斑点杂交法及PCR法检测乙肝患者血清HBV DNA结果分析
作者：林永祺
单位：绵阳市中心医院检验科 绵阳 621000
关键词：
川北医学院学报/990252
文章编号：1005-3697(1999)02-0070-02 中图分类号：R446.1 文献标识码：A
1994年2月以来，我们对我院门诊及住院部临床已确诊的1021例乙肝患者，采用ELISA法检测患者血清的乙肝两对半，并同时留标本采用Dig HBVDNA探针斑点杂交法及PCR—溴化乙锭法分别检测其HBVDNA。以便探讨Dig HBV-DNA探针斑点杂交法及PCR-溴化乙锭法探测HBV-DNA的灵敏度及特异性，更好地为临床提供最佳的检测结果，现将结果报告如下。
1 对象与方法
, http://www.100md.com
1.1 标本来源 1021例血清标本来自我院门诊及住院部，按病毒性乙型肝炎诊断标准已确诊的患者。抽患者空腹血2份，分离血清。其中男性602例，女性592例。年龄从7岁至73岁。正常20例乙肝两对半全项指标阴性的血清20份(每份2管)来自绵阳市红十字中心血站献血员。
1.2 ELISA法
1.2.1 乙肝两对半试剂盒 由上海科华公司提供，按试剂说明书操作。按药盒说明及S/CO值结合判断阴性及阳性结果。严格按卫生部临床检验中心编写的“临床免疫学检验质量保证”一书作室内质控[2]。
1.2.2 仪器 美国宝特ELX50型洗板机和ELX800型酶标仪
1.3 探针斑点杂交 Dig HBVDNA探针及全部试剂均由华西医科大学肝病研究室提供，试剂盒说明书操作。
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1.4 PCR—溴化乙锭法
1.4.1 PCR试剂盒 由华美生物工程公司提供试剂盒，设有阴性血清及阳性血清对照，按试剂盒说明书操作。
1.4.2 仪器 英国HYBID OMN-E型基因扩增仪
2 结果
2.1 20例献血员阴性对照血清，乙肝两对半五项指标为阴性。用Dig HBVDNA检测结果，HBVDNA全部阴性。用PCR—溴化乙锭法检测，20份血清HBVDNA结果也是阴性。
2.2 在1201例乙肝患者血清中，HBSAg(+)HBeAg(+)抗HBC(+)，即乙肝“大三阳”血清模式组中，Dig HBVDNA探针斑点杂交法的HBVDNA检出阳性率为80.3%，PCR—溴化乙锭法检出阳性率为89.7%，结果见表1。
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表1 1201例乙肝血清ELISA法、斑点杂交法及PCR法检测结果 ELISA法血清模式
阳性例数
%
斑点杂交法HBVDNA
PCR法HBVDNA
阳性例数
%
阳性例数
%
HBSAg(+)
184
15
, http://www.100md.com
79
42.9
124
67.4
HBSAg(+) HBeAg(+) 抗HBc(+)
300
25
241
80.3
269
89.7
HBSAg(+) 抗HBe(+) 抗HBC(+)
, 百拇医药
205
17
101
49.3
160
78.1
抗HBe(+) 抗HBC(+)
241
20
12
5.0
45
, 百拇医药 18.7
抗HBS(+) 抗HBe(+) 抗HBC(+)
150
13
4
2.7
26
17.3
其它阳性血清模式
121
10
1
, 百拇医药
0.8
8
9.7
2.3 在五种血清模式组及其它血清模式组中，两法均有阳性标本检出。但在抗HBS(+)抗HBe(+)抗HBC(+)血清模式组及其它血清模式组中，斑点杂交法HBVDNA检出阳性率分别为2.7%及0.8%，而PCR法分别为17.3%及9.7%。
3 讨论
3.1 20例乙肝两对半阴性的献血员阴性对照血清，Dig HBVDNA探针斑点杂交法HBVDNA检测结果均为阴性，PCR—溴化乙锭法检测结果20例均为阴性。证明两法未出现假阳性。
3.2 从表1的结果可以看出，在ELISA法检测的五种常见血清模式组及其它血清模式组中，以HBSAg(+) HBeAg(+)抗HBC(+)血清模式组的HBVDNA检出阳性率最高，分别两法为80.3%及89.7%。虽然PCR法具有简单、快捷、灵敏度高、特异性强等优点，但受实验环境、人员素质，特别是试剂质量影响较大[3]，在卫生部尚未批准临床实验室正式使用前，Dig HBVDNA探针斑点杂交法检测HBVDNA，可作为检测HBVDNA的过渡实验，临床用以判断乙肝病毒的复制。
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3.3 从表1可见，在五种常见血清模式组及其它血清模式组中，尤其在抗HBS(+)抗HBe(+)及抗HBC(+)血清模式组中，用PCR法检测HBVDNA检出阳性率明显高于斑点杂交法。最近有资料报导[1，4]，采用PCR—微孔反向杂交法检测HBVDNA，它集PCR法、杂交法及ELISA法三大高新技术于一体，具有灵敏度高，特别适合低水平HBVDNA标本检测。且特异性强，具有简便、迅速等优点，正受到广泛关注。待方法学成熟、卫生部批准后，可望在临床实验室核酸检测中广泛使用。
参考文献
1 魏军，张正.聚合酶链反应产物微孔板杂交技术.中华医学检验杂志，1997；20(4)：252～253
2 郑怀竞.临床免疫学检验质量保证.第1版，北京：北京医科大学、中国协合医科大学联合出版社.1995
3 徐蓓，唐生杰，等.PCR检测HBVDNA不同试剂和方法的比较.临床检验杂志，1998；16(5)：291
4 钱雷，王忠民，等.PCR微孔板反向杂交法检测HBVDNA.临床检验杂志，1999；17(1)：27
(收稿日期：1998-03-06), 百拇医药
单位：绵阳市中心医院检验科 绵阳 621000
关键词：
川北医学院学报/990252
文章编号：1005-3697(1999)02-0070-02 中图分类号：R446.1 文献标识码：A
1994年2月以来，我们对我院门诊及住院部临床已确诊的1021例乙肝患者，采用ELISA法检测患者血清的乙肝两对半，并同时留标本采用Dig HBVDNA探针斑点杂交法及PCR—溴化乙锭法分别检测其HBVDNA。以便探讨Dig HBV-DNA探针斑点杂交法及PCR-溴化乙锭法探测HBV-DNA的灵敏度及特异性，更好地为临床提供最佳的检测结果，现将结果报告如下。
1 对象与方法
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1.1 标本来源 1021例血清标本来自我院门诊及住院部，按病毒性乙型肝炎诊断标准已确诊的患者。抽患者空腹血2份，分离血清。其中男性602例，女性592例。年龄从7岁至73岁。正常20例乙肝两对半全项指标阴性的血清20份(每份2管)来自绵阳市红十字中心血站献血员。
1.2 ELISA法
1.2.1 乙肝两对半试剂盒 由上海科华公司提供，按试剂说明书操作。按药盒说明及S/CO值结合判断阴性及阳性结果。严格按卫生部临床检验中心编写的“临床免疫学检验质量保证”一书作室内质控[2]。
1.2.2 仪器 美国宝特ELX50型洗板机和ELX800型酶标仪
1.3 探针斑点杂交 Dig HBVDNA探针及全部试剂均由华西医科大学肝病研究室提供，试剂盒说明书操作。
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1.4 PCR—溴化乙锭法
1.4.1 PCR试剂盒 由华美生物工程公司提供试剂盒，设有阴性血清及阳性血清对照，按试剂盒说明书操作。
1.4.2 仪器 英国HYBID OMN-E型基因扩增仪
2 结果
2.1 20例献血员阴性对照血清，乙肝两对半五项指标为阴性。用Dig HBVDNA检测结果，HBVDNA全部阴性。用PCR—溴化乙锭法检测，20份血清HBVDNA结果也是阴性。
2.2 在1201例乙肝患者血清中，HBSAg(+)HBeAg(+)抗HBC(+)，即乙肝“大三阳”血清模式组中，Dig HBVDNA探针斑点杂交法的HBVDNA检出阳性率为80.3%，PCR—溴化乙锭法检出阳性率为89.7%，结果见表1。
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表1 1201例乙肝血清ELISA法、斑点杂交法及PCR法检测结果 ELISA法血清模式
阳性例数
%
斑点杂交法HBVDNA
PCR法HBVDNA
阳性例数
%
阳性例数
%
HBSAg(+)
184
15
, http://www.100md.com
79
42.9
124
67.4
HBSAg(+) HBeAg(+) 抗HBc(+)
300
25
241
80.3
269
89.7
HBSAg(+) 抗HBe(+) 抗HBC(+)
, 百拇医药
205
17
101
49.3
160
78.1
抗HBe(+) 抗HBC(+)
241
20
12
5.0
45
, 百拇医药 18.7
抗HBS(+) 抗HBe(+) 抗HBC(+)
150
13
4
2.7
26
17.3
其它阳性血清模式
121
10
1
, 百拇医药
0.8
8
9.7
2.3 在五种血清模式组及其它血清模式组中，两法均有阳性标本检出。但在抗HBS(+)抗HBe(+)抗HBC(+)血清模式组及其它血清模式组中，斑点杂交法HBVDNA检出阳性率分别为2.7%及0.8%，而PCR法分别为17.3%及9.7%。
3 讨论
3.1 20例乙肝两对半阴性的献血员阴性对照血清，Dig HBVDNA探针斑点杂交法HBVDNA检测结果均为阴性，PCR—溴化乙锭法检测结果20例均为阴性。证明两法未出现假阳性。
3.2 从表1的结果可以看出，在ELISA法检测的五种常见血清模式组及其它血清模式组中，以HBSAg(+) HBeAg(+)抗HBC(+)血清模式组的HBVDNA检出阳性率最高，分别两法为80.3%及89.7%。虽然PCR法具有简单、快捷、灵敏度高、特异性强等优点，但受实验环境、人员素质，特别是试剂质量影响较大[3]，在卫生部尚未批准临床实验室正式使用前，Dig HBVDNA探针斑点杂交法检测HBVDNA，可作为检测HBVDNA的过渡实验，临床用以判断乙肝病毒的复制。
, http://www.100md.com
3.3 从表1可见，在五种常见血清模式组及其它血清模式组中，尤其在抗HBS(+)抗HBe(+)及抗HBC(+)血清模式组中，用PCR法检测HBVDNA检出阳性率明显高于斑点杂交法。最近有资料报导[1，4]，采用PCR—微孔反向杂交法检测HBVDNA，它集PCR法、杂交法及ELISA法三大高新技术于一体，具有灵敏度高，特别适合低水平HBVDNA标本检测。且特异性强，具有简便、迅速等优点，正受到广泛关注。待方法学成熟、卫生部批准后，可望在临床实验室核酸检测中广泛使用。
参考文献
1 魏军，张正.聚合酶链反应产物微孔板杂交技术.中华医学检验杂志，1997；20(4)：252～253
2 郑怀竞.临床免疫学检验质量保证.第1版，北京：北京医科大学、中国协合医科大学联合出版社.1995
3 徐蓓，唐生杰，等.PCR检测HBVDNA不同试剂和方法的比较.临床检验杂志，1998；16(5)：291
4 钱雷，王忠民，等.PCR微孔板反向杂交法检测HBVDNA.临床检验杂志，1999；17(1)：27
(收稿日期：1998-03-06), 百拇医药