正交试验法优选柴胡止血液的提取工艺
作者：向永臣 尹蓉莉 陈钢 张艺
单位：成都中医药大学，四川 成都 610075
关键词：柴胡止血液；正交试验法；提取工艺；中药制剂
成都中医药大学学报990227 摘 要： 采用正交试验优选了柴胡止血液的最佳提取工艺条件。以浸膏收得率最大值和芍药甙含量为综合评判指标，考察了影响提取效果的加水量、煎煮时间及煎煮次数3个因素，每个因素选取3个水平进行实验。结果表明：该口服液最佳提取工艺条件为加水量10倍，煎煮时间为1.5h，煎煮提取次数为3次。所制口服液指标成分含量高，稳定性良好，经临床验证，疗效确切。
中图分类号：R943 文献标识码：B 文章编号：1004-0668(1999)02-0053-03
柴胡止血液由柴胡、白芍、茜草等中药组成，为了更好地保证质量，扩大和方便临床使用，拟将本品研制开发成为三类复方新制剂[1]。我们采用正交试验优选了该口服液的最佳提取工艺条件。
, http://www.100md.com
1 试验材料
试验所用中药材均购自成都市中药材分司；芍药甙对照品由中国药品生物制品检定所提供；所用试剂均为分析纯。
LC-6A高效液相色谱仪(日本岛津公司)；SPD-6AV紫外检测器；C-R3A数据处理器；CTO-6A柱温箱。
2 方法与结果
2.1 正交设计[2]
根据预试实验结果，选定加水量，煎煮提取时间及次数作为考察因素，以浸膏收得率和芍药甙含量作为考察指标，选用L9(34)正交表进行实验，因素水平安排见表1。
表1 试验因素水平表 水平
, 百拇医药 因 素
A(加水量倍数)
B(煎煮时间h)
D(煎煮次数)
1
8
1
1
2
10
1.5
2
3
, 百拇医药 12
2
3
2.2 实验方法
按实验设计方案要求称取处方量饮片64.5g，分别按表2的条件进行提取，提取液适当浓缩定容至100mL，得供试液，分别测定浸膏收得率和芍药甙含量，方法如下，结果见表2。表2 正交试验表及结果 因素
试验号
A
1
B
2
C
, 百拇医药
3
D
4
浸膏收得率
y(%)
芍药甙含量
z(%)
综合评分
yz
1
1
1
1
1
, 百拇医药
17.70
0.1209
61.38
2
1
2
2
2
23.25
0.1442
76.65
3
1
, 百拇医药
3
3
3
30.94
0.1380
87.40
4
2
1
2
3
28.75
0.1395
, http://www.100md.com 84.28
5
2
2
3
1
18.99
0.1194
63.04
6
2
3
1
2
, http://www.100md.com
28.53
0.1380
83.5
7
3
1
3
2
23.77
0.1302
73.71
8
3
, 百拇医药
2
1
3
29.21
0.1845
97.20
9
3
3
2
1
21.54
0.1225
, http://www.100md.com 68
Ⅰ；
225.43
219.37
242.08
192.42
Ⅱ；
230.82
236.89
228.93
233.36
Ⅲ；
238.91
, 百拇医药
238.9
224.15
268.88
Ⅰ；
75.14
73.12
80.69
64.14
Ⅱ；
76.94
78.96
76.31
77.95
, 百拇医药
Ⅲ；
79.64
79.63
74.72
89.63
R
4.5
6.51
5.97
25.49
R；
161174.55
161313.28
, 百拇医药
161254.90
164012.41
SS；
30.69
76.93
57.47
976.64
2.3 浸膏收得率测定方法
精密量取上述提取供试液20.0mL，倾入已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，移入105℃烘箱中干燥3h，取出，置于干燥器中冷却0.5h后，取出，立即称重。计算浸膏收得率。
2.4 芍药甙含量测定
, 百拇医药
采用高效液相色谱法测定，色谱条件：天津凯德C18柱(200mm×4mm，5μm)，检测波长230nm，流动相：甲醇-水-36%醋酸(30∶70∶1.5)，流速度：0.5mVmin，量程0.02aufs。在此条件下，提取供试液中芍药甙得到良好分离，色谱图见图1所示。
图1 高效液相色谱分离图
2.5 结果分析
由表2中R值可见，各因素对提取工艺的影响大小分别为D>B>A。表3的方差分析结果表明，提取次数的多少对柴胡止血液的浸膏收得率和芍药甙含量的影响具有高度统计学意义，而加水量和煎煮时间对提取工艺的影响不大。考虑从生产实际出发，提取工艺优化为煎煮提取3次，每次加10倍量水，煎煮时间1.5h。
表3 方差分析表 方差来源
, 百拇医药
离均差平方和
自由度
方差
F
P
A
SSA=30.69
2
15.345
2.94
>0.01
B
SSB=76.93
, http://www.100md.com
2
38.465
7.37
<0.01
D
SSD=976.64
2
488.32
93.55
<0.005
Se
SSC=57.41
11
, 百拇医药
5.22
注：F1-0.005(2，11)=8.91；F-0.01(2，11)=7.21
2.6 验证实验
按上述确定的提取工艺条件，重复3次实验以验证该工艺的合理性与稳定性。结果见表4。
表4 验证实验结果 次号
考察指标
浸膏收得率(%)
芍药甙含量(%)
1
29.20
, 百拇医药 0.1814
2
29.18
0.1767
3
29.21
0.1845
3 讨论
实验采用综合评分方法，以浸膏收得率最大值和芍药甙含量最大值各占50分进行评判，选出最佳工艺条件，按此工艺条件进行实验，所制口服液指标成分含量高，稳定性良好，经临床验证，疗效确切。
基金项目：四川省教委重点科研项目
作者简介：向永臣，男，1951年月2生；实验师；中药制剂专业；研究方向：中药剂型的实验技术研究。
参考文献
1 中华人民共和国卫生部.新药审批办法.
2 张宁，贾桂芝，于鹤丹，等.正交试验法优选参白口服液的最佳生产工艺.中成药，1996，(3)：3
(收稿日期：1998-12-20), http://www.100md.com
单位：成都中医药大学，四川 成都 610075
关键词：柴胡止血液；正交试验法；提取工艺；中药制剂
成都中医药大学学报990227 摘 要： 采用正交试验优选了柴胡止血液的最佳提取工艺条件。以浸膏收得率最大值和芍药甙含量为综合评判指标，考察了影响提取效果的加水量、煎煮时间及煎煮次数3个因素，每个因素选取3个水平进行实验。结果表明：该口服液最佳提取工艺条件为加水量10倍，煎煮时间为1.5h，煎煮提取次数为3次。所制口服液指标成分含量高，稳定性良好，经临床验证，疗效确切。
中图分类号：R943 文献标识码：B 文章编号：1004-0668(1999)02-0053-03
柴胡止血液由柴胡、白芍、茜草等中药组成，为了更好地保证质量，扩大和方便临床使用，拟将本品研制开发成为三类复方新制剂[1]。我们采用正交试验优选了该口服液的最佳提取工艺条件。
, http://www.100md.com
1 试验材料
试验所用中药材均购自成都市中药材分司；芍药甙对照品由中国药品生物制品检定所提供；所用试剂均为分析纯。
LC-6A高效液相色谱仪(日本岛津公司)；SPD-6AV紫外检测器；C-R3A数据处理器；CTO-6A柱温箱。
2 方法与结果
2.1 正交设计[2]
根据预试实验结果，选定加水量，煎煮提取时间及次数作为考察因素，以浸膏收得率和芍药甙含量作为考察指标，选用L9(34)正交表进行实验，因素水平安排见表1。
表1 试验因素水平表 水平
, 百拇医药 因 素
A(加水量倍数)
B(煎煮时间h)
D(煎煮次数)
1
8
1
1
2
10
1.5
2
3
, 百拇医药 12
2
3
2.2 实验方法
按实验设计方案要求称取处方量饮片64.5g，分别按表2的条件进行提取，提取液适当浓缩定容至100mL，得供试液，分别测定浸膏收得率和芍药甙含量，方法如下，结果见表2。表2 正交试验表及结果 因素
试验号
A
1
B
2
C
, 百拇医药
3
D
4
浸膏收得率
y(%)
芍药甙含量
z(%)
综合评分
yz
1
1
1
1
1
, 百拇医药
17.70
0.1209
61.38
2
1
2
2
2
23.25
0.1442
76.65
3
1
, 百拇医药
3
3
3
30.94
0.1380
87.40
4
2
1
2
3
28.75
0.1395
, http://www.100md.com 84.28
5
2
2
3
1
18.99
0.1194
63.04
6
2
3
1
2
, http://www.100md.com
28.53
0.1380
83.5
7
3
1
3
2
23.77
0.1302
73.71
8
3
, 百拇医药
2
1
3
29.21
0.1845
97.20
9
3
3
2
1
21.54
0.1225
, http://www.100md.com 68
Ⅰ；
225.43
219.37
242.08
192.42
Ⅱ；
230.82
236.89
228.93
233.36
Ⅲ；
238.91
, 百拇医药
238.9
224.15
268.88
Ⅰ；
75.14
73.12
80.69
64.14
Ⅱ；
76.94
78.96
76.31
77.95
, 百拇医药
Ⅲ；
79.64
79.63
74.72
89.63
R
4.5
6.51
5.97
25.49
R；
161174.55
161313.28
, 百拇医药
161254.90
164012.41
SS；
30.69
76.93
57.47
976.64
2.3 浸膏收得率测定方法
精密量取上述提取供试液20.0mL，倾入已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，移入105℃烘箱中干燥3h，取出，置于干燥器中冷却0.5h后，取出，立即称重。计算浸膏收得率。
2.4 芍药甙含量测定
, 百拇医药
采用高效液相色谱法测定，色谱条件：天津凯德C18柱(200mm×4mm，5μm)，检测波长230nm，流动相：甲醇-水-36%醋酸(30∶70∶1.5)，流速度：0.5mVmin，量程0.02aufs。在此条件下，提取供试液中芍药甙得到良好分离，色谱图见图1所示。
图1 高效液相色谱分离图
2.5 结果分析
由表2中R值可见，各因素对提取工艺的影响大小分别为D>B>A。表3的方差分析结果表明，提取次数的多少对柴胡止血液的浸膏收得率和芍药甙含量的影响具有高度统计学意义，而加水量和煎煮时间对提取工艺的影响不大。考虑从生产实际出发，提取工艺优化为煎煮提取3次，每次加10倍量水，煎煮时间1.5h。
表3 方差分析表 方差来源
, 百拇医药
离均差平方和
自由度
方差
F
P
A
SSA=30.69
2
15.345
2.94
>0.01
B
SSB=76.93
, http://www.100md.com
2
38.465
7.37
<0.01
D
SSD=976.64
2
488.32
93.55
<0.005
Se
SSC=57.41
11
, 百拇医药
5.22
注：F1-0.005(2，11)=8.91；F-0.01(2，11)=7.21
2.6 验证实验
按上述确定的提取工艺条件，重复3次实验以验证该工艺的合理性与稳定性。结果见表4。
表4 验证实验结果 次号
考察指标
浸膏收得率(%)
芍药甙含量(%)
1
29.20
, 百拇医药 0.1814
2
29.18
0.1767
3
29.21
0.1845
3 讨论
实验采用综合评分方法，以浸膏收得率最大值和芍药甙含量最大值各占50分进行评判，选出最佳工艺条件，按此工艺条件进行实验，所制口服液指标成分含量高，稳定性良好，经临床验证，疗效确切。
基金项目：四川省教委重点科研项目
作者简介：向永臣，男，1951年月2生；实验师；中药制剂专业；研究方向：中药剂型的实验技术研究。
参考文献
1 中华人民共和国卫生部.新药审批办法.
2 张宁，贾桂芝，于鹤丹，等.正交试验法优选参白口服液的最佳生产工艺.中成药，1996，(3)：3
(收稿日期：1998-12-20), http://www.100md.com