胆囊病变时bcl-2和p16蛋白产物的表达和意义
作者：曾思务 刘 雨 梁粉花 张军喜
单位：山东省日照市人民医院(日照 276800)
关键词：免疫组化；胆囊腺癌；异型增生；抗凋亡基因bcl-2；肿瘤抑制基因p16
中国普外基础与临床杂志990209 摘要 对25例胆囊粘膜异型增生和40例胆囊腺癌标本用免疫组化方法观察bcl-2和p16蛋白的表达，并与正常胆囊粘膜比较。结果：在正常胆囊粘膜中均未见bcl-2和p16表达，而胆囊粘膜上皮异型增生及胆囊腺癌组织中，两者的表达阳性率较正常组织明显增高(P<0.01)，且bcl-2和p16蛋白的阳性率随着异型增生程度的增高而增加；p16的表达还与胆囊腺癌之浸润程度及淋巴结转移有关。本实验结果提示：bcl-2及p16蛋白表达在胆囊腺癌和胆囊粘膜异型增生中起了一定作用；p16可作为胆囊癌患者的一个预后指标。
EXPRESSION OF BCL-2 AND P16 PROTEIN AND THEIR SIGNIFICANCE IN GALLBLADDER BENIGN AND MALIGNANT LESION
, 百拇医药
Zeng Siwu, Liu Yu, Liang Fenhua, et al.
Rizhao City People's Hospital of Shandong Privince, Rizhao 276800
Abstract The expression of bcl-2 and p16 in 25 cases of gallbladder mucosa hyperplasia, 40 cases of gallbladder carcinoma and 25 adjacent normal gallbladder mucosa tissue was detected with immunohistochemical staining. Normal gallbladder mucosa was uniformly negative. Bcl-2 and p16 positive rate were significantly higher in hyperplasia and carcinoma than in normal tissue (P<0.01). Expression of bcl-2 and p16 got higher with the increasing degree of hyperplasia, p16 was associated with lymph node metastasis and depth of invasion of carcinoma of the gallbladder. The results suggest that bcl-2 and p16 expression play an important role in tumorigenesis, p16 can be used as a prognostic index for gallbladder carcinoma.
, 百拇医药
Key words Immunohistochemistry Gallbladder Tumor Hyperplasia P16 protein Bcl-2 protein
国内外大量研究显示，肿瘤的发生、发展及预后不仅与某些癌基因的活化和抗癌基因的丢失有关，还与细胞凋亡被抑制有关。参与细胞凋亡调节的癌基因主要是bcl-2和抑癌基因p16，这些基因的异常表达与肿瘤的发生和增殖密切相关〔1〕。我们应用免疫组织化学标记法对胆囊良、恶性病变组织中bcl-2和p16的表达进行观察，以探讨其临床意义。
1 对象和方法
1.1 研究对象
选择我院1983年至1997年11月行手术治疗的胆囊良、恶性病变患者，并均经病理诊断证实。其中胆囊癌40例，之中高分化腺癌19例，低分化腺癌8例，未分化癌8例和粘液腺癌5例；胆囊粘膜上皮异型增生25例，其中轻度增生9例，中度增生6例，重度增生10例。同时选择异型增生上皮旁的正常胆囊粘膜25例作为对照。胆囊癌患者有完整随访资料，男26例，女14例。所有标本均经10%甲醛固定，常规石蜡包埋，切片厚度4μm。
, 百拇医药
1.2 免疫组化染色
采用免疫组化ABC法，标记试剂抗bcl-2单抗(bcl-2， 124)为丹麦Dako公司产品，抗p16蛋白多克隆抗体为美国Santa Cruz Biotechnology公司产品；工作浓度分别为1∶100和1∶50。ABC试剂盒为美国Vector公司产品，切片先经微波修复抗原后再按常规ABC法进行，阳性对照为已知bcl-2和p16阴性前列腺癌标本，用TBS替代一抗作为空白对照。免疫酶标结果判断，每例随机取200个细胞，其阳性细胞所占百分率<30%为(+)，30%～70%为(++)，>70%为(+++)。统计学分析采用秩和检验和χ2检验。
2 结果
2.1 bcl-2及p16在胆囊良、恶性病变组织中的表达
正常胆囊粘膜、胆囊粘膜异型增生以及胆囊腺癌组织中bcl-2和p16的表达情况见表1。从表1中可见，40例胆囊腺癌组织中，bcl-2表达阳性者34例，其阳性率为85.0%，且多为中阳性和强阳性； p16表达阳性者27例，其阳性率为67.5%，且两者之表达在分化越差的肿瘤，其阳性率越高。在胆囊粘膜异型增生之25例中，bcl-2表达阳性者20例，其阳性率为80.0%；p16表达阳性者15例，其阳性率为60.0%，两者之表达在轻度异型增生者多为弱阳性，而在中、重度异型增生者中多为中阳性和强阳性，并随异型增生级别加重，两者表达之阳性率增加。在25例正常胆囊粘膜中，bcl-2及p16表达均呈阴性。经统计学处理，胆囊腺癌和胆囊粘膜上皮异型增生者之bcl-2及p16表达阳性率明显高于正常者(P<0.01)，而前两者间比较则无显著性差异。
, 百拇医药
表1 正常胆囊粘膜、胆囊粘膜异型增生及胆囊腺癌中bcl-2和p16的表达 组织学类型
例数
bcl-2表达
p16表达
(+)
(++)
(+++)
阳性率(%)
(+)
(++)
(+++)
阳性率(%)
, 百拇医药
正常胆囊粘膜
25
0
0
0
0.0
0
0
0
0.0
胆囊粘膜异型增生
25
4
6
, 百拇医药
10
80.0
3
5
7
60.0
轻度
9
2
2
1
55.6
2
1
, 百拇医药
0
33.3
中度
6
0
2
3
83.3
0
1
3
50.0
重度
10
, 百拇医药
2
2
6
100.0
1
3
4
80.0
胆囊腺癌
40
9
11
14
85.0
, 百拇医药
5
11
11
67.5
高分化腺癌
19
5
5
5
78.9
2
6
3
57.9
, http://www.100md.com
低分化腺癌
8
2
2
3
87.5
1
2
3
75.0
未分化癌
8
2
2
, 百拇医药
4
100.0
1
2
4
87.5
粘液腺癌
5
0
2
2
80.0
1
1
, 百拇医药
1
75.0
2.2 bcl-2和p16的表达与胆囊腺癌临床病理学特征的关系
bcl-2和p16蛋白与胆囊腺癌临床病理学特征之关系见表2。bcl-2的表达与胆囊腺癌之淋巴结转移和是否浸润浆膜无明显关系(P>0.05)。p16之表达与肿瘤的浸润程度呈正相关(r＝0.48)，也与胆囊癌有无淋巴结转移有显著相关性(r＝0.69)，即p16表达阳性之肿瘤的淋巴结转移率明显高于p16表达阴性者(P<0.01)。
表2 bcl-2和p16蛋白表达与胆囊腺癌淋巴结转移、浸润浆膜的关系
例数
bcl-2表达
p16表达
, 百拇医药
阳性例数
百分率(%)
阳性例数
百分率(%)
淋巴结转移阳性
21
18
85.7
19
90.5
淋巴结转移阴性
19
16
, http://www.100md.com
84.2
9
47.4
浸润浆膜
25
13
52.0
19
76.0
未浸润浆膜
15
9
60.0
, 百拇医药
7
46.7
3 讨论
肿瘤的发生被认为是由于细胞凋亡与细胞增殖平衡的失调所致，近年来研究表明bcl-2蛋白是拮抗细胞凋亡的基因，它是由于14/18染色体易位使bcl-2基因与免疫球蛋白重链位点并列，导致基因的连续过度表达的产物〔1～3〕。本研究结果表明，正常胆囊粘膜上皮未见bcl-2单抗免疫染色阳性反应的细胞，而胆囊粘膜异型增生和胆囊腺癌的bcl-2阳性反应细胞均明显增加，但后两者之间bcl-2表达无显著区别。在异型增生中，随着异型增生程度的增加，bcl-2表达也逐渐上升，提示胆囊粘膜异型增生程度加重，其抑制细胞凋亡的作用增强。bcl-2的表达与胆囊腺癌浸润程度及淋巴结转移无关，提示随着疾病的进一步发展，bcl-2基因可能又受到许多调控的影响，已不起主要作用。这与其它肿瘤的研究结果相类似〔4〕。
, 百拇医药
本研究对胆囊良、恶性病变组织中p16蛋白的表达进行了检测，发现其表达不仅与胆囊腺癌的组织学类型分级显著相关，而且与肿瘤的浸润深度以及淋巴结有无转移有显著的相关性。在正常胆囊粘膜中未见p16表达，但在胆囊粘膜异型增生以及胆囊腺癌组织中均呈过度表达，其阳性率随异型增生程度的增加而增高，也随胆囊腺癌分化程度的降低而升高。本实验结果提示，癌基因bcl-2和抑癌基因p16参与了细胞凋亡的调节，在肿瘤的发生、发展中起重要作用； p16蛋白的表达可作为预测胆囊癌患者预后的重要指标之一。
参 考 文 献
1 Caulard P, Agay MF, Peuchmaur M, et al. Expression of bcl-2 gene product in follicular lymphoma. Am J Pathol, 1991; 140(11)∶1089
2 Pezzella F, Tse AG, Cordell JL, et al. Expression of the bcl-2 oncogene protein is not specific for the 14∶18 chromosomal translocation. Am J Pathol, 1990; 137(3)∶225
3 Koich E, Masshiro K, Shinichi K, et al. Amplifited bcl-2 rearrangements in reactive lymphadenopathy. Virchows Archiv (Cell Pathol), 1992; 63(2)∶197
4 生秀杰，宋和存，何秀琴. 抗凋亡基因bcl-2在子宫内膜癌的表达和意义. 中华肿瘤杂志， 1998； 20(5)∶365
(1998-01-28收稿，1999-01-11修回), http://www.100md.com
单位：山东省日照市人民医院(日照 276800)
关键词：免疫组化；胆囊腺癌；异型增生；抗凋亡基因bcl-2；肿瘤抑制基因p16
中国普外基础与临床杂志990209 摘要 对25例胆囊粘膜异型增生和40例胆囊腺癌标本用免疫组化方法观察bcl-2和p16蛋白的表达，并与正常胆囊粘膜比较。结果：在正常胆囊粘膜中均未见bcl-2和p16表达，而胆囊粘膜上皮异型增生及胆囊腺癌组织中，两者的表达阳性率较正常组织明显增高(P<0.01)，且bcl-2和p16蛋白的阳性率随着异型增生程度的增高而增加；p16的表达还与胆囊腺癌之浸润程度及淋巴结转移有关。本实验结果提示：bcl-2及p16蛋白表达在胆囊腺癌和胆囊粘膜异型增生中起了一定作用；p16可作为胆囊癌患者的一个预后指标。
EXPRESSION OF BCL-2 AND P16 PROTEIN AND THEIR SIGNIFICANCE IN GALLBLADDER BENIGN AND MALIGNANT LESION
, 百拇医药
Zeng Siwu, Liu Yu, Liang Fenhua, et al.
Rizhao City People's Hospital of Shandong Privince, Rizhao 276800
Abstract The expression of bcl-2 and p16 in 25 cases of gallbladder mucosa hyperplasia, 40 cases of gallbladder carcinoma and 25 adjacent normal gallbladder mucosa tissue was detected with immunohistochemical staining. Normal gallbladder mucosa was uniformly negative. Bcl-2 and p16 positive rate were significantly higher in hyperplasia and carcinoma than in normal tissue (P<0.01). Expression of bcl-2 and p16 got higher with the increasing degree of hyperplasia, p16 was associated with lymph node metastasis and depth of invasion of carcinoma of the gallbladder. The results suggest that bcl-2 and p16 expression play an important role in tumorigenesis, p16 can be used as a prognostic index for gallbladder carcinoma.
, 百拇医药
Key words Immunohistochemistry Gallbladder Tumor Hyperplasia P16 protein Bcl-2 protein
国内外大量研究显示，肿瘤的发生、发展及预后不仅与某些癌基因的活化和抗癌基因的丢失有关，还与细胞凋亡被抑制有关。参与细胞凋亡调节的癌基因主要是bcl-2和抑癌基因p16，这些基因的异常表达与肿瘤的发生和增殖密切相关〔1〕。我们应用免疫组织化学标记法对胆囊良、恶性病变组织中bcl-2和p16的表达进行观察，以探讨其临床意义。
1 对象和方法
1.1 研究对象
选择我院1983年至1997年11月行手术治疗的胆囊良、恶性病变患者，并均经病理诊断证实。其中胆囊癌40例，之中高分化腺癌19例，低分化腺癌8例，未分化癌8例和粘液腺癌5例；胆囊粘膜上皮异型增生25例，其中轻度增生9例，中度增生6例，重度增生10例。同时选择异型增生上皮旁的正常胆囊粘膜25例作为对照。胆囊癌患者有完整随访资料，男26例，女14例。所有标本均经10%甲醛固定，常规石蜡包埋，切片厚度4μm。
, 百拇医药
1.2 免疫组化染色
采用免疫组化ABC法，标记试剂抗bcl-2单抗(bcl-2， 124)为丹麦Dako公司产品，抗p16蛋白多克隆抗体为美国Santa Cruz Biotechnology公司产品；工作浓度分别为1∶100和1∶50。ABC试剂盒为美国Vector公司产品，切片先经微波修复抗原后再按常规ABC法进行，阳性对照为已知bcl-2和p16阴性前列腺癌标本，用TBS替代一抗作为空白对照。免疫酶标结果判断，每例随机取200个细胞，其阳性细胞所占百分率<30%为(+)，30%～70%为(++)，>70%为(+++)。统计学分析采用秩和检验和χ2检验。
2 结果
2.1 bcl-2及p16在胆囊良、恶性病变组织中的表达
正常胆囊粘膜、胆囊粘膜异型增生以及胆囊腺癌组织中bcl-2和p16的表达情况见表1。从表1中可见，40例胆囊腺癌组织中，bcl-2表达阳性者34例，其阳性率为85.0%，且多为中阳性和强阳性； p16表达阳性者27例，其阳性率为67.5%，且两者之表达在分化越差的肿瘤，其阳性率越高。在胆囊粘膜异型增生之25例中，bcl-2表达阳性者20例，其阳性率为80.0%；p16表达阳性者15例，其阳性率为60.0%，两者之表达在轻度异型增生者多为弱阳性，而在中、重度异型增生者中多为中阳性和强阳性，并随异型增生级别加重，两者表达之阳性率增加。在25例正常胆囊粘膜中，bcl-2及p16表达均呈阴性。经统计学处理，胆囊腺癌和胆囊粘膜上皮异型增生者之bcl-2及p16表达阳性率明显高于正常者(P<0.01)，而前两者间比较则无显著性差异。
, 百拇医药
表1 正常胆囊粘膜、胆囊粘膜异型增生及胆囊腺癌中bcl-2和p16的表达 组织学类型
例数
bcl-2表达
p16表达
(+)
(++)
(+++)
阳性率(%)
(+)
(++)
(+++)
阳性率(%)
, 百拇医药
正常胆囊粘膜
25
0
0
0
0.0
0
0
0
0.0
胆囊粘膜异型增生
25
4
6
, 百拇医药
10
80.0
3
5
7
60.0
轻度
9
2
2
1
55.6
2
1
, 百拇医药
0
33.3
中度
6
0
2
3
83.3
0
1
3
50.0
重度
10
, 百拇医药
2
2
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100.0
1
3
4
80.0
胆囊腺癌
40
9
11
14
85.0
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5
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67.5
高分化腺癌
19
5
5
5
78.9
2
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57.9
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低分化腺癌
8
2
2
3
87.5
1
2
3
75.0
未分化癌
8
2
2
, 百拇医药
4
100.0
1
2
4
87.5
粘液腺癌
5
0
2
2
80.0
1
1
, 百拇医药
1
75.0
2.2 bcl-2和p16的表达与胆囊腺癌临床病理学特征的关系
bcl-2和p16蛋白与胆囊腺癌临床病理学特征之关系见表2。bcl-2的表达与胆囊腺癌之淋巴结转移和是否浸润浆膜无明显关系(P>0.05)。p16之表达与肿瘤的浸润程度呈正相关(r＝0.48)，也与胆囊癌有无淋巴结转移有显著相关性(r＝0.69)，即p16表达阳性之肿瘤的淋巴结转移率明显高于p16表达阴性者(P<0.01)。
表2 bcl-2和p16蛋白表达与胆囊腺癌淋巴结转移、浸润浆膜的关系
例数
bcl-2表达
p16表达
, 百拇医药
阳性例数
百分率(%)
阳性例数
百分率(%)
淋巴结转移阳性
21
18
85.7
19
90.5
淋巴结转移阴性
19
16
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84.2
9
47.4
浸润浆膜
25
13
52.0
19
76.0
未浸润浆膜
15
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60.0
, 百拇医药
7
46.7
3 讨论
肿瘤的发生被认为是由于细胞凋亡与细胞增殖平衡的失调所致，近年来研究表明bcl-2蛋白是拮抗细胞凋亡的基因，它是由于14/18染色体易位使bcl-2基因与免疫球蛋白重链位点并列，导致基因的连续过度表达的产物〔1～3〕。本研究结果表明，正常胆囊粘膜上皮未见bcl-2单抗免疫染色阳性反应的细胞，而胆囊粘膜异型增生和胆囊腺癌的bcl-2阳性反应细胞均明显增加，但后两者之间bcl-2表达无显著区别。在异型增生中，随着异型增生程度的增加，bcl-2表达也逐渐上升，提示胆囊粘膜异型增生程度加重，其抑制细胞凋亡的作用增强。bcl-2的表达与胆囊腺癌浸润程度及淋巴结转移无关，提示随着疾病的进一步发展，bcl-2基因可能又受到许多调控的影响，已不起主要作用。这与其它肿瘤的研究结果相类似〔4〕。
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本研究对胆囊良、恶性病变组织中p16蛋白的表达进行了检测，发现其表达不仅与胆囊腺癌的组织学类型分级显著相关，而且与肿瘤的浸润深度以及淋巴结有无转移有显著的相关性。在正常胆囊粘膜中未见p16表达，但在胆囊粘膜异型增生以及胆囊腺癌组织中均呈过度表达，其阳性率随异型增生程度的增加而增高，也随胆囊腺癌分化程度的降低而升高。本实验结果提示，癌基因bcl-2和抑癌基因p16参与了细胞凋亡的调节，在肿瘤的发生、发展中起重要作用； p16蛋白的表达可作为预测胆囊癌患者预后的重要指标之一。
参 考 文 献
1 Caulard P, Agay MF, Peuchmaur M, et al. Expression of bcl-2 gene product in follicular lymphoma. Am J Pathol, 1991; 140(11)∶1089
2 Pezzella F, Tse AG, Cordell JL, et al. Expression of the bcl-2 oncogene protein is not specific for the 14∶18 chromosomal translocation. Am J Pathol, 1990; 137(3)∶225
3 Koich E, Masshiro K, Shinichi K, et al. Amplifited bcl-2 rearrangements in reactive lymphadenopathy. Virchows Archiv (Cell Pathol), 1992; 63(2)∶197
4 生秀杰，宋和存，何秀琴. 抗凋亡基因bcl-2在子宫内膜癌的表达和意义. 中华肿瘤杂志， 1998； 20(5)∶365
(1998-01-28收稿，1999-01-11修回), http://www.100md.com