系膜增殖性肾炎白细胞介素6表达与细胞外基质产生的研究
作者：李开龙 朱妙珍 赵言明 倪 军
单位：第三军医大学大坪医院野战外科研究所肾内科(重庆，400042)
关键词：系膜增殖性肾炎；白细胞介素6；细胞外基质
肾脏病与透析肾移植杂志990212
系膜细胞增生、细胞外基质(ECM)聚积和扩张是系膜增殖性肾小球肾炎(MsPGN)发生发展的重要病理基础[1]。研究表明，系膜细胞可分泌具有生物活性的白细胞介素6(IL-6)，IL-6又可促进系膜细胞生长[2]。人类MsPGN中IL-6的表达及其与ECM之间的关系国内外研究较少，我们观察了MsPGN患者肾小球内IL-6基因及蛋白表达状况，分析其与系膜扩张，系膜基质成分Ⅳ型胶原(CIV)和纤维连接蛋白(FN)之间的关系。
, 百拇医药 1 材料和方法
1.1 肾组织标本制备[3] MsPGN组12例，男9例、女3例，平均年龄26.8岁。所选病例经肾活检、按1982年WHO制定的肾小球疾病形态学分类确诊为MsPGN。对照组8例，为男性移植肾供肾者，肾活检证实为正常肾组织。肾组织按参考文献[3]处理备用。
1.2 IL-6 mRNA原位杂交 参照参考文献[4]制备IL-6 cDNA探针(寡核苷酸特异探针序列由上海细胞生物研究所合成，DIG寡核苷酸3末端标记试剂盒购自BM公司)[4]。按蔡文琴法[3]将4℃多聚甲醛固定后的冰冻切片常规处理后行原位杂交，阴性对照以不加探针的杂交液同法操作。
1.3 IL-6、CIV和FN免疫组化染色 按参考文献[3]进行。兔抗人IL-6多克隆抗体购自美国Santa Gruze公司，鼠抗人FN、鼠抗人CIV以及三抗、二抗均购自北京中山生物试剂公司。
, 百拇医药
1.4 ECM嗜银染色 按常规进行。
1.5 半定量分析 采用EIG综合图象分析系统(重庆大学ICT中心)对照片上的阳性杂交信号或染色信号进行半定量分析。
1.6 统计学处理 用SPMP医用统计软件进行t检验和相关分析。数据以
±s表示。
2 结 果
详见表1～表4。
表1 MsPGN肾小球与正常肾小球内IL-6 mRNA表达的比较
(阳性信号面积占肾小球总面积百分比) 组别
n
, http://www.100md.com
IL-6 mRNA(%)
MsPGN组
12
4.1±0.5*
正常对照组
8
2.6±0.6
*P<0.01与正常对照组比较表2 MsPGN组与正常对照组肾小球内IL-6、CIV和FN蛋白表达结果比较
(阳性信号面积占肾小球总面积百分比) 组别
n
IL-6(%)
, http://www.100md.com
CIV(%)
FN(%)
MsPGN组
12
9.4±0.8＃
10.8±0.7＃
9.3±0.9*
正常对照组
8
2.7±0.5
5.6±0.7
6.1±0.4
, http://www.100md.com
＃P<0.01，*P<0.05与对照组比较表3 MsPGN与正常肾组织肾小球ECM扩张程度比较
(ECM面积占肾小球总面积百分比) 组别
n
ECM面积占肾小球总面积百分比(%)
MsPGN组
12
25.2±2.7＃
正常对照组
8
8.7±2.1
, 百拇医药
＃P<0.001与对照组比较表4 IL-6表达与CIV、FN表达以及ECM扩张的相关性(r)
CIV
FN
ECM
IL-6蛋白表达
IL-6 mRNA表达
0.68
0.62
0.82
0.78
IL-6蛋白表达
, 百拇医药 0.69
0.60
0.81
P<0.013 讨 论
系膜细胞可分泌IL-6[2]，IL-6反过来又可刺激系膜细胞增生，表明在肾脏局部IL-6可能以自分泌和旁分泌的方式影响系膜细胞的生物特性和ECM的变化。本实验发现在生理和病理状态下，肾小球系膜细胞均可表达IL-6(在分子和蛋白水平表达一致，二者显著正相关)，但在MsPGN中的表达显著高于正常对照组，且在MsPGN中CIV和FN的表达也明显增高，ECM扩张明显；CIV、FN的表达和ECM的扩张与IL-6在分子和蛋白水平的表达都有显著正相关。提示肾小球系膜细胞异常自分泌的IL-6，可能是刺激系膜基质成分过度增生和聚积的重要介质之一，从而导致了ECM的异常扩张，形成了肾小球硬化的病理基础[5]。
, http://www.100md.com
参考文献
1 Fogo A.Internephron heterogeneity of growth factor and sclerosis.Kidney Int，1994，45(Suppl 45)：S-24
2 Horii Y，Muraguchi A，Iwano M et al.Involvement of IL-6 in measangial proliferative glomerulonephritis.J Immunol，1989，143：3949
3 蔡文琴，王伯云主编.实用免疫细胞化学与核酸分子杂交技术.重庆：四川科技出版社，1994
4 谭 骏主编.DNA重组技术.第三军医大学分子遗传学教研室，1993
5 吴小川，易著文，赵维玲等.系膜增殖性肾炎患儿肾组织中白细胞介素-6信使核糖核酸表达的研究.肾脏病与透析肾移植杂志，1997，6(3)：232
(1998-12-20收稿，1999-02-08修回), 百拇医药
单位：第三军医大学大坪医院野战外科研究所肾内科(重庆，400042)
关键词：系膜增殖性肾炎；白细胞介素6；细胞外基质
肾脏病与透析肾移植杂志990212
系膜细胞增生、细胞外基质(ECM)聚积和扩张是系膜增殖性肾小球肾炎(MsPGN)发生发展的重要病理基础[1]。研究表明，系膜细胞可分泌具有生物活性的白细胞介素6(IL-6)，IL-6又可促进系膜细胞生长[2]。人类MsPGN中IL-6的表达及其与ECM之间的关系国内外研究较少，我们观察了MsPGN患者肾小球内IL-6基因及蛋白表达状况，分析其与系膜扩张，系膜基质成分Ⅳ型胶原(CIV)和纤维连接蛋白(FN)之间的关系。
, 百拇医药 1 材料和方法
1.1 肾组织标本制备[3] MsPGN组12例，男9例、女3例，平均年龄26.8岁。所选病例经肾活检、按1982年WHO制定的肾小球疾病形态学分类确诊为MsPGN。对照组8例，为男性移植肾供肾者，肾活检证实为正常肾组织。肾组织按参考文献[3]处理备用。
1.2 IL-6 mRNA原位杂交 参照参考文献[4]制备IL-6 cDNA探针(寡核苷酸特异探针序列由上海细胞生物研究所合成，DIG寡核苷酸3末端标记试剂盒购自BM公司)[4]。按蔡文琴法[3]将4℃多聚甲醛固定后的冰冻切片常规处理后行原位杂交，阴性对照以不加探针的杂交液同法操作。
1.3 IL-6、CIV和FN免疫组化染色 按参考文献[3]进行。兔抗人IL-6多克隆抗体购自美国Santa Gruze公司，鼠抗人FN、鼠抗人CIV以及三抗、二抗均购自北京中山生物试剂公司。
, 百拇医药
1.4 ECM嗜银染色 按常规进行。
1.5 半定量分析 采用EIG综合图象分析系统(重庆大学ICT中心)对照片上的阳性杂交信号或染色信号进行半定量分析。
1.6 统计学处理 用SPMP医用统计软件进行t检验和相关分析。数据以
±s表示。2 结 果
详见表1～表4。
表1 MsPGN肾小球与正常肾小球内IL-6 mRNA表达的比较
(阳性信号面积占肾小球总面积百分比) 组别
n
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IL-6 mRNA(%)
MsPGN组
12
4.1±0.5*
正常对照组
8
2.6±0.6
*P<0.01与正常对照组比较表2 MsPGN组与正常对照组肾小球内IL-6、CIV和FN蛋白表达结果比较
(阳性信号面积占肾小球总面积百分比) 组别
n
IL-6(%)
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CIV(%)
FN(%)
MsPGN组
12
9.4±0.8＃
10.8±0.7＃
9.3±0.9*
正常对照组
8
2.7±0.5
5.6±0.7
6.1±0.4
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＃P<0.01，*P<0.05与对照组比较表3 MsPGN与正常肾组织肾小球ECM扩张程度比较
(ECM面积占肾小球总面积百分比) 组别
n
ECM面积占肾小球总面积百分比(%)
MsPGN组
12
25.2±2.7＃
正常对照组
8
8.7±2.1
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＃P<0.001与对照组比较表4 IL-6表达与CIV、FN表达以及ECM扩张的相关性(r)
CIV
FN
ECM
IL-6蛋白表达
IL-6 mRNA表达
0.68
0.62
0.82
0.78
IL-6蛋白表达
, 百拇医药 0.69
0.60
0.81
P<0.013 讨 论
系膜细胞可分泌IL-6[2]，IL-6反过来又可刺激系膜细胞增生，表明在肾脏局部IL-6可能以自分泌和旁分泌的方式影响系膜细胞的生物特性和ECM的变化。本实验发现在生理和病理状态下，肾小球系膜细胞均可表达IL-6(在分子和蛋白水平表达一致，二者显著正相关)，但在MsPGN中的表达显著高于正常对照组，且在MsPGN中CIV和FN的表达也明显增高，ECM扩张明显；CIV、FN的表达和ECM的扩张与IL-6在分子和蛋白水平的表达都有显著正相关。提示肾小球系膜细胞异常自分泌的IL-6，可能是刺激系膜基质成分过度增生和聚积的重要介质之一，从而导致了ECM的异常扩张，形成了肾小球硬化的病理基础[5]。
, http://www.100md.com
参考文献
1 Fogo A.Internephron heterogeneity of growth factor and sclerosis.Kidney Int，1994，45(Suppl 45)：S-24
2 Horii Y，Muraguchi A，Iwano M et al.Involvement of IL-6 in measangial proliferative glomerulonephritis.J Immunol，1989，143：3949
3 蔡文琴，王伯云主编.实用免疫细胞化学与核酸分子杂交技术.重庆：四川科技出版社，1994
4 谭 骏主编.DNA重组技术.第三军医大学分子遗传学教研室，1993
5 吴小川，易著文，赵维玲等.系膜增殖性肾炎患儿肾组织中白细胞介素-6信使核糖核酸表达的研究.肾脏病与透析肾移植杂志，1997，6(3)：232
(1998-12-20收稿，1999-02-08修回), 百拇医药