腹腔高渗热化疗对荷瘤裸小鼠正常组织的影响
作者：曹 红 王代科 吴小华
单位：曹 红 王代科 第三军医大学大坪医院普外科(重庆 400042)；吴小华 病理科
关键词：高渗液；化疗药物；温热；病理学
腹腔高渗热化疗对荷瘤裸小鼠正常组织的影响 摘要 为观察荷瘤裸小鼠在腹腔高渗热化疗灌注后正常组织的病理变化，选取50只鼠龄7～10周的BALB/c nunu腹腔荷瘤裸小鼠，分组行7.5% NaCl，5μg/ml MMC，42℃/30min持续腹腔灌注，取肝、肾、脾、回肠组织，常规HE染色后光镜观察形态学变化。结果：高渗及高渗化疗组肝、脾、肾无变化；高渗化疗组大肠浆膜下轻度充血水肿；温热及高渗热化疗组肝细胞轻度嗜酸性变性、脾充血、肾小管及集合管轻度水样变性；温热组小肠全层充血，绒毛轻度水肿；高渗热化疗组则可见部分绒毛顶部细胞脱落，陷凹细胞正常。结论：腹腔高渗热化疗对腹腔正常组织损伤轻微。
, 百拇医药
EFFECT OF PERITONEAL PERFUSION WITH HYPERTHERMIA, HYPER-OSMOLAR SOLUTIONS AND ANTINEOPLASTIC DRUG ON NORMAL TISSUE IN NUDE MICE
Cao Hong, Wang Daike, Wu Xiaohua.
Department of General Surgery, Daping Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400042
Abstract To observe the pathologic changes of normal tissue in nude mice after peritoneal perfusion with hyperthermia, hyper-osmolar solution and mitomycin C (MMC). Fifty BALB/c nunu mices (7-10 weeks old) bearing HT-2 lines were chosen for the study, and were randomly divided into five groups: isotonic solution (control group), hyper-osmolar solution (HOS group), HOS plus MMC group, hyperthermia (HT group) and HOS plus HT plus MMC group. After continuous hyperthermic peritoneal perfusion (42℃/30min) with 7.5% NaCl and 5μg/ml MMC, the liver, spleen, small intestine and kidney were examined by light microscopy. Results: ①In HOS and HOS plus MMC groups, no changes of liver, spleen and kidney were found. ②In HT and HOS plus HT plus MMC groups, slight degeneration of liver, hyperemia of spleen, swelling of kidney tubule cells and small intestine were found. ③In HOS plus HT plus MMC group, partial loss of small intestinal villi were also observed. Conclusioin: After continuous hyperthermic perfusion conbined with hyper-osmolar solutions and mitomycin C, a slight injury was showed in normal tissue of nude mice.
, 百拇医药
Key words Hyperthermia Hyper-osmolar solution Antineoplastic drug Pathologic change
体内实验发现〔1，2〕，行高渗液化疗药物温热灌注后，人结肠癌裸鼠腹腔实体瘤细胞大片坏死，细胞核凝固，DNA含量显著减少，部分细胞坏死崩解，热化疗后肿瘤细胞接种成活率为零，表现出显著的肿瘤杀伤效应。为了进一步探讨高渗热化疗在抗肿瘤的同时，对正常组织产生何种影响，特进行本实验研究。
1 材料与方法
1.1 动物及模型
人结肠癌裸鼠腹腔移植瘤株(HT-2)由哈尔滨医科大学肿瘤研究所建立并提供〔3〕。动物采用BALB/c nunu裸小鼠，鼠龄5～8周，体重15～23g，雌雄不拘。将第25代鼠间传代瘤细胞悬液2ml(含瘤细胞>5×109个/L)注入接种鼠腹腔内，饲养于超净环境，2周后腹腔内形成大量腹水及直径为0.2～1.0cm大的瘤结节，成瘤率为100%。
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1.2 实验分组
本实验共分5组，每组10只裸小鼠。①对照组：37℃生理盐水腹腔灌注；②高渗液组：37℃ 7.5%氯化钠腹腔灌注；③高渗化疗组：37℃ 7.5%氯化钠+5μg/ml丝裂霉素C腹腔灌注；④温热组：42℃生理盐水腹腔灌注；⑤高渗热化疗组：42℃ 7.5%氯化钠+5μg/ml丝裂霉素C腹腔灌注。
1.3 方法
将成瘤裸小鼠用乙醚吸入麻醉后固定于工作台冰袋上，灌注管置于肝下，引流管于下侧腹引出，侧腹置入温敏仪监测腹腔内温度，恒温灌注仪(温差<±0.3℃)按分组持续腹腔灌注(CHPP)30分钟，灌注后2小时离断脊髓处死动物取材。
1.4 光镜观察
灌注后分别取0.4cm×0.5cm×0.5cm大的肝、肾、脾及近回盲部回肠(2cm长)组织，10%甲醛固定，石蜡包埋切片，常规HE染色，光镜下观察、照相、记录。
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2 结果
2.1 肝脏
单纯高渗和高渗化疗组与对照组比较无变化；温热组肝细胞轻度嗜酸性变性；高渗热化疗组肝细胞轻度嗜酸性变性，偶可见中央静脉旁单个肝细胞坏死，肝组织结构正常。
2.2 脾脏
单纯高渗和高渗化疗组与对照组比较无变化；温热及高渗热化疗组脾充血，但脾结构正常。
2.3 肾脏
单纯高渗和高渗化疗组与对照组比较无变化；温热及高渗热化疗组肾小球无变化，肾小管及集合管细胞轻度水样变性。
2.4 小肠
单纯高渗组与对照组比较无变化；高渗化疗组小肠浆膜下轻度充血；温热组浆膜下及绒毛轻度充血、水肿，但绒毛完整；高渗热化疗组肠壁充血水肿，部分绒毛顶部细胞脱落，绒毛陷凹细胞正常。
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3 讨论
温热对肿瘤有明显的杀伤作用，对正常组织也可产生程度不一的损伤，温热联合高渗液丝裂霉素C腹腔灌注对正常组织的影响国内尚未见报道。Larkin等〔4〕认为，小于45℃/60分钟温热无直接肝毒性，只有轻度可复性酶学改变。Zavagno等〔5〕报道鼠肝可耐受40℃～43℃/60分钟温热，超过43℃则有灶性坏死病理改变。本实验联用高渗热化疗，发现荷瘤裸鼠肝细胞轻度嗜酸性变性，偶见单个肝细胞坏死，损伤轻微。Gilly等〔6〕发现，狗在43℃/45分钟温热联用丝裂霉素C腹腔灌注后正常组织无损伤。作者采用高渗丝裂霉素C裸鼠腹腔温热灌注，仅发现轻度脾充血、肾小管及集合管细胞水样变性。Tsubouch等〔7〕的实验发现，回肠是胃肠热损伤最早且最重的区域，而粘膜是高危的靶位，温热主要作用于绒毛上皮细胞，放疗则影响陷凹细胞。本实验发现高渗热化疗组部分水肿绒毛顶端上皮细胞脱落，陷凹细胞正常，损伤也较轻微。
, 百拇医药
本实验结果提示：温热联用高渗液丝裂霉素C对荷人结肠癌裸小鼠腹腔正常组织无明显损伤，故临床采用42℃/30分钟温热联合7.5%高渗钠加5μg/ml丝裂霉素C持续腹腔灌注，可望对大肠癌腹膜种植瘤取得一定的杀伤作用，同时又能为腹腔正常组织所耐受。
参 考 文 献
1 曹 红，王代科. 温热高渗液化疗药物对人大肠癌移植瘤的体内作用. 中华实验外科杂志， 1996； 13(5)∶121
2 曹 红，王代科，吴小华等. 高渗热化疗对人结肠癌裸鼠移植瘤的病理影响. 第三军医大学学报， 1998； 20(2)∶69
3 史 历，刘 旭，刘曼杰等. 人结肠腺癌裸鼠皮下和腹腔移植瘤株的建立及主要生物学特性的观察. 实用肿瘤学杂志， 1993； 16(3)∶34
, 百拇医药 4 Larkin JM, Edwards WS, Daniel E, et al. Systemic thermotherapy: description of a method and physiologic tolerance in clinical subjects. Cancer, 1977; 40(6)∶3155
5 Zavagno G, Vespa D, Moschin N, et al. Effect of hyperthermia on isolated perfused rat liver. Eur Surg Res, 1989; 21(5)∶243
6 Gilly FN, Carry PY, Sayag AC, et al. Tolerance of intraperitoneal chemohyperthermia with mitomycin C： in vivo study in dogs. Hyperthermia, 1992; 8(5)∶659
7 Tsubouchi S, Kano E, Nishimoto Y, et al. The effect of microwave induced whole body hyperthermia on the mucosa of mouse small intestine. J Radiat Res, 1984; 25(2)∶131
(1998-01-05收稿，1998-09-21修回), http://www.100md.com
单位：曹 红 王代科 第三军医大学大坪医院普外科(重庆 400042)；吴小华 病理科
关键词：高渗液；化疗药物；温热；病理学
腹腔高渗热化疗对荷瘤裸小鼠正常组织的影响 摘要 为观察荷瘤裸小鼠在腹腔高渗热化疗灌注后正常组织的病理变化，选取50只鼠龄7～10周的BALB/c nunu腹腔荷瘤裸小鼠，分组行7.5% NaCl，5μg/ml MMC，42℃/30min持续腹腔灌注，取肝、肾、脾、回肠组织，常规HE染色后光镜观察形态学变化。结果：高渗及高渗化疗组肝、脾、肾无变化；高渗化疗组大肠浆膜下轻度充血水肿；温热及高渗热化疗组肝细胞轻度嗜酸性变性、脾充血、肾小管及集合管轻度水样变性；温热组小肠全层充血，绒毛轻度水肿；高渗热化疗组则可见部分绒毛顶部细胞脱落，陷凹细胞正常。结论：腹腔高渗热化疗对腹腔正常组织损伤轻微。
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Cao Hong, Wang Daike, Wu Xiaohua.
Department of General Surgery, Daping Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400042
Abstract To observe the pathologic changes of normal tissue in nude mice after peritoneal perfusion with hyperthermia, hyper-osmolar solution and mitomycin C (MMC). Fifty BALB/c nunu mices (7-10 weeks old) bearing HT-2 lines were chosen for the study, and were randomly divided into five groups: isotonic solution (control group), hyper-osmolar solution (HOS group), HOS plus MMC group, hyperthermia (HT group) and HOS plus HT plus MMC group. After continuous hyperthermic peritoneal perfusion (42℃/30min) with 7.5% NaCl and 5μg/ml MMC, the liver, spleen, small intestine and kidney were examined by light microscopy. Results: ①In HOS and HOS plus MMC groups, no changes of liver, spleen and kidney were found. ②In HT and HOS plus HT plus MMC groups, slight degeneration of liver, hyperemia of spleen, swelling of kidney tubule cells and small intestine were found. ③In HOS plus HT plus MMC group, partial loss of small intestinal villi were also observed. Conclusioin: After continuous hyperthermic perfusion conbined with hyper-osmolar solutions and mitomycin C, a slight injury was showed in normal tissue of nude mice.
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Key words Hyperthermia Hyper-osmolar solution Antineoplastic drug Pathologic change
体内实验发现〔1，2〕，行高渗液化疗药物温热灌注后，人结肠癌裸鼠腹腔实体瘤细胞大片坏死，细胞核凝固，DNA含量显著减少，部分细胞坏死崩解，热化疗后肿瘤细胞接种成活率为零，表现出显著的肿瘤杀伤效应。为了进一步探讨高渗热化疗在抗肿瘤的同时，对正常组织产生何种影响，特进行本实验研究。
1 材料与方法
1.1 动物及模型
人结肠癌裸鼠腹腔移植瘤株(HT-2)由哈尔滨医科大学肿瘤研究所建立并提供〔3〕。动物采用BALB/c nunu裸小鼠，鼠龄5～8周，体重15～23g，雌雄不拘。将第25代鼠间传代瘤细胞悬液2ml(含瘤细胞>5×109个/L)注入接种鼠腹腔内，饲养于超净环境，2周后腹腔内形成大量腹水及直径为0.2～1.0cm大的瘤结节，成瘤率为100%。
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1.2 实验分组
本实验共分5组，每组10只裸小鼠。①对照组：37℃生理盐水腹腔灌注；②高渗液组：37℃ 7.5%氯化钠腹腔灌注；③高渗化疗组：37℃ 7.5%氯化钠+5μg/ml丝裂霉素C腹腔灌注；④温热组：42℃生理盐水腹腔灌注；⑤高渗热化疗组：42℃ 7.5%氯化钠+5μg/ml丝裂霉素C腹腔灌注。
1.3 方法
将成瘤裸小鼠用乙醚吸入麻醉后固定于工作台冰袋上，灌注管置于肝下，引流管于下侧腹引出，侧腹置入温敏仪监测腹腔内温度，恒温灌注仪(温差<±0.3℃)按分组持续腹腔灌注(CHPP)30分钟，灌注后2小时离断脊髓处死动物取材。
1.4 光镜观察
灌注后分别取0.4cm×0.5cm×0.5cm大的肝、肾、脾及近回盲部回肠(2cm长)组织，10%甲醛固定，石蜡包埋切片，常规HE染色，光镜下观察、照相、记录。
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2 结果
2.1 肝脏
单纯高渗和高渗化疗组与对照组比较无变化；温热组肝细胞轻度嗜酸性变性；高渗热化疗组肝细胞轻度嗜酸性变性，偶可见中央静脉旁单个肝细胞坏死，肝组织结构正常。
2.2 脾脏
单纯高渗和高渗化疗组与对照组比较无变化；温热及高渗热化疗组脾充血，但脾结构正常。
2.3 肾脏
单纯高渗和高渗化疗组与对照组比较无变化；温热及高渗热化疗组肾小球无变化，肾小管及集合管细胞轻度水样变性。
2.4 小肠
单纯高渗组与对照组比较无变化；高渗化疗组小肠浆膜下轻度充血；温热组浆膜下及绒毛轻度充血、水肿，但绒毛完整；高渗热化疗组肠壁充血水肿，部分绒毛顶部细胞脱落，绒毛陷凹细胞正常。
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3 讨论
温热对肿瘤有明显的杀伤作用，对正常组织也可产生程度不一的损伤，温热联合高渗液丝裂霉素C腹腔灌注对正常组织的影响国内尚未见报道。Larkin等〔4〕认为，小于45℃/60分钟温热无直接肝毒性，只有轻度可复性酶学改变。Zavagno等〔5〕报道鼠肝可耐受40℃～43℃/60分钟温热，超过43℃则有灶性坏死病理改变。本实验联用高渗热化疗，发现荷瘤裸鼠肝细胞轻度嗜酸性变性，偶见单个肝细胞坏死，损伤轻微。Gilly等〔6〕发现，狗在43℃/45分钟温热联用丝裂霉素C腹腔灌注后正常组织无损伤。作者采用高渗丝裂霉素C裸鼠腹腔温热灌注，仅发现轻度脾充血、肾小管及集合管细胞水样变性。Tsubouch等〔7〕的实验发现，回肠是胃肠热损伤最早且最重的区域，而粘膜是高危的靶位，温热主要作用于绒毛上皮细胞，放疗则影响陷凹细胞。本实验发现高渗热化疗组部分水肿绒毛顶端上皮细胞脱落，陷凹细胞正常，损伤也较轻微。
, 百拇医药
本实验结果提示：温热联用高渗液丝裂霉素C对荷人结肠癌裸小鼠腹腔正常组织无明显损伤，故临床采用42℃/30分钟温热联合7.5%高渗钠加5μg/ml丝裂霉素C持续腹腔灌注，可望对大肠癌腹膜种植瘤取得一定的杀伤作用，同时又能为腹腔正常组织所耐受。
参 考 文 献
1 曹 红，王代科. 温热高渗液化疗药物对人大肠癌移植瘤的体内作用. 中华实验外科杂志， 1996； 13(5)∶121
2 曹 红，王代科，吴小华等. 高渗热化疗对人结肠癌裸鼠移植瘤的病理影响. 第三军医大学学报， 1998； 20(2)∶69
3 史 历，刘 旭，刘曼杰等. 人结肠腺癌裸鼠皮下和腹腔移植瘤株的建立及主要生物学特性的观察. 实用肿瘤学杂志， 1993； 16(3)∶34
, 百拇医药 4 Larkin JM, Edwards WS, Daniel E, et al. Systemic thermotherapy: description of a method and physiologic tolerance in clinical subjects. Cancer, 1977; 40(6)∶3155
5 Zavagno G, Vespa D, Moschin N, et al. Effect of hyperthermia on isolated perfused rat liver. Eur Surg Res, 1989; 21(5)∶243
6 Gilly FN, Carry PY, Sayag AC, et al. Tolerance of intraperitoneal chemohyperthermia with mitomycin C： in vivo study in dogs. Hyperthermia, 1992; 8(5)∶659
7 Tsubouchi S, Kano E, Nishimoto Y, et al. The effect of microwave induced whole body hyperthermia on the mucosa of mouse small intestine. J Radiat Res, 1984; 25(2)∶131
(1998-01-05收稿，1998-09-21修回), http://www.100md.com