与闭塞的反复交替，此过程DF-521治疗组中占69%(11/16)，其中64%(7/11)持续再通，而36%(4/11)虽然血栓部位的血管出现一过性再通，但是因再通部位管径小最终发生再闭塞；同时还发现，当再通血管的管径大于该部位初始管径的25%时，则再通血管不发生再闭塞，否则容易发生再闭塞。此外，空白对照组中也有13%(1/8)出现再通与闭塞的反复交替，但是很快又再闭塞。
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2 大鼠肠系膜微动脉血栓的形成时间以及DF-521治疗后的血管再通率、再通时间见表1～2。其中2个不同剂量组平均再通时间比较无显著性差异(P>0.05)。再通程度的动态观察见图1。
表1 不同剂量的DF-521对微动脉血栓治疗后的再通率比较(
±s) 药 物
剂 量
n
血栓形成时间
溶栓成功率(%)
Control
DF-521
DF-521
, 百拇医药
—
8U/kg*
16U/kg*
8
8
8
8′30″±2′40″
7′3″±2′49″
10′18″±3′14″
0
37.5
50
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* 厂家推荐的剂量；′/″=分/秒表2 不同剂量的DF-521对微动脉血栓治疗后的再通时间比较 药物剂量
N
再 通 数
再通时间(min)
平均再通时间(min)
P
DF-521(8U/kg)
DF-521(16U/kg)
8
8
3
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4
20，20，40
20，20，30，110
26.7±9.4
45±43.6
>0.05
>0.05
(a) DF-521(8U/kg)治疗组发生再通的3例血管通畅程度的动态观察
(注：■、◆和▲分别代表1、2和3例大鼠血管再通管径随时间变化情况)
, 百拇医药
(b) DF-521(16U/kg)治疗组发生再通的4例血管通畅程度的动态观察
(注：■、◆、●和▲分别代表第1、2、3和4例大鼠血管再通管径随时间变化情况)
图1 不同剂量东菱克栓酶之间血管再通程度的动态观察
(*： D0为血管的初始管径；D为治疗后再通部位血管的管径)
讨 论
活体微动脉血栓模型与现代多媒体计算机图像处理技术相结合，已成为目前抗血栓药物评价和开发的理想模型之一。该模型既能够对血栓的形成和溶解过程进行动态观察，又能够对抗血栓药物进行定量分析和系统评价[1～3]。
本研究结果表明DF-521治疗大鼠微动脉血栓时具有一定的再通率，而且与治疗剂量之间存在一定的正相关，因此疗效可靠，与文献报道相似[4]。再通时间是评价溶栓药物的重要指标。动脉血栓形成后，尽早溶栓使缺血组织恢复灌流至关重要，再灌流恢复的越早，缺血对组织造成的损伤则越轻[5]。但是由于缺少安全而又有效的观察手段，无论临床还是基础研究，尚未有DF-521溶栓后血管再通时间的报道。本文采用显微电视成像系统结合计算机处理技术，能够做到对溶栓时间的动态观察。结果表明： DF-521能够在较短的时间内使微动脉血栓溶解，而且在达到治疗剂量后，血栓溶解的时间与药物剂量之间并未显示出明显的依赖关系(P>0.05)，说明DF-521是较为理想的抗血栓药物。
, 百拇医药
溶栓治疗另一个受到关注的问题是溶栓不成功是否与再通血管出现再闭塞有关。血栓形成过程中会不可避免地启动机体凝血和纤溶机制，药物治疗加速了血栓的溶解。然而，血管一旦再通后，影响血管再闭塞的最直接因素便是血管再通管径的大小以及由此引发的血流动力学改变。本研究结果显示： 共有5例(治疗组4例，对照组有1例)大鼠肠系膜微动脉血管血栓形成后出现一过性再通，然后数秒至数分钟内发生再闭塞。这主要是因为血管再通部位口径小所致。当再通部位管径大于该部位初始管径的25%时，则未见到有再闭塞发生。此外再闭塞的发生与DF-521的剂量之间无明显正相关性(2个不同剂量组各有2例发生再闭塞)。这些有助于解释药物溶栓过程中部分患者出现症状反复的问题。
总之，DF-521治疗后能较快地使大鼠肠系膜微动脉血栓溶解并使闭塞血管出现再通，再通率与药物剂量之间呈正相关；在达到治疗剂量后，血管的再通时间、再通程度和再闭塞的发生率与药物剂量之间不存在显著的依赖关系，这对东菱克栓酶因剂量过大可能出现的出血并发症有一定的借鉴价值，提示临床应用中需进一步探索给药时间、最佳剂量及给药途径等问题。
, 百拇医药
参考文献
1 郑筱祥，孙洪，张晓晔.活体微血栓形成过程的定量分析.中华血液学杂志.1991，12(9)：474
2 Reininger AJ，Heinzmann U，Reininger CB，et al.Flow mediated fibrin thrombus formation in an endothelium-lined model of arterial branching.Thrombosis research.1994，76(6)：629
3 Saniabadi AR，Umemura K，Matsumoto N，et al.Vessel wall injury and arterial thrombosis induced by a photochemical reaction.Thrombosis and haemostasis.1995，72(5)：868
4 陈清棠.东菱精纯克栓酶(DF-521)治疗急性脑梗塞的临床研究.世界医学杂志.1998，2(1，2)：79
5 李玲，苏镇培，黄如训.高血压大鼠局部脑缺血再灌流边缘区超微结构改变.中国神经精神疾病杂志.1996，22(4)：193
收稿： 1998-12-09 修回： 1999-04-08, http://www.100md.com
单位：261031 山东，潍坊医学院附属医院
关键词：可溶性细胞间粘附分子1；微血栓形成
中国微循环990212 【摘要】 目的 探讨东菱克栓酶(DF-521)对大鼠肠系膜微动脉血栓的溶栓时间和机制。方法 采用光化学诱导法和静脉注射荧光素钠制作大鼠肠系膜微动脉血栓模型，经显微电视摄像系统和多媒体计算机图像处理技术相结合，定量分析不同剂量组DF-521的溶栓时间以及血管再通程度。结果 DF-521治疗后，8U/kg和16U/kg组平均再通时间分别为26.7±9.4min和45±43.6min；溶栓后血管再通管径与该部位血管初始直径之比大于25%时，再通血管不会出现再闭塞现象。讨论 东菱克栓酶对大鼠微动脉血栓具有可靠的治疗效果。
Experimental Study on Effects of Batroxobin (DF-521) in Treating Microartery Thrombosis of Rat Mesentery
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Gen Yu，Chen Huaihong，Zhen Xiaoxiang，et al.
Shao Yifu Hospital Affiliated to Zhejiang University，Hangzhou 310016
【Abstract】 Objective To evaluate the duration and the mechanism of batroxobin (DF-521) in treating microarterythrombosis of rat mesentery.Methods Microarterythrombus formation model was made by the filtered light irradiation and intravascular fluorescein sodium administration，the duration and extent of recanalization in different dosagegroups were measured using computer image subtraction.Results The mean time of recanalization is 26.7±9.4min in 8U/kg group and 45±43.6min in 16U/kg group respectively，the reocclusion doesnt happen when the caliber of the recanalization is over 25% of the diameter of the microartery.Conclusion Batroxobin shows a good curative effect on microarterythrombus of rat mesentery.
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【Key words】 Batroxobin(DF-521) Microartery Thrombosis Rat
东菱克栓酶(Batroxobin，DF-521)是由affinity-chromatography精制而成的分子量为36000的单链glycopeptide。大量临床和动物实验表明其具有显著抗凝、降酶、去纤、降低血粘度和溶栓多种作用，已广泛用于缺血性脑血管疾病的治疗[1]。目前有关DF-521溶栓治疗后的血管再通时间、血管再通后管径的大小与DF-521疗效之间的关系尚缺乏深入研究。本文选用活体微血栓模型，结合显微电视成像和计算机处理，动态研究DF-521对微动脉血栓的疗效机制。
材料和方法
健康Sprague-Dawley大鼠24只，雌雄兼有，体重250～350克(系由浙江省医学科学院实验动物中心提供)随机分为三组： 对照组、中剂量组、高剂量组，每组8只。用1%戊巴比妥钠按40mg/kg体重腹腔内注射麻醉。DF-521(批号B0513E、东菱药业)的剂量为： 中剂量组8U/kg、高剂量组16U/kg。对照组注入等量的生理盐水。
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动物麻醉后，做气管、股静脉和左侧颈总动脉插管。其中，荧光素钠由大腿股静脉插管注入，颈总动脉插管供注入DF-521和生理盐水用。剖腹，取出肠系膜，放入37℃±0.5℃的Krebs恒温溶液槽内，将膜铺平在一嵌有玻璃片的圆环上，以固定膜的位置。在显微镜下寻找一条50～80μm的微动脉作为目标血管，经大鼠股静脉注射荧光素钠(FINa，MW376)50mg/kg，然后用激发光照射，直至微动脉血栓形成后1分钟，以形成稳固的血栓。然后按实验要求，经颈总动脉注入DF-521，对照组注入等剂量的生理盐水。整个血栓形成和溶解的动态过程用电视摄像机拍摄后，用录像机进行录像。图像经计算机输入图像数据采集版，经图像处理后，在计算机图像显示器上分析处理DF-521溶栓的过程[1]。
统计学方法： 经统计软件POMS04进行t检验。
结 果
1 动态观察显示： 闭塞血管开始再通时，常出现再通与闭塞的反复交替，此过程DF-521治疗组中占69%(11/16)，其中64%(7/11)持续再通，而36%(4/11)虽然血栓部位的血管出现一过性再通，但是因再通部位管径小最终发生再闭塞；同时还发现，当再通血管的管径大于该部位初始管径的25%时，则再通血管不发生再闭塞，否则容易发生再闭塞。此外，空白对照组中也有13%(1/8)出现再通与闭塞的反复交替，但是很快又再闭塞。
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2 大鼠肠系膜微动脉血栓的形成时间以及DF-521治疗后的血管再通率、再通时间见表1～2。其中2个不同剂量组平均再通时间比较无显著性差异(P>0.05)。再通程度的动态观察见图1。
表1 不同剂量的DF-521对微动脉血栓治疗后的再通率比较(
±s) 药 物剂 量
n
血栓形成时间
溶栓成功率(%)
Control
DF-521
DF-521
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—
8U/kg*
16U/kg*
8
8
8
8′30″±2′40″
7′3″±2′49″
10′18″±3′14″
0
37.5
50
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* 厂家推荐的剂量；′/″=分/秒表2 不同剂量的DF-521对微动脉血栓治疗后的再通时间比较 药物剂量
N
再 通 数
再通时间(min)
平均再通时间(min)
P
DF-521(8U/kg)
DF-521(16U/kg)
8
8
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4
20，20，40
20，20，30，110
26.7±9.4
45±43.6
>0.05
>0.05
(a) DF-521(8U/kg)治疗组发生再通的3例血管通畅程度的动态观察
(注：■、◆和▲分别代表1、2和3例大鼠血管再通管径随时间变化情况)
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(b) DF-521(16U/kg)治疗组发生再通的4例血管通畅程度的动态观察
(注：■、◆、●和▲分别代表第1、2、3和4例大鼠血管再通管径随时间变化情况)
图1 不同剂量东菱克栓酶之间血管再通程度的动态观察
(*： D0为血管的初始管径；D为治疗后再通部位血管的管径)
讨 论
活体微动脉血栓模型与现代多媒体计算机图像处理技术相结合，已成为目前抗血栓药物评价和开发的理想模型之一。该模型既能够对血栓的形成和溶解过程进行动态观察，又能够对抗血栓药物进行定量分析和系统评价[1～3]。
本研究结果表明DF-521治疗大鼠微动脉血栓时具有一定的再通率，而且与治疗剂量之间存在一定的正相关，因此疗效可靠，与文献报道相似[4]。再通时间是评价溶栓药物的重要指标。动脉血栓形成后，尽早溶栓使缺血组织恢复灌流至关重要，再灌流恢复的越早，缺血对组织造成的损伤则越轻[5]。但是由于缺少安全而又有效的观察手段，无论临床还是基础研究，尚未有DF-521溶栓后血管再通时间的报道。本文采用显微电视成像系统结合计算机处理技术，能够做到对溶栓时间的动态观察。结果表明： DF-521能够在较短的时间内使微动脉血栓溶解，而且在达到治疗剂量后，血栓溶解的时间与药物剂量之间并未显示出明显的依赖关系(P>0.05)，说明DF-521是较为理想的抗血栓药物。
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溶栓治疗另一个受到关注的问题是溶栓不成功是否与再通血管出现再闭塞有关。血栓形成过程中会不可避免地启动机体凝血和纤溶机制，药物治疗加速了血栓的溶解。然而，血管一旦再通后，影响血管再闭塞的最直接因素便是血管再通管径的大小以及由此引发的血流动力学改变。本研究结果显示： 共有5例(治疗组4例，对照组有1例)大鼠肠系膜微动脉血管血栓形成后出现一过性再通，然后数秒至数分钟内发生再闭塞。这主要是因为血管再通部位口径小所致。当再通部位管径大于该部位初始管径的25%时，则未见到有再闭塞发生。此外再闭塞的发生与DF-521的剂量之间无明显正相关性(2个不同剂量组各有2例发生再闭塞)。这些有助于解释药物溶栓过程中部分患者出现症状反复的问题。
总之，DF-521治疗后能较快地使大鼠肠系膜微动脉血栓溶解并使闭塞血管出现再通，再通率与药物剂量之间呈正相关；在达到治疗剂量后，血管的再通时间、再通程度和再闭塞的发生率与药物剂量之间不存在显著的依赖关系，这对东菱克栓酶因剂量过大可能出现的出血并发症有一定的借鉴价值，提示临床应用中需进一步探索给药时间、最佳剂量及给药途径等问题。
, 百拇医药
参考文献
1 郑筱祥，孙洪，张晓晔.活体微血栓形成过程的定量分析.中华血液学杂志.1991，12(9)：474
2 Reininger AJ，Heinzmann U，Reininger CB，et al.Flow mediated fibrin thrombus formation in an endothelium-lined model of arterial branching.Thrombosis research.1994，76(6)：629
3 Saniabadi AR，Umemura K，Matsumoto N，et al.Vessel wall injury and arterial thrombosis induced by a photochemical reaction.Thrombosis and haemostasis.1995，72(5)：868
4 陈清棠.东菱精纯克栓酶(DF-521)治疗急性脑梗塞的临床研究.世界医学杂志.1998，2(1，2)：79
5 李玲，苏镇培，黄如训.高血压大鼠局部脑缺血再灌流边缘区超微结构改变.中国神经精神疾病杂志.1996，22(4)：193
收稿： 1998-12-09 修回： 1999-04-08, http://www.100md.com