慢性排斥患者移植肾组织中肥大细胞亚类分析
作者：刘亚革 孟璐露 姜志明 曹建平 蒲菲菲
单位：沈阳军区总医院医学实验科(沈阳，110015)
关键词：肾移植；慢性排斥；肥大细胞
肾脏病与透析肾移植杂志990208 摘 要 目的：了解慢性排斥患者移植肾中的肥大细胞是否存在不同亚类。 方法：采用甲苯胺蓝特殊染色及肥大细胞特异酶Tryptase(类胰蛋白酶)免疫组织化学染色，对10例切除的慢性排斥患者移植肾标本进行了肥大细胞形态观察。 结果：发现慢性排斥患者移植肾中存在三种类型的肥大细胞。分别为甲苯胺蓝染色阳性，Tryptase阳性及以上二种方法双阳性的细胞类型。三种类型肥大细胞占肥大细胞总数的百分比分别为：23.12%；8.05%与68.86%。 结论：经由甲苯胺蓝特染及免疫组化染色证明：在慢性排斥患者移植肾中存在三种不同类型的肥大细胞，其功能特性尚需进一步研究。
, 百拇医药 SUBSETS OF MAST CELL IN CHRONIC REJECTION OF RENAL ALLOGRAFTS
Liu Yage，Meng Lulu，Jiang Zhiming，Cao Jianping，Pu Feifei
Department of Experimental Medicine，Northern Hospital.Shenyang，Liaoning，110015
OBJECTIVE To define the mast cells subsets in chronic rejection of renal allogreft.
METHODOLOGY This study included ten renal transplanted patients (7 males and 3 females)aged between 24 and 45 years and the cause of uremia was glomeruloneplritis.The allografts survival were between 2 and 7 years.Paraffin embedded sections of these grafts were stained with anti-human Tryptase mAb Biotin-avidin-HRP.The histology of mast cells in the chronically rejected renal grafts was investigated by using specific immunohistochemical assay with anti-human Trytase mAb(a tetrameric serine proteinase of mast cells).
, 百拇医药
RESULTS The results showed that there were three kinds of mast cells in the kidney of chronic rejection.They were Toluidine Blue positive cells(T+)；Tryptase positive cells(Tr+)and T+/Tr+respectively.T+cell's nucleus was stained blue，plasm dark blue and azurophil granule；Tr+cell's necleus was stained yellow，plasm brown，and the granule dark brown；T+/Tr+cell's necleus was stained brown and blue，the plasma blue and brown，the granule of T+/Tr+ dark brown.T+，TR+ and T+/Tr+ accouned for 23.12%，8.51% and 68.86% of the total numbers of mast cells respectively.
, 百拇医药
CONCLUSION There were 3 kinds of mast cells in the chronic rejection renograft，in which various proteinase was shown in the cell plasm.Distinct mast cells may paly a role in allograft rejective reaction.
Key words kidney transplantation chronic rejection mast cell
现已明确，肥大细胞及其分泌的介质、细胞因子参与了许多疾病的发生发展[1，2]。其中在心肺移植排斥反应中的作用亦有报道[3，4]。我们在对慢性排斥患者移植肾中肥大细胞分布特性的研究中，观察到排斥肾中肥大细胞表现出着色特点的差异性，现将结果报告如下。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料来源 标本来自本院病理科保存的石腊包块，均取自于泌尿外科1985～1997年行同种异体肾移植患者。共10例，其中男7例，女3例，年龄24～45岁，术前诊断为尿毒症，基础病变为慢性肾小球肾炎。10例肾切除均系慢性排斥反应使移植肾丧失功能所致。移植肾存活时间为2～7年。
1.2 形态学观察
1.2.1 免疫组织化学染色 石蜡切片经二甲苯脱蜡，逐级酒精浸水后，常规ABC法染色。试剂为：Anti-human Tryptase mAb Biotin(Promega公司)，avidin-HRP(北京军事医学科学院微生物研究室)DAB(Sigma公司)。
1.2.2 甲苯胺蓝复染 经ABC法染色的切片，PBS洗后，按文献[5]进行甲苯胺蓝染色。高倍镜(100×)下进行肥大细胞形态观察，至少计数200个细胞，并根据着色特点进行分类。
, 百拇医药
2 结 果
镜下观察到三种具有不同着色特征的细胞。分别为：甲苯胺蓝染色阳性细胞T+(不包括双阳性细胞)，特点为细胞核淡蓝色，细胞浆呈蓝色，细胞浆颗粒呈深蓝紫色。Tryptase阳性细胞Tr+(不包括双阳性细胞)，特点为细胞核淡黄色，细胞浆为棕黄色，细胞浆颗粒为深棕色。双重染色均阳性细胞T+/Tr+，特点为细胞浆呈蓝或棕色，细胞浆颗粒呈棕黑色，细胞核浅棕色或掺杂淡蓝色(见附图)。三种类型细胞数量占总肥大细胞数量的百分比依次为23.12%，8.05%，68.86%(见附表)。
附表 慢性排斥患者移植肾的肥大细胞染色结果(%) 病例
甲苯胺蓝阳性
Tryptase阳性
, 百拇医药 双染阳性
肾存活时间(年)
1
9.25
7.40
83.33
2
2
21.26
7.69
71.04
2
3
, 百拇医药
15.09
6.03
78.86
7
4
47.45
1.27
51.27
7
5
24.90
10.40
64.31
, 百拇医药
7
6
60.69
2.00
36.99
7
7
10.75
6.01
83.22
6
8
8.53
, 百拇医药
3.31
88.15
4
9
18.05
24.10
59.20
6
10
15.24
12.30
72.32
5
, http://www.100md.com
平均%
23.12
8.05
68.86
附图 慢性排斥患者移植肾中存在的三种肥大细胞(×100)
3 讨 论
肥大细胞作为一种抗原呈递细胞[6]，在免疫系统中的作用越来越受到人们的关注。现已证明，肥大细胞是由骨髓CD34阳性造血干细胞分化而来的一个独立的细胞系[7，8]。关于肥大细胞的亚类研究也已有报道。当前对于肥大细胞进行分类的方法主要有二种。一种是依据其在体内定居的特点，分为结缔组织型(CTMCs)与粘膜型(MMCs)。结缔组织型肥大细胞主要分布于皮肤结缔组织，腹腔浆膜，肌肉及血管，周围神经组织。粘膜型肥大细胞主要分布于呼吸道，小肠粘膜层[9，10]。
, 百拇医药
另一种分类方法则是依据肥大细胞的特异性酶标志物。Dimitriadou等[4，11]用抗RMCPⅠ、Ⅱ酶(大鼠肥大细胞蛋白酶Ⅰ、Ⅱ)单抗进行免疫组织化学染色，证明在大鼠肺、脾内存在三种类型的肥大细胞，分别为RMCPⅠ+，RMCPⅡ+与RMCPⅠ+/RMCPⅡ+。
Metcalfe等[8]对人肥大细胞研究结果发现，人的不同亚类肥大细胞含有不同的酶。其中结缔组织型肥大细胞含有Tryptase酶，而粘膜肥大细胞除含有Tryptase酶外，亦含有Chymase(胃促胰酶)等酶。He[12]研究的结果与Metcalfe研究结果一致之处在于都证明了在所有的肥大细胞中都含有Tryptase酶。
我们用甲苯胺蓝及免疫组织化学方法在慢性排斥患者移植肾中观察到了三种不同着色特点的肥大细胞，分别为甲苯胺蓝染色阳性，Trptase阳性与双染均阳性。它们所占总肥大细胞的百分比分别为：23.12%，8.05%及68.86%。从中可以看出23.12%的肥大细胞中不含Tryptase，此结果与Metcale、He等研究结论不尽相同。
, http://www.100md.com
上述研究结果说明慢性排斥患者移植肾中存在不同类型的肥大细胞。这些不同类型的肥大细胞可能在移植排斥反应中担负着不同的功能。
参考文献
1 Schaffer FL，Weg VB.Mast cells，eosinophils and fibrosis.Clin Exp Allergy，1997，27：64
2 Murphy GF，Sueki H，Teuscher C.Role of mast cells in early epithelial target cell injury in experimental acute graft versus host disease.J Invest Dermatol，1994，102：451
3 Yousem SA.The potential role of mast cells in lung allograft rejection.Hum Pathology，1997，28：179
, 百拇医药
4 Buvry A，Garbarg M，Dimitriadou V.Phenotypic and quantitative changes in mast cells after syngeneic unilateral lung transplantation in the rat.Clin Science，1996，91：319
5 凌启波.实用病理特殊染色和组化技术.广东高等教育出版社.广州：广东教育出版社，1989.142-145
6 Frandji P，Oskeritzian C，Cacaraci F.Antigen dependent stimulation by bone marrow derived mast cells of MHC class Ⅱ restricted T cell hybridoma.J Immunol.1993，151：6318
7 Kirshenbaum AS，Kessler SW，Goff JP.Demonstration of the origin of human mast cells from CD34+ bone marrow progenitor cells.J Immunol，1991，146：1410
, 百拇医药
8 Metcalfe DD，Baram D，Mekori YA.Mast cells.Physiol Reviews.1997，77：1033
9 Smith TJ，Weis JH.Mucosal T cells and mast cells share common adhesion receptors.Immunol Today，1996，17：60
10 Mecheri S，David B.Unravelling the mast cell dilemma：culprit or victim of its generosity.Immunol Today，1997，18：212
11 Dimitriadou V，Rouleau A，Toung MDT.Functional relationship between mast cells and C sensitive nerve fibres evidenced by histamine H3 receptor modulation in rat lung and spleen.Clin Science，1994，87：151
12 He S，Walls AF.Human mast cell tryptase：a stimulus of microvascular leakage and mast cell activation.Eur J Pharmacol，1997，328：89
(1998-12-29收稿，1999-02-01修回), http://www.100md.com
单位：沈阳军区总医院医学实验科(沈阳，110015)
关键词：肾移植；慢性排斥；肥大细胞
肾脏病与透析肾移植杂志990208 摘 要 目的：了解慢性排斥患者移植肾中的肥大细胞是否存在不同亚类。 方法：采用甲苯胺蓝特殊染色及肥大细胞特异酶Tryptase(类胰蛋白酶)免疫组织化学染色，对10例切除的慢性排斥患者移植肾标本进行了肥大细胞形态观察。 结果：发现慢性排斥患者移植肾中存在三种类型的肥大细胞。分别为甲苯胺蓝染色阳性，Tryptase阳性及以上二种方法双阳性的细胞类型。三种类型肥大细胞占肥大细胞总数的百分比分别为：23.12%；8.05%与68.86%。 结论：经由甲苯胺蓝特染及免疫组化染色证明：在慢性排斥患者移植肾中存在三种不同类型的肥大细胞，其功能特性尚需进一步研究。
, 百拇医药 SUBSETS OF MAST CELL IN CHRONIC REJECTION OF RENAL ALLOGRAFTS
Liu Yage，Meng Lulu，Jiang Zhiming，Cao Jianping，Pu Feifei
Department of Experimental Medicine，Northern Hospital.Shenyang，Liaoning，110015
OBJECTIVE To define the mast cells subsets in chronic rejection of renal allogreft.
METHODOLOGY This study included ten renal transplanted patients (7 males and 3 females)aged between 24 and 45 years and the cause of uremia was glomeruloneplritis.The allografts survival were between 2 and 7 years.Paraffin embedded sections of these grafts were stained with anti-human Tryptase mAb Biotin-avidin-HRP.The histology of mast cells in the chronically rejected renal grafts was investigated by using specific immunohistochemical assay with anti-human Trytase mAb(a tetrameric serine proteinase of mast cells).
, 百拇医药
RESULTS The results showed that there were three kinds of mast cells in the kidney of chronic rejection.They were Toluidine Blue positive cells(T+)；Tryptase positive cells(Tr+)and T+/Tr+respectively.T+cell's nucleus was stained blue，plasm dark blue and azurophil granule；Tr+cell's necleus was stained yellow，plasm brown，and the granule dark brown；T+/Tr+cell's necleus was stained brown and blue，the plasma blue and brown，the granule of T+/Tr+ dark brown.T+，TR+ and T+/Tr+ accouned for 23.12%，8.51% and 68.86% of the total numbers of mast cells respectively.
, 百拇医药
CONCLUSION There were 3 kinds of mast cells in the chronic rejection renograft，in which various proteinase was shown in the cell plasm.Distinct mast cells may paly a role in allograft rejective reaction.
Key words kidney transplantation chronic rejection mast cell
现已明确，肥大细胞及其分泌的介质、细胞因子参与了许多疾病的发生发展[1，2]。其中在心肺移植排斥反应中的作用亦有报道[3，4]。我们在对慢性排斥患者移植肾中肥大细胞分布特性的研究中，观察到排斥肾中肥大细胞表现出着色特点的差异性，现将结果报告如下。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料来源 标本来自本院病理科保存的石腊包块，均取自于泌尿外科1985～1997年行同种异体肾移植患者。共10例，其中男7例，女3例，年龄24～45岁，术前诊断为尿毒症，基础病变为慢性肾小球肾炎。10例肾切除均系慢性排斥反应使移植肾丧失功能所致。移植肾存活时间为2～7年。
1.2 形态学观察
1.2.1 免疫组织化学染色 石蜡切片经二甲苯脱蜡，逐级酒精浸水后，常规ABC法染色。试剂为：Anti-human Tryptase mAb Biotin(Promega公司)，avidin-HRP(北京军事医学科学院微生物研究室)DAB(Sigma公司)。
1.2.2 甲苯胺蓝复染 经ABC法染色的切片，PBS洗后，按文献[5]进行甲苯胺蓝染色。高倍镜(100×)下进行肥大细胞形态观察，至少计数200个细胞，并根据着色特点进行分类。
, 百拇医药
2 结 果
镜下观察到三种具有不同着色特征的细胞。分别为：甲苯胺蓝染色阳性细胞T+(不包括双阳性细胞)，特点为细胞核淡蓝色，细胞浆呈蓝色，细胞浆颗粒呈深蓝紫色。Tryptase阳性细胞Tr+(不包括双阳性细胞)，特点为细胞核淡黄色，细胞浆为棕黄色，细胞浆颗粒为深棕色。双重染色均阳性细胞T+/Tr+，特点为细胞浆呈蓝或棕色，细胞浆颗粒呈棕黑色，细胞核浅棕色或掺杂淡蓝色(见附图)。三种类型细胞数量占总肥大细胞数量的百分比依次为23.12%，8.05%，68.86%(见附表)。
附表 慢性排斥患者移植肾的肥大细胞染色结果(%) 病例
甲苯胺蓝阳性
Tryptase阳性
, 百拇医药 双染阳性
肾存活时间(年)
1
9.25
7.40
83.33
2
2
21.26
7.69
71.04
2
3
, 百拇医药
15.09
6.03
78.86
7
4
47.45
1.27
51.27
7
5
24.90
10.40
64.31
, 百拇医药
7
6
60.69
2.00
36.99
7
7
10.75
6.01
83.22
6
8
8.53
, 百拇医药
3.31
88.15
4
9
18.05
24.10
59.20
6
10
15.24
12.30
72.32
5
, http://www.100md.com
平均%
23.12
8.05
68.86
附图 慢性排斥患者移植肾中存在的三种肥大细胞(×100)
3 讨 论
肥大细胞作为一种抗原呈递细胞[6]，在免疫系统中的作用越来越受到人们的关注。现已证明，肥大细胞是由骨髓CD34阳性造血干细胞分化而来的一个独立的细胞系[7，8]。关于肥大细胞的亚类研究也已有报道。当前对于肥大细胞进行分类的方法主要有二种。一种是依据其在体内定居的特点，分为结缔组织型(CTMCs)与粘膜型(MMCs)。结缔组织型肥大细胞主要分布于皮肤结缔组织，腹腔浆膜，肌肉及血管，周围神经组织。粘膜型肥大细胞主要分布于呼吸道，小肠粘膜层[9，10]。
, 百拇医药
另一种分类方法则是依据肥大细胞的特异性酶标志物。Dimitriadou等[4，11]用抗RMCPⅠ、Ⅱ酶(大鼠肥大细胞蛋白酶Ⅰ、Ⅱ)单抗进行免疫组织化学染色，证明在大鼠肺、脾内存在三种类型的肥大细胞，分别为RMCPⅠ+，RMCPⅡ+与RMCPⅠ+/RMCPⅡ+。
Metcalfe等[8]对人肥大细胞研究结果发现，人的不同亚类肥大细胞含有不同的酶。其中结缔组织型肥大细胞含有Tryptase酶，而粘膜肥大细胞除含有Tryptase酶外，亦含有Chymase(胃促胰酶)等酶。He[12]研究的结果与Metcalfe研究结果一致之处在于都证明了在所有的肥大细胞中都含有Tryptase酶。
我们用甲苯胺蓝及免疫组织化学方法在慢性排斥患者移植肾中观察到了三种不同着色特点的肥大细胞，分别为甲苯胺蓝染色阳性，Trptase阳性与双染均阳性。它们所占总肥大细胞的百分比分别为：23.12%，8.05%及68.86%。从中可以看出23.12%的肥大细胞中不含Tryptase，此结果与Metcale、He等研究结论不尽相同。
, http://www.100md.com
上述研究结果说明慢性排斥患者移植肾中存在不同类型的肥大细胞。这些不同类型的肥大细胞可能在移植排斥反应中担负着不同的功能。
参考文献
1 Schaffer FL，Weg VB.Mast cells，eosinophils and fibrosis.Clin Exp Allergy，1997，27：64
2 Murphy GF，Sueki H，Teuscher C.Role of mast cells in early epithelial target cell injury in experimental acute graft versus host disease.J Invest Dermatol，1994，102：451
3 Yousem SA.The potential role of mast cells in lung allograft rejection.Hum Pathology，1997，28：179
, 百拇医药
4 Buvry A，Garbarg M，Dimitriadou V.Phenotypic and quantitative changes in mast cells after syngeneic unilateral lung transplantation in the rat.Clin Science，1996，91：319
5 凌启波.实用病理特殊染色和组化技术.广东高等教育出版社.广州：广东教育出版社，1989.142-145
6 Frandji P，Oskeritzian C，Cacaraci F.Antigen dependent stimulation by bone marrow derived mast cells of MHC class Ⅱ restricted T cell hybridoma.J Immunol.1993，151：6318
7 Kirshenbaum AS，Kessler SW，Goff JP.Demonstration of the origin of human mast cells from CD34+ bone marrow progenitor cells.J Immunol，1991，146：1410
, 百拇医药
8 Metcalfe DD，Baram D，Mekori YA.Mast cells.Physiol Reviews.1997，77：1033
9 Smith TJ，Weis JH.Mucosal T cells and mast cells share common adhesion receptors.Immunol Today，1996，17：60
10 Mecheri S，David B.Unravelling the mast cell dilemma：culprit or victim of its generosity.Immunol Today，1997，18：212
11 Dimitriadou V，Rouleau A，Toung MDT.Functional relationship between mast cells and C sensitive nerve fibres evidenced by histamine H3 receptor modulation in rat lung and spleen.Clin Science，1994，87：151
12 He S，Walls AF.Human mast cell tryptase：a stimulus of microvascular leakage and mast cell activation.Eur J Pharmacol，1997，328：89
(1998-12-29收稿，1999-02-01修回), http://www.100md.com