用荧光法测定磁显葡胺的含量
作者：王翔林 陈红 罗红 陈骐
单位：沈阳药科大学药学系， 沈阳 110015
关键词：荧光法；磁显葡胺；钆喷酸葡甲胺
沈阳药科大学学报990210 摘 要 建立了用荧光法测定磁显葡胺含量的新方法，考察了荧光法测定磁显葡胺含量的最佳条件：激发波长275 nm，发射波长313 nm,pH为6.0～8.0，线性范围9.4 mg/L～9.4 g/L,精密度RSD为0.2%，平均回收率100.3%.
分类号 R914.1
Quantitative Determination of Magnevist by the Fluorescent Method
Wang Xianglin,Chen Hong,Luo Hong,Chen Qi
, http://www.100md.com
Department of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015
Abstract A fluorescent method has been developed for the assay of magnevist.The optional conditions for determining magnevist were established.The sample was analyzed at Ex=275 nm and Em=313 nm.The average recovery was 100.3%.By the use of this method,magnevist can be determined with satisfactory results.
Key words fluorescent method;magnevist;Gd-DTPA-Glu
, 百拇医药
磁显葡胺(magnevist)又名钆喷酸双葡胺(Gd-DTPA-2Glu)，为临床上核磁共振成像诊断常用造影剂.经注射体内后，能缩短质子弛豫时间，提高核磁造影(NMR)图象清晰度和对比度〔1〕，已报道磁显葡胺的含量测定方法有：氧瓶燃烧法〔2〕、二阶导数紫外分光光度法〔3〕和高效液相色谱法(HPLC)〔4〕等.国外标准和中华人民共和国卫生部药品标准均采用HPLC法〔4〕，此法虽有灵敏度高、样品用量少等优点，但因仪器设备昂贵、色谱条件苛刻、检测波长在195 nm的近紫外区等缺点，有待建立新方法〔5，6〕.作者首次提出用荧光分光光度法测定磁显葡胺含量.
1 仪器与试剂
荧光分光光度计：HITACHI 650-60；25型酸度计(上海甘泉五金厂)；亚沸水(用亚沸水发生器自制)；钆喷酸葡甲胺(上海淮海制药厂，批号970704)；葡甲胺(上海淮海制药厂，批号970704)；其它试剂均为分析纯.
, http://www.100md.com
2 方法与结果
2.1 实验条件的选择
2.1.1 激发波长和发射波长确定
精密称取钆喷酸葡甲胺350 mg,置于50 mL量瓶中，加0.196%葡甲胺溶液使其溶解并稀释至刻度，扫描其激发光谱和荧光光谱.结果见图1.最大激发波长为275 nm，最大发射波长为313 nm.
2.1.2 仪器狭缝选择
选新制的亚沸水作空白，激发波长为275 nm，激发狭缝为10 nm，改变发射狭缝为10、5、2 nm，分别扫描其荧光光谱，比较发射狭缝对灵敏度的影响.结果见图2，以Slit Ex 10 nm、Slit Em 2 nm为最佳.
2.1.3 稳定性试验
, 百拇医药
精密称取钆喷酸葡甲胺235 mg,置于50 mL量瓶中，加0.196%葡甲胺溶液使溶解，并稀释至刻度，摇匀，测定10、30、60、120、150、180 min时溶液的荧光强度.同时将配制好的溶液避光、冷藏放置1、2、3、5、10、15天测得荧光强度.结果表明磁显葡胺溶液在275 nm连续测定 180 min荧光强度均为98，荧光稳定.同时磁显葡胺溶液在冷藏、避光条件下保存15天后测得荧光强度为98，荧光稳定.
Fig.1 Stimulation and emittance spectrum
1—λEx=275 nm; 2—λEm=313 nm
, http://www.100md.com Fig.2 Sensitivity effect of slit
1—Slit Em 10; 2—Slit Em 5; 3—Slit Em 2
2.1.4 pH值的选择
准确量取14 g/L的磁显葡胺标准溶液各2.5 mL于10只干燥烧杯中，用稀NaOH和稀HCl溶液分别调pH值为1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0，对应定量转移于10只25 mL量瓶中，均用亚沸水稀释至刻度，摇匀，测定荧光强度F.结果见图3，选用pH 6.0～8.0时，荧光强度较高，且稳定.
Fig.3 Relation of solution pH and fluorescent strength
, http://www.100md.com
2.2 实验结果
2.2.1 工作曲线的制备
准确量取9.4 g/L磁显葡胺标准溶液0、0.1、0.5、2.0、5.0、10.0、25.0、50.0、100.0 mL于9只100 mL量瓶中，均调pH值至7.4，用亚沸水稀释至刻度，摇匀，以试剂为空白测定其荧光强度，结果见图4.计算回归方程为：C=56.42 F-7.96，r=0.998 9.
结果表明用荧光法测定磁显葡胺在9.4 mg/L～9.4 g/L时荧光强度呈线性关系.
Fig.4 Relation of solution concentration and fluorescent strength
, http://www.100md.com
2.2.2 回收率试验
配制并经荧光法测定，标示量为0.08 g/L的磁显葡胺溶液作为样品溶液.精密称取磁显葡胺10、50、100、250、500 mg分别置于6只量瓶中，加样品液溶解并稀释至刻度，摇匀，测定上述溶液的荧光强度并按回归方程计算回收率，结果为：98.2%、101.5%、99.9%、102.1%、99.9%，平均回收率
=100.3%，RSD=1.5%.
2.2.3 精密度试验
准确称取钆喷酸葡甲胺73.5、73.4、73.3、73.5、73.4 mg于100 mL量瓶中，分别加入0.196%葡甲胺溶液10 mL，用亚沸水稀释至刻度，摇匀，测定其荧光强度，计算相对标准偏差，RSD=0.2%，表明本法具有良好的精密度.
, 百拇医药
2.3 磁显葡胺样品测定
精密称取钆喷酸葡胺0.370 0 g，置于50 mL量瓶中，加0.098%葡甲胺溶液使其溶解并稀释至刻度，摇匀.精密吸取5 mL于干燥烧杯中，用稀NaOH和稀HCl溶液调pH为7.4，转移至50 mL量瓶中，用亚沸水稀释至刻度，摇匀.配制相应的空白溶液，测定其荧光强度.按回归方程计算样品中磁显葡胺的含量，同法再测样品5次，同时与部颁标准HPLC法作比较，结果见表1.两方法无显著性差异.
Tab.1 Determination of magnevist solution Sample No.
Mark percent conternt/%
State standard
method/HPLC
, http://www.100md.com
Fluorescent method
1
98.9
98.7
2
103.3
99.3
3
101.4
101.8
4
99.0
101.2
, http://www.100md.com
5
103.4
99.2
Average mark
101.2
100.4
percent content
RSD
1.6
1.2
3 讨论 a.荧光分光光度法中常用硫酸奎宁作标准荧光试剂，最大激发波长为320 nm，最大发射波长为448 nm近可见区，而磁显葡胺最大激发波长为275 nm，最大发射波长为313 nm近紫外区.由于仪器光源强度随波长而改变，同时每一个检测器对不同波长接受灵敏度不同，即检测器感应和波长不成线性，在使用单光束荧光分光光度计时用硫酸奎宁作磁显葡胺溶液的标准荧光试剂，测量误差大.由稳定性实验可知磁显葡胺溶液在275 nm连续照射180 min、冷藏、避光条件下保存荧光强度稳定.作者提出采用含4.7 g/L的磁显葡胺溶液作该方法的标准荧光试剂.
, 百拇医药
b.经实验表明pH 6.0～8.0时，磁显葡胺溶液荧光强度不随葡甲胺加入量变化而改变.
1药学系1994级学生
参考文献
1 潘学田.新药产品汇编大全(1985—1992).北京：中华人民共和国卫生部药政局，1993.337～339
2 Abou-Taleb S A. Microdetermination of metals in organometallic compounds by the oxide method after oxygen flask.Microchem J,1986，33(1)：29～33
3 吴昭珲，王尊本，游文纬.应用二阶导数紫外分光光度法测定钆喷酸.分析化学，1997，25(2)：243～245
4 中华人民共和国卫生部.WS-069(X-056)-96药品标准.北京：中华人民共和国卫生部药政局，1996
5 王岭，黄汉国.一缩二甘醇酸体系荧光分析法同时测定钆和铽.分析化学，1994，22(4)：380～382
6 王建国，王建新，黄汉国.氨基多羧酸类荧光分析法同时测定钆和铽.分析化学，1991，19(6)：645～649
收稿日期:1998-09-01, 百拇医药
单位：沈阳药科大学药学系， 沈阳 110015
关键词：荧光法；磁显葡胺；钆喷酸葡甲胺
沈阳药科大学学报990210 摘 要 建立了用荧光法测定磁显葡胺含量的新方法，考察了荧光法测定磁显葡胺含量的最佳条件：激发波长275 nm，发射波长313 nm,pH为6.0～8.0，线性范围9.4 mg/L～9.4 g/L,精密度RSD为0.2%，平均回收率100.3%.
分类号 R914.1
Quantitative Determination of Magnevist by the Fluorescent Method
Wang Xianglin,Chen Hong,Luo Hong,Chen Qi
, http://www.100md.com
Department of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015
Abstract A fluorescent method has been developed for the assay of magnevist.The optional conditions for determining magnevist were established.The sample was analyzed at Ex=275 nm and Em=313 nm.The average recovery was 100.3%.By the use of this method,magnevist can be determined with satisfactory results.
Key words fluorescent method;magnevist;Gd-DTPA-Glu
, 百拇医药
磁显葡胺(magnevist)又名钆喷酸双葡胺(Gd-DTPA-2Glu)，为临床上核磁共振成像诊断常用造影剂.经注射体内后，能缩短质子弛豫时间，提高核磁造影(NMR)图象清晰度和对比度〔1〕，已报道磁显葡胺的含量测定方法有：氧瓶燃烧法〔2〕、二阶导数紫外分光光度法〔3〕和高效液相色谱法(HPLC)〔4〕等.国外标准和中华人民共和国卫生部药品标准均采用HPLC法〔4〕，此法虽有灵敏度高、样品用量少等优点，但因仪器设备昂贵、色谱条件苛刻、检测波长在195 nm的近紫外区等缺点，有待建立新方法〔5，6〕.作者首次提出用荧光分光光度法测定磁显葡胺含量.
1 仪器与试剂
荧光分光光度计：HITACHI 650-60；25型酸度计(上海甘泉五金厂)；亚沸水(用亚沸水发生器自制)；钆喷酸葡甲胺(上海淮海制药厂，批号970704)；葡甲胺(上海淮海制药厂，批号970704)；其它试剂均为分析纯.
, http://www.100md.com
2 方法与结果
2.1 实验条件的选择
2.1.1 激发波长和发射波长确定
精密称取钆喷酸葡甲胺350 mg,置于50 mL量瓶中，加0.196%葡甲胺溶液使其溶解并稀释至刻度，扫描其激发光谱和荧光光谱.结果见图1.最大激发波长为275 nm，最大发射波长为313 nm.
2.1.2 仪器狭缝选择
选新制的亚沸水作空白，激发波长为275 nm，激发狭缝为10 nm，改变发射狭缝为10、5、2 nm，分别扫描其荧光光谱，比较发射狭缝对灵敏度的影响.结果见图2，以Slit Ex 10 nm、Slit Em 2 nm为最佳.
2.1.3 稳定性试验
, 百拇医药
精密称取钆喷酸葡甲胺235 mg,置于50 mL量瓶中，加0.196%葡甲胺溶液使溶解，并稀释至刻度，摇匀，测定10、30、60、120、150、180 min时溶液的荧光强度.同时将配制好的溶液避光、冷藏放置1、2、3、5、10、15天测得荧光强度.结果表明磁显葡胺溶液在275 nm连续测定 180 min荧光强度均为98，荧光稳定.同时磁显葡胺溶液在冷藏、避光条件下保存15天后测得荧光强度为98，荧光稳定.
Fig.1 Stimulation and emittance spectrum
1—λEx=275 nm; 2—λEm=313 nm
, http://www.100md.com Fig.2 Sensitivity effect of slit
1—Slit Em 10; 2—Slit Em 5; 3—Slit Em 2
2.1.4 pH值的选择
准确量取14 g/L的磁显葡胺标准溶液各2.5 mL于10只干燥烧杯中，用稀NaOH和稀HCl溶液分别调pH值为1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0，对应定量转移于10只25 mL量瓶中，均用亚沸水稀释至刻度，摇匀，测定荧光强度F.结果见图3，选用pH 6.0～8.0时，荧光强度较高，且稳定.
Fig.3 Relation of solution pH and fluorescent strength
, http://www.100md.com
2.2 实验结果
2.2.1 工作曲线的制备
准确量取9.4 g/L磁显葡胺标准溶液0、0.1、0.5、2.0、5.0、10.0、25.0、50.0、100.0 mL于9只100 mL量瓶中，均调pH值至7.4，用亚沸水稀释至刻度，摇匀，以试剂为空白测定其荧光强度，结果见图4.计算回归方程为：C=56.42 F-7.96，r=0.998 9.
结果表明用荧光法测定磁显葡胺在9.4 mg/L～9.4 g/L时荧光强度呈线性关系.
Fig.4 Relation of solution concentration and fluorescent strength
, http://www.100md.com
2.2.2 回收率试验
配制并经荧光法测定，标示量为0.08 g/L的磁显葡胺溶液作为样品溶液.精密称取磁显葡胺10、50、100、250、500 mg分别置于6只量瓶中，加样品液溶解并稀释至刻度，摇匀，测定上述溶液的荧光强度并按回归方程计算回收率，结果为：98.2%、101.5%、99.9%、102.1%、99.9%，平均回收率
=100.3%，RSD=1.5%.2.2.3 精密度试验
准确称取钆喷酸葡甲胺73.5、73.4、73.3、73.5、73.4 mg于100 mL量瓶中，分别加入0.196%葡甲胺溶液10 mL，用亚沸水稀释至刻度，摇匀，测定其荧光强度，计算相对标准偏差，RSD=0.2%，表明本法具有良好的精密度.
, 百拇医药
2.3 磁显葡胺样品测定
精密称取钆喷酸葡胺0.370 0 g，置于50 mL量瓶中，加0.098%葡甲胺溶液使其溶解并稀释至刻度，摇匀.精密吸取5 mL于干燥烧杯中，用稀NaOH和稀HCl溶液调pH为7.4，转移至50 mL量瓶中，用亚沸水稀释至刻度，摇匀.配制相应的空白溶液，测定其荧光强度.按回归方程计算样品中磁显葡胺的含量，同法再测样品5次，同时与部颁标准HPLC法作比较，结果见表1.两方法无显著性差异.
Tab.1 Determination of magnevist solution Sample No.
Mark percent conternt/%
State standard
method/HPLC
, http://www.100md.com
Fluorescent method
1
98.9
98.7
2
103.3
99.3
3
101.4
101.8
4
99.0
101.2
, http://www.100md.com
5
103.4
99.2
Average mark
101.2
100.4
percent content
RSD
1.6
1.2
3 讨论 a.荧光分光光度法中常用硫酸奎宁作标准荧光试剂，最大激发波长为320 nm，最大发射波长为448 nm近可见区，而磁显葡胺最大激发波长为275 nm，最大发射波长为313 nm近紫外区.由于仪器光源强度随波长而改变，同时每一个检测器对不同波长接受灵敏度不同，即检测器感应和波长不成线性，在使用单光束荧光分光光度计时用硫酸奎宁作磁显葡胺溶液的标准荧光试剂，测量误差大.由稳定性实验可知磁显葡胺溶液在275 nm连续照射180 min、冷藏、避光条件下保存荧光强度稳定.作者提出采用含4.7 g/L的磁显葡胺溶液作该方法的标准荧光试剂.
, 百拇医药
b.经实验表明pH 6.0～8.0时，磁显葡胺溶液荧光强度不随葡甲胺加入量变化而改变.
1药学系1994级学生
参考文献
1 潘学田.新药产品汇编大全(1985—1992).北京：中华人民共和国卫生部药政局，1993.337～339
2 Abou-Taleb S A. Microdetermination of metals in organometallic compounds by the oxide method after oxygen flask.Microchem J,1986，33(1)：29～33
3 吴昭珲，王尊本，游文纬.应用二阶导数紫外分光光度法测定钆喷酸.分析化学，1997，25(2)：243～245
4 中华人民共和国卫生部.WS-069(X-056)-96药品标准.北京：中华人民共和国卫生部药政局，1996
5 王岭，黄汉国.一缩二甘醇酸体系荧光分析法同时测定钆和铽.分析化学，1994，22(4)：380～382
6 王建国，王建新，黄汉国.氨基多羧酸类荧光分析法同时测定钆和铽.分析化学，1991，19(6)：645～649
收稿日期:1998-09-01, 百拇医药