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编号:10252419
针刺调整消化上皮细胞有丝分裂指数倒相节律的研究
http://www.100md.com 《中国中医基础医学杂志》 1999年第2期
     作者:邹 军 罗永芬 宋开源 张家维 赖新生

    单位:邹 军 张家维 赖新生(广州中医药大学 广州 510507);罗永芬 宋开源(成都中医药大学 成都 610075)

    关键词:急性时间相位转移;针刺作用;消化系统;昼夜节律;足三里

    摘 要 目的 在中医理论及现代时间医学的指导下 摘 要 目的 在中医理论及现代时间医学的指导下,探讨针刺作用机理的时间影响。方法 对实用性大鼠空肠隐窝上皮细胞及舌粘膜上皮细胞的有丝分裂指数(MI)的昼夜节律进行了观察,并针刺足三里穴作对比研究。结果表明 二者皆有典型的昼夜节律,实验性大鼠塑造成急性时间相位转移模型(昼夜颠倒)则使上述节律发生倒相,针刺足三里可使其倒相节律加快恢复。结论 急性时间相位转移对消化系统节律的影响提供了客观依据,证实了针刺对消化系统部分失常节律的调整作用。

    THE EXPERIMENTAL INVESTIGATION ABOUT REGULATING FUNCTION OF ACUPUNCTURE AT INVERSE RHYTHM OF MITOTIC INDEX OF DIGESTIVE EPITHELIUM
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    Zou Jun

    (Guangzhou University of Traditional Chinese medicine 510407)

    Abstrct:In order to explore the regulating function of acupuncture at the rhythm of digestive system,we observed circadian changes of mitotic index of digestive epithelium of the tongue and crypt cells of the jejunum in experimental rats, and we also acupuncture ZhuSanLi (S36) as the control text.It was found that both of them had circadian variations, these circadian variations could be changed to inversion of rhythm by the acute phase shift, puncturing Zhusanli (S36) could accelerate the inverse rhythm to recover to the lfevel of the control-animal.This study gave some basis about the affects of acute phase shift on the rhythms of digestive system,and the regulating fuction of acupuncture on the some abnormal rhythms of digestive system was testified.
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    Key words: acute phase shift regulating function of acupuncture digestive system circadian variation Zhusanli(S36)

    本实验在中医时间医学理论指导下,用现代时间生物学和现代时间医学方法,以消化上皮细胞(舌粘膜及空肠隐窝)的有丝分裂指数(MI)为指标,并用先进的余弦方法对节律进行分析,研究观察了其在正常生理状态下的节律,急性时间相位转移(昼夜颠倒)后节律的倒相及针刺对其恢复调整作用。目的在于为针灸防治诸如时差飞行与轮班等所导致消化系统节律紊乱而引起消化系统病证提供部分实验依据。

    材料与方法

    1 急性时间相位转移大鼠模型的塑造及针刺方法

    实验性动物造模用Wister大鼠96只,雌雄各半,体重180g±30g,在25℃±1℃,光暗周期12 :12(7AM~7PM光照,7pm~7Am黑暗),隔音条件下驯化,自由饮水进食,驯化10天后,随机分组(如表1)。
, 百拇医药
    表1 实验分组(单位:只)

    组别

    午时(13:00)

    酉时(19:00)

    子时(01:00)

    卯时(07:00)

    对照组

    6

    6

    6

    6

    倒相组

    6
, 百拇医药
    6

    6

    6

    针刺组

    6

    6

    6

    6

    自然恢复组

    6

    6

    6

    6

    驯化期结束后即开始塑造“急性时相转移”模型。造模对象:倒相组、自然恢复组、针刺组。方法是:
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    1.1 在造模型前各组选6只动物,分别于午、酉、子、卯四个时辰测定其肛肠温度,经余弦法处理后,得其节律峰值均在24:00左右。

    1.2 模拟倒相(昼夜颠倒)光暗周期,将倒相组、自然恢复组、针刺组动物置于7:00~19:00黑暗、19:00~7:00光照条件下造模。造模6天后,又选取各组6只动物,每日按上法测定其肛肠温度,至第11天其肛温节律发生倒相,峰值改为在12:00左右。

    1.3 造模第12天,倒相组仍保持7:00~19:00黑暗,19:00~7:00光照的造模光暗周期;而将自然恢复组和针刺组动物的光照周期又恢复至造模前,即7:00~19:00光照,19:00~7:00黑暗。针刺组大鼠每日19:00左右针刺双侧足三里穴,用平补平泻法,留针30分钟。在第16天又开始每日以上法测自然恢复组及针刺组大鼠的肛温,在第19天时,针刺组肛温节律恢复到造模前水平,峰值又在24:00左右,而自然恢复组肛温节律只基本恢复。
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    处死检测 造膜第20天处死动物。处死前1小时,每只大鼠皮下注射硫酸长春新碱1mg/kg,30min注完[3]。每个时辰均按对照组1只→倒相组1只→自然恢复组1只→针刺组1只的顺序,每隔10min平行断头处死4只大鼠,取舌(体前1/3背)及空肠(距幽门约15cm~20cm)分别固定于20%福尔马林液内,常规石腊包埋,切片厚4μ,HE染色,光镜下(×400)计数,每只动物至少50个空肠隐窝腺管(横切面为主)内上皮细胞总数及其中的核分裂相细胞数,算出后者所占的百分比(即有丝裂指数MI);舌粘膜上皮细胞MI为每只动物1000个基底层细胞中的有丝分裂细胞数。结果与分析

    1 舌粘膜上皮细胞MI

    表2显示,对照组舌粘膜上皮细胞MI有近似昼夜节律变化,均数在卯时最高,酉时最低,二者有显著性差异(07A与19A比较:P<0.02)。倒相组则与其相反,均数卯时最低,酉时最高,也有显著性差异(07B与19B比较:P<0.05),针刺组、自然恢复组均数最高值、最低值又恢复到对照组水平,即卯时最高,酉时最低,针刺组最高值与最低值有显著性差异(07C与19比较:P<0.05);自然恢复组最高值与最低值有极显著性差异(07D与19D比较:P<0.01)。
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    表2 各组舌粘膜上皮细胞MI(xx1.gif (881 bytes)±s)

    组 别

    午时(13:00)

    酉时(19:00)

    子时(01:00)

    卯时(07:00)

    对照组(A)

    11.26±5.42

    6.31±2.51

, http://www.100md.com     6.90±3.04

    12.18±3.15

    倒相组(B)

    6.87±4.02

    12.11±3.74

    10.92±3.85

    6.27±2.36

    针刺组(C)

    9.16±5.34

    6.38±2.71

    7.02±3.82

    11.97±3.53
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    自 然

    9.04±3.65

    6.29±3.63

    6.87±4.87

    13.94±2.22

    恢复组(D)

    注:07A与19A比较:P<0.02;07B与19B比较:P<0.05;07C与19C比较:P<0.05;07D与19D比较:P<0.01。

    经余弦法处理,求出的节律参数表明,各组舌粘膜上皮细胞MI均呈典型的昼夜节律变化,对照组的峰相位-133.099,即在8:00左右细胞MI最高;倒相组峰相位则颠转了180多度,为-305.134(20:00)。针刺组峰相位已基本回复到对照水平,为-109.276(7:00);而自然恢复组峰相位尚在-97.2922(6:00)(表3)。
, 百拇医药
    表3 各组舌粘膜上皮细胞MI单个余弦法节律分析程序结果表

    组别

    n

    观察

    次数

    PR

    P

    中值SD

    振幅(95%CL)

    峰相位(95%CL)

    对照组

    6

    24
, 百拇医药
    45.46573

    0.0017180

    9.14625±1.26

    3.60466(1.33697,5.87292)

    -113.099 (-167.098,-89.1001)

    倒相组

    6

    24

    34.82589

    0.0111632

    8.99166±1.52
, 百拇医药
    3.46658(0.74167,6.19153)

    -305.134 (-356.953,-253.316)

    针刺组

    6

    24

    30.52528

    0.0218364

    8.505±1.44

    2.97602(0.39642,5.55583)

    -109.276 (-169.371,-49.1807)

    自 然
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    6

    24

    42.12057

    0.0032099

    8.90208±1.34

    3.57139(1.16589,5.97696)

    - 97.2922(-139.632,-54.9489)

    恢复组

    注:参考相位:360°=24小时,0000=0°。

    2 空肠隐窝上皮细胞MI

    表4表明 对照组空肠隐窝上皮细胞MI有近似昼夜节律变化,均数在子时最高,午时最低,有极显著性差异(01A与13A比较:P<0.01);倒相组则与其相反,午时最高,子时最低,也有极显著性差异(01B与13B比较:P<0.01)。针刺组、自然恢复组最高值与最低值又回复到对照组水平,即子时最高,午时最低,针刺组有极显著性差异(01C与13C比较:P<0.01),自然恢复组有显著性差异(01D与13D比较:P<0.05)。
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    表4 各组空肠隐窝上皮细胞MI(xx1.gif (881 bytes)±s)

    组 别

    午时(13:00)

    酉时(19:00)

    子时(01:00)

    卯时(07:00)

    对照组(A)

    5.01±1.74

    6.43±1.13

, 百拇医药     9.11±1.51

    7.03±1.06

    倒相组(B)

    9.31±1.58

    7.66±0.95

    5.56±1.91

    6.72±1.32

    针刺组(C)

    5.29±1.74

    6.74±1.02

    9.60±1.89

    7.19±1.25
, 百拇医药
    自 然

    5.33±1.15

    7.68±1.24

    8.58±1.48

    6.65±1.12

    恢复组(D)

    注:01A与13A比较:01B与13B比较:01C与13C比较:P均<0.01;01D与13D比较:P<0.05。

    经余弦法处理,求出的节律参数表明,各组空肠隐窝上皮细胞MI均呈典型的昼夜节律变化。对照组的峰相位在-18.2489,即在清晨1:00左右细胞MI最高;倒相组的峰相位则颠转了180多度,在-203.4364(13:00)。针刺组峰相位已回复到对照组水平,为-16.5341(1:00),而自然恢复组峰相位尚在-318.8976(21:00)(表5)。
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    表5 各组空肠隐窝上皮细胞MI单个余弦法节律分析程序结果表

    组别

    n

    观察

    次数

    PR

    P

    中值SE

    振幅(95%CL)

    峰相位(95%CL)

    对照组

    6

    24
, 百拇医药
    46.66327

    0.0047139

    7.18541±1.49

    1.54271(0.83540,2.03827)

    - 18.2489(-331.3368, 71.3642)

    倒相组

    6

    24

    54.72451

    0.0039523

    7.02708±0.97
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    1.24125(0.61253,1.82441)

    -203.4364( 251.6132, 158.4675)

    针刺组

    6

    24

    81.63577

    <0.001

    7.25253±1.26

    1.48742(0.93634,1.90235)

    - 16.5341(-347.2573,- 43.7168)

, 百拇医药     自 然

    6

    24

    62.34658

    <0.001

    7.01646±1.14

    1.26865(0.63436,1.84786)

    -318.8796(- 50.8796, 281.3359)

    恢复组

    注:参考相位:360°=24小时,0000=0。讨论

    细胞的分裂是细胞增殖的方式。细胞所经历的一个完整的有丝分裂及相随分裂间期,称细胞周期,分为分裂期和间期。分裂期旨在将间期中倍增的遗传物质(DNA)形成染色体平均分配至两个子细胞。分裂期又分有丝分裂和无丝分裂,高等动物以有丝分裂为主,故本实验以有分裂指数(MI)来探讨实验性大鼠的组织器官的更新节律及针刺对其调节作用。
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    小肠粘膜上皮细胞的更新是维持粘膜完整性,从而保障消化、吸收功能正常进行的关键。中医学认为:“大肠主津,小肠主液,大肠、小肠受胃之营气,乃能行津液于上焦,灌溉皮毛,充实腠理,若饮食不节,大肠、小肠无所禀受,故津液涸。”说明脾胃与肠关系密切。舌为脾胃之外候,苔乃胃气之所熏蒸,“足太阴之脉,……连舌本,散舌下”,故脾胃与舌是密切相关的。现代医学认为舌苔形成的主要基础是舌上皮不断分裂、增殖、分化、迁移和角化脱落所致,因此舌粘膜上皮细胞的更新对舌苔形成具有重要意义。

    空肠隐窝及舌粘膜上皮细胞的更新与消化系统功能和代谢密切相关。本实验显示,对照组舌粘膜上皮细胞MI及空肠隐窝上皮细胞MI均有典型的昼夜节律,倒相组均数最高值、最低值及峰相位均发生颠转。针刺组与自然恢复组的节律均向对照组恢复,但针刺组恢复较好,其峰相位皆已基本回复;而舌粘膜上皮细胞自然恢复组的MI峰相位与对照组相比仍差16度(1小时左右),空肠隐窝上皮细胞自然恢复组的MI峰相位与对照相比仍差60度(4小时)。表明针刺可使二者倒相节律加快恢复。
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    研究表明,视交叉上核(SCN)、丘下部腹内侧核(VMH)、促肾上腺皮质激素(CRH)、肾上腺皮质激素之间存在着相互联系、相互制约作用,它们共同对胃肠道的运动的分泌进行调控,正常情况下它们的活动和分泌都呈昼夜节律状态,它们之间保持了稳定同步关系,消化系统功能才会出现正常的节律变化,也会才有严格定时的预期反应出现,以保证消化功能活动正常进行[2]。急性时间相位转移(昼夜颠倒)干扰体内的各种节律,将引起SCN、丘脑下部、垂体肾上腺皮质等或能活动节律发生改变,对消化道功能活动调控也受到影响,导致消化道节律的倒相。

    针刺可使倒相后消化系统节律加快恢复,可能是通过了上述调控机制,其作用环节尚待进一步研究。但其作用机理可能与针刺具有双向调节作用有关,使各时刻相对于正常节律来说偏高偏低的值回复,最终促使整个节律的恢复。

    作者简介:邹军,男,29岁,广州中医药大学针灸博士生。地址:广州中医药大学博97级,邮编:510407。

    参考文献

    [1] Holt Pr, et al. Small intestinal cryrt cell proliferation rats are increased in sensescent rat. J Gerontol, 1989; 44:9

    [2] 何绍雄,等.时间药理学与时间治疗学.天津:天津科技出版社,1994:353, 百拇医药