甲状腺癌中VEGF表达与DNA含量、AgNOR关系的研究
作者：梁 澍 李 红 李洪钧 王 琦 赵瑞霞 刘祖华
单位：梁 澍 王 琦 赵瑞霞 刘祖华(青岛市肿瘤医院(青岛 266042)；李 红(牡丹江市肿瘤医院)；李洪钧(牡丹江医学院附属医院)
关键词：甲状腺肿瘤；VEGF；DNA含量；图像处理，计算机辅助
肿瘤990206 目的 研究血管内皮生长因子(VEGF)在甲状腺癌及其区域淋巴结中的表达及与癌细胞DNA含量、AgNOR的关系。 方法 应用免疫组织化学SABC法检测136例甲状腺癌及淋巴结中的VEGF表达，同时进行细胞DNA含量及AgNOR，自动图像分析检测，10例正常甲状腺组织作对照。 结果 10例正常甲状腺组织中未发现VEGF的表达，136例甲状腺癌组织中VEGF阳性表达72.97%(99/136)，区域淋巴结中VEGF阳性表达91%(124/136)。DNA倍体平均值及AgNOR 5年以上生存组病例明显低于5年以内死亡组(P<0.01，P<0.05)。 结论 检测VEGF、DNA含量及AgNOR有助于评估甲状腺癌的生物学行为及预后。
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CORRELATION OF THE EXPRESSION OF VEGF，DNA AND
AgNOR IN THYROID CARCINOMA
Liang Shu1，Li Hong2，Li Hongjun3, et al.
1 Qingdao Cancer Hospital,Qingdao 266042;2 Mudanjiang Cancer Hospital;
3 Affiliated Hospital,Mudanjiang Medical College
Objective：To study the relationship of VEGF,DNA and AgNOR in human thyroid carcinoma and in regional lymph nodes.Methods：The expression of VEGF, DNA and AgNOR were studied by immunohistochemical method and image analysis system.Results：The expression of VEGF was negative in 10 cases of thyroid tissue.The positive rates of VEGF in thyroid cancer and in regional lymph node were 72.97%(99/136) and 91%(124/136)respectively.The average values of DNA and AgNOR in those survived more than 5 years groups were lower than those survived less than 5 years groups(P<0.01 and P<0.05).Conclusion：Examining the expression of VEGF,DNA and AgNOR together may benefit the estimation of patients′ prognosis.
, 百拇医药
Key words Thyroid neoplasms VEGF DNA ploidy Image processing,computer-assisted
血管生成对实体瘤的快速生长和转移非常重要，也是肿瘤研究的热点[1]。肿瘤血管期的启动是由瘤细胞产生促血管内皮细胞增殖和迁移的血管生成因子所诱发，而其中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor)极为重要[2]。作者采用免疫组化技术，对甲状腺癌组织及区域淋巴结进行VEGF检测，并对其与癌细胞DNA含量及AgNOR的关系进行研究，报告如下。
材料和方法
1.材料 收集青岛市肿瘤医院、牡丹江市肿瘤医院1982年～1991年甲状腺癌手术切除标本共136例，10例正常甲状腺组织。组织学类型(参照1981年WHO分类)：乳头状癌56例、滤泡癌43例、髓样癌37例，标本均用10%福尔马林固定，常规石蜡包埋制片。患者术前未进行放、化疗，术后均随访5年以上。
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2.VEGF测定 采用SABC免疫组化技术。兔抗VEGF蛋白为美国CALBIOCHEM公司产品，SABC试剂盒为武汉博士德公司产品，以细胞膜/浆着色呈棕黄色反应为阳性，阳性表达<25%为(+)、25%～75%为(++)、>75%为(+++)。
3.DNA含量及AgNOR染色 DNA染色采用Feulgen染色方法，使用VIDAS型全自动图像分析仪(OPTON公司)进行DNA含量测定，以同一切片内淋巴细胞的DNA相对含量作为DNA正常二倍体(2C)含量对照。结果判断：1.81～2.50C为二倍体及近二倍体，2.50～5C为增殖倍体，5C以上为异多倍体。AgNOR银染按Ploton改进石蜡切片染色方法，AgNOR颗粒呈棕黑色位于癌细胞核内，用同一图像分析仪进行计数检测。
结 果
1. 136例甲状腺癌组织VEGF染色阳性99例，阳性率72.79%(99/136)，VEGF阳性表达组中与甲状腺癌各组织学类型的关系见表1。结果表明髓样癌其癌组织产生的血管内皮生长因子高于乳头状癌，与其较多形成远处淋巴结转移相一致。
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2. 136例甲状腺癌区域淋巴结VEGF染色阳性124例，阳性率91%，表达结果见表2。结果表明已转移到区域淋巴结的癌细胞有较强的生成血管内皮生长因子的能力，通过促进血管生成对肿瘤生长起促进作用，从而为肿瘤生长提供物质基础。
表1 VEGF阳性表达与甲状腺癌组织学类型的关系 组织学类型
表 达 强 度
合计
阳性率(%)
+
++
+++
乳头状癌
19
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11
6
36
64.3(36/56)
滤泡癌
14
10
9
33
76.7(33/43)
髓样癌
6
9
, 百拇医药
15
30
81.1(30/37)
χ2=10.730 P<0.05表2 VEGF阳性表达与甲状腺癌区域淋巴结转移的关系 组织学类型
区域淋巴结有癌转移
区域淋巴结无癌转移
+
++
+++
+
++
+++
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乳头状癌
24
13
11
1
3
0
滤泡癌
8
5
10
10
6
0
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髓样癌
2
4
13
12
2
0
χ2=74.392 P<0.01
3.DNA含量及AgNOR检测 136例甲状腺癌及区域淋巴结DNA倍体分布范围为3.36～18.44 C，无二倍体及近二倍体病例，增殖倍体9例、异多倍体127例。髓样癌异倍体检出率为85.7%，与乳头状癌(4%)异倍体检出率比较差异极显著(P<0.01)。区域淋巴结有癌转移的异倍体检出率71.6%，也显著高于无淋巴结转移者(52.5%)(P<0.05)。在5年以上生存组病例的DNA异倍体发生率为15.9%，明显低于5年以内死亡组(55.5)，差异具有显著性(P<0.01)。
, 百拇医药
136例甲状腺癌中生存5年以上的AgNOR检出率27.17%低于5年以内死亡者(42.42%)，两者经统计学处理差异有显著性(P<0.05)。术后5年以内死亡组病例中，DNA含量在7C以上者其AgNOR检出率为31.8%，有高于VEGF Ⅰ级(表达强度为+)及DNA含量7C以下病例的趋势，后者AgNOR检出率为20.65%，但两者比较P>0.05。
讨 论
VEGF是一种糖基化分泌性多肽因子，分子量约43 000，在胚胎发育中有广泛的表达，当血管生成在正常生理状态下被关闭时呈低水平表达[3]。在已知的微血管高通透性诱导物中作用最强，是选择性的内皮细胞生长因子，增加微血管通透性，以旁分泌方式特异地作用于血管内皮细胞，在原位组织诱导血管生成，在与血管内皮细胞增殖有关的病理过程中占有重要地位，特别是与实体瘤关系密切[4]。有文献报道VEGF在胃肠道癌、肾癌、膀 胱癌中呈高表达[5]。本文对136例甲状腺癌检测，阳性表达72.79%。髓样癌与乳头状癌VEGF表达差异显著(P<0.05)。在区域淋巴结检测中，淋巴结转移组和未转移组VEGF表达的差异极显著(P<0.01)。
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DNA测定作为直接反映细胞内核酸代谢情况的指标已被广泛接受。AgNOR作为调节rDNA转录活动的蛋白，其计数增加与细胞增殖活跃、DNA倍体增加及rDNA转录活性有关。就VEGF、DNA含量及AgNOR计数三者之间的相互关系，本文研究结果显示：在术后5年以上生存组中三者呈正相关关系。术后5年以内死亡组病例中DNA含量在7C以上者其AgNOR计数有高于VEGF Ⅰ级及DNA含量7C以下病例的趋势，但差异不显著(P>0.05)，可能与某一增殖动力学特征有关。同时说明三种检测方法综合研究较之单项检测能反映出更客观的结论。由于本组实验病例所限，甲状腺癌10年以上远期生存率与各项指标的关系有待于进一步随访观察。
第一作者简介 梁 澍，男，大学本科，副主任医师。
参 考 文 献
1 Plate KH,Breier G,Rissau W.Molecular mechanisms of developmental and tumor angiogenesis.Brain Pathol,1994,4:207
, 百拇医药
2 Potgens AJ,Lubsen NH,Van Altena MC.Vascular permeability factor expression influences tumor angiogenesis in human melanoma lines xenografted to nude mice.Am J Pathol,1995,146:197
3 Breier G,Albricht U,Sterrer S, et al. Expression of vascular endothelial growth factor during embryonic angiogenesis and endothelial cell differentiation. Development,1992,114:521
4 Zagzag D.Angiogenic growth factors in neural embryogenesis and neoplasia.Am J Pathol,1995,146：293
5 卞修武，史景朱.血管内皮生长因子及其受体在肿瘤血管生成中的作用及与抗血管生成研究进展.中华病理学杂志，1997，26：4
(收稿：1997-12-05 修回：1998-05-01), 百拇医药
单位：梁 澍 王 琦 赵瑞霞 刘祖华(青岛市肿瘤医院(青岛 266042)；李 红(牡丹江市肿瘤医院)；李洪钧(牡丹江医学院附属医院)
关键词：甲状腺肿瘤；VEGF；DNA含量；图像处理，计算机辅助
肿瘤990206 目的 研究血管内皮生长因子(VEGF)在甲状腺癌及其区域淋巴结中的表达及与癌细胞DNA含量、AgNOR的关系。 方法 应用免疫组织化学SABC法检测136例甲状腺癌及淋巴结中的VEGF表达，同时进行细胞DNA含量及AgNOR，自动图像分析检测，10例正常甲状腺组织作对照。 结果 10例正常甲状腺组织中未发现VEGF的表达，136例甲状腺癌组织中VEGF阳性表达72.97%(99/136)，区域淋巴结中VEGF阳性表达91%(124/136)。DNA倍体平均值及AgNOR 5年以上生存组病例明显低于5年以内死亡组(P<0.01，P<0.05)。 结论 检测VEGF、DNA含量及AgNOR有助于评估甲状腺癌的生物学行为及预后。
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CORRELATION OF THE EXPRESSION OF VEGF，DNA AND
AgNOR IN THYROID CARCINOMA
Liang Shu1，Li Hong2，Li Hongjun3, et al.
1 Qingdao Cancer Hospital,Qingdao 266042;2 Mudanjiang Cancer Hospital;
3 Affiliated Hospital,Mudanjiang Medical College
Objective：To study the relationship of VEGF,DNA and AgNOR in human thyroid carcinoma and in regional lymph nodes.Methods：The expression of VEGF, DNA and AgNOR were studied by immunohistochemical method and image analysis system.Results：The expression of VEGF was negative in 10 cases of thyroid tissue.The positive rates of VEGF in thyroid cancer and in regional lymph node were 72.97%(99/136) and 91%(124/136)respectively.The average values of DNA and AgNOR in those survived more than 5 years groups were lower than those survived less than 5 years groups(P<0.01 and P<0.05).Conclusion：Examining the expression of VEGF,DNA and AgNOR together may benefit the estimation of patients′ prognosis.
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Key words Thyroid neoplasms VEGF DNA ploidy Image processing,computer-assisted
血管生成对实体瘤的快速生长和转移非常重要，也是肿瘤研究的热点[1]。肿瘤血管期的启动是由瘤细胞产生促血管内皮细胞增殖和迁移的血管生成因子所诱发，而其中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor)极为重要[2]。作者采用免疫组化技术，对甲状腺癌组织及区域淋巴结进行VEGF检测，并对其与癌细胞DNA含量及AgNOR的关系进行研究，报告如下。
材料和方法
1.材料 收集青岛市肿瘤医院、牡丹江市肿瘤医院1982年～1991年甲状腺癌手术切除标本共136例，10例正常甲状腺组织。组织学类型(参照1981年WHO分类)：乳头状癌56例、滤泡癌43例、髓样癌37例，标本均用10%福尔马林固定，常规石蜡包埋制片。患者术前未进行放、化疗，术后均随访5年以上。
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2.VEGF测定 采用SABC免疫组化技术。兔抗VEGF蛋白为美国CALBIOCHEM公司产品，SABC试剂盒为武汉博士德公司产品，以细胞膜/浆着色呈棕黄色反应为阳性，阳性表达<25%为(+)、25%～75%为(++)、>75%为(+++)。
3.DNA含量及AgNOR染色 DNA染色采用Feulgen染色方法，使用VIDAS型全自动图像分析仪(OPTON公司)进行DNA含量测定，以同一切片内淋巴细胞的DNA相对含量作为DNA正常二倍体(2C)含量对照。结果判断：1.81～2.50C为二倍体及近二倍体，2.50～5C为增殖倍体，5C以上为异多倍体。AgNOR银染按Ploton改进石蜡切片染色方法，AgNOR颗粒呈棕黑色位于癌细胞核内，用同一图像分析仪进行计数检测。
结 果
1. 136例甲状腺癌组织VEGF染色阳性99例，阳性率72.79%(99/136)，VEGF阳性表达组中与甲状腺癌各组织学类型的关系见表1。结果表明髓样癌其癌组织产生的血管内皮生长因子高于乳头状癌，与其较多形成远处淋巴结转移相一致。
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2. 136例甲状腺癌区域淋巴结VEGF染色阳性124例，阳性率91%，表达结果见表2。结果表明已转移到区域淋巴结的癌细胞有较强的生成血管内皮生长因子的能力，通过促进血管生成对肿瘤生长起促进作用，从而为肿瘤生长提供物质基础。
表1 VEGF阳性表达与甲状腺癌组织学类型的关系 组织学类型
表 达 强 度
合计
阳性率(%)
+
++
+++
乳头状癌
19
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11
6
36
64.3(36/56)
滤泡癌
14
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76.7(33/43)
髓样癌
6
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15
30
81.1(30/37)
χ2=10.730 P<0.05表2 VEGF阳性表达与甲状腺癌区域淋巴结转移的关系 组织学类型
区域淋巴结有癌转移
区域淋巴结无癌转移
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乳头状癌
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滤泡癌
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髓样癌
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χ2=74.392 P<0.01
3.DNA含量及AgNOR检测 136例甲状腺癌及区域淋巴结DNA倍体分布范围为3.36～18.44 C，无二倍体及近二倍体病例，增殖倍体9例、异多倍体127例。髓样癌异倍体检出率为85.7%，与乳头状癌(4%)异倍体检出率比较差异极显著(P<0.01)。区域淋巴结有癌转移的异倍体检出率71.6%，也显著高于无淋巴结转移者(52.5%)(P<0.05)。在5年以上生存组病例的DNA异倍体发生率为15.9%，明显低于5年以内死亡组(55.5)，差异具有显著性(P<0.01)。
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136例甲状腺癌中生存5年以上的AgNOR检出率27.17%低于5年以内死亡者(42.42%)，两者经统计学处理差异有显著性(P<0.05)。术后5年以内死亡组病例中，DNA含量在7C以上者其AgNOR检出率为31.8%，有高于VEGF Ⅰ级(表达强度为+)及DNA含量7C以下病例的趋势，后者AgNOR检出率为20.65%，但两者比较P>0.05。
讨 论
VEGF是一种糖基化分泌性多肽因子，分子量约43 000，在胚胎发育中有广泛的表达，当血管生成在正常生理状态下被关闭时呈低水平表达[3]。在已知的微血管高通透性诱导物中作用最强，是选择性的内皮细胞生长因子，增加微血管通透性，以旁分泌方式特异地作用于血管内皮细胞，在原位组织诱导血管生成，在与血管内皮细胞增殖有关的病理过程中占有重要地位，特别是与实体瘤关系密切[4]。有文献报道VEGF在胃肠道癌、肾癌、膀 胱癌中呈高表达[5]。本文对136例甲状腺癌检测，阳性表达72.79%。髓样癌与乳头状癌VEGF表达差异显著(P<0.05)。在区域淋巴结检测中，淋巴结转移组和未转移组VEGF表达的差异极显著(P<0.01)。
, http://www.100md.com
DNA测定作为直接反映细胞内核酸代谢情况的指标已被广泛接受。AgNOR作为调节rDNA转录活动的蛋白，其计数增加与细胞增殖活跃、DNA倍体增加及rDNA转录活性有关。就VEGF、DNA含量及AgNOR计数三者之间的相互关系，本文研究结果显示：在术后5年以上生存组中三者呈正相关关系。术后5年以内死亡组病例中DNA含量在7C以上者其AgNOR计数有高于VEGF Ⅰ级及DNA含量7C以下病例的趋势，但差异不显著(P>0.05)，可能与某一增殖动力学特征有关。同时说明三种检测方法综合研究较之单项检测能反映出更客观的结论。由于本组实验病例所限，甲状腺癌10年以上远期生存率与各项指标的关系有待于进一步随访观察。
第一作者简介 梁 澍，男，大学本科，副主任医师。
参 考 文 献
1 Plate KH,Breier G,Rissau W.Molecular mechanisms of developmental and tumor angiogenesis.Brain Pathol,1994,4:207
, 百拇医药
2 Potgens AJ,Lubsen NH,Van Altena MC.Vascular permeability factor expression influences tumor angiogenesis in human melanoma lines xenografted to nude mice.Am J Pathol,1995,146:197
3 Breier G,Albricht U,Sterrer S, et al. Expression of vascular endothelial growth factor during embryonic angiogenesis and endothelial cell differentiation. Development,1992,114:521
4 Zagzag D.Angiogenic growth factors in neural embryogenesis and neoplasia.Am J Pathol,1995,146：293
5 卞修武，史景朱.血管内皮生长因子及其受体在肿瘤血管生成中的作用及与抗血管生成研究进展.中华病理学杂志，1997，26：4
(收稿：1997-12-05 修回：1998-05-01), 百拇医药