胃癌浸润转移与纤维结合蛋白含量表达相关性研究
作者：高洪文 张冬梅1 许传杰
单位：白求恩医科大学第二临床学院病理科，长春 130041
关键词：胃肿瘤；纤维结合蛋白；肿瘤转移
中国老年学杂志/990315 摘 要 目的 探讨纤维结合蛋白(Fibronectin FN)含量、表达与胃癌浸润转移的关系。方法 应用琼脂糖单向免疫扩散法和免疫酶染色ABC法检测胃癌病人血清中FN的含量及其在组织中的表达。结果 肿瘤病人血清中FN含量明显低于对照组，而且胃癌转移组其血清FN含量及组织中FN表达程度与非转移组间亦有明显不同(P<0.01)。结论 胃癌浸润转移与FN含量、表达有关，血清中FN含量及组织中FN表达程度可作为反映胃癌生物学行为的指标之一。
The infiltration and metastasis of gastric
, 百拇医药
carcinoma and t heir correlation with the
amount and expression of Fibronectin
Gao Hongwen,Zhang Dongmei,Xu Chuanjie
The Second Clinical Hospital,Bethune University of Medical Sciences,Changchun 13 0041
Objective To investigate the correlation quantitatively b etwe en expression of Fibronectin(FN) and the infiltration and metastasis of gastric carcinoma(GC).Methods Agar single diffusion and immunohis toch emical techniques were amployed to detect the fibronectin amount in blood and ex epression in tissue of the GC patients.Results The amount FN in blood of the Gc cases was obviously lower than the control,Fibronectin centen ts in blood and the expression in tissue in gc group with metastasis were signif icantly different with those in the nonmetastasis group(P<0.01).Conclusions The amount and expression FN is related to th e in filtration and metastasis of GC,and may be one of the biological behavior predic tors of GC.
, 百拇医药
Key words Stomach neoplasms Fibronectin Cancer matast asis
目前已发现了一些分子与肿瘤浸润过程中粘附、降解及移动有关〔1〕。肿瘤的恶性表型——浸润和转移是肿瘤细胞内在特性及其与细胞外基质相互作用的结果〔2〕。纤维结合蛋白(FN)是细胞外基质一种，它在体内的质和量与细胞转化及肿瘤的发生、发展、浸润和转移有关。研究发现，FN与肝癌、肺癌及膀胱癌的浸润转移密切相关〔3〕，所以，研究肿瘤病人组织及血清中纤维结合蛋白的表达及含量有重要意义。FN在胃癌中含量表达及其关系国内尚未见报道。因此，我们应用FN作为标记物探讨其与胃癌浸润转移的关系，兹将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源 胃癌病人血清及胃癌组织标本均由我院住院病人提供，均有病理诊断。胃癌病人40例，男31例，女9例，年龄52～73岁，平均年龄61.2岁，正常人血清来源于献血员。
, 百拇医药
1.2 试剂 FN单克隆抗体及ABC试剂购自北京中山生物工程公司。
1.3 FN检测方法 胃癌病人血清中FN检测采用琼脂糖单向免疫扩散法。
1.4 胃癌组织中FN表达检测 癌组织经10%中性福尔马林固定，常规制成蜡块，4 μm厚切片，二甲苯脱蜡、梯度酒精水化，3%过氧化氢-甲醇溶液处理30 min，除去内源性酶→1%牛血白蛋白保护20 min(室温)→加FN单克隆抗体于4 ℃下过夜，次日取出加生物素化抗鼠IgG，37 ℃温育90 min→取出加ABC酶复合物37 ℃温育90 min加DAB底物，室温避光10 min→苏木素复染，中间每一步均用PBS洗3次，每次5 min，梯度酒精脱水，二甲苯透明、封片。每一批均设阴性、阳性对照，光镜下判定结果。根据张荫昌法〔4〕：细胞膜及基底膜呈棕黄色为“
”、深黄色“
”、淡黄色“+”、无黄色为阴性“-”。
, 百拇医药
1.5 统计学方法 χ2和t检验。
2 结 果
2.1 胃癌组血清中FN含量明显低于健康对照组(P<0.01)，见表1。
表1 胃癌患者血清中FN含量(μg/ml)
n
±s
P值
胃癌组
40
265.13±25.38
<0.01
, 百拇医药
对照组
50
323.64±28.21
2.2 转移组血清中FN含量明显低于未转移组，两组间差异非常显著，见表2。表2 转移癌组与未转移癌组血清中FN含量(μg/ml)
n
±s
P值
转移癌组
18
196.21±30.11
<0.01
, 百拇医药
未转移癌组
22
272.78±27.36
2.3 转移组FN的阳性表达率为55%，阳性表达度以“+”为主；而非转移组FN的阳性表达率为86%，阳性表达度以“+～”为主，见表3。表3 转移癌与未转移癌组织中FN的表达
n
FN表达强度
P值
-
+
, 百拇医药
转移癌组
18
8
7
2
1
<0.01
未转移癌组
22
3
7
9
3
3 讨 论
, 百拇医药
FN是一种高分子糖蛋白，分子量230～270KD，它具有非免疫调理素作用，又称为调理性α2表面结合糖蛋白(opsonic α2-surface binging glucoprotein)。可传递细胞与细胞之间的反应，使细胞粘附及伸展〔5〕，保持组织的完整性而发挥作用，循环中的FN进入血管组织成为粘附的多体型(multi-meric form)〔6〕。
本研究应用琼脂糖单向免疫扩散法和免疫酶染色ABC法检测胃癌病人血清中FN的含量及其FN在胃癌组织中的表达，结果表明：胃癌病人血清中FN含量明显低于健康对照组，差异非常显著。此外我们还分析了胃转移癌与非转移癌之间FN的含量，结果两组间差异亦非常显著。在胃癌组织中FN的表达，胃转移癌阳性表达率为55%，而未转移癌FN的阳性表达率为86%，而且在表达的阳性强度两组间差异亦非常显著。本实验结果表明转移癌无论血清还是组织中FN均减少或消失，这种变化有两种可能，即FN的合成减少或FN的降解增强所致。从而导致运转力下降及细胞表面结合力受损，有利于癌细胞逃离原发部位，在组织间形成迁移，形成新的转移灶。
, 百拇医药
FN在胃癌组织中的表达特点，胃未转移癌FN阳性表达部位于细胞膜及基底膜的界面呈完整的线状表达，胞浆也呈淡染，而间质呈阴性反应。而转移癌FN呈弱表达或消失，从而证实FN的表达是参与肿瘤浸润-转移的一种重要物质。因此，进一步研究它们的基因调控，研究它们竞争性抑制物，将有助于阐明肿瘤浸润转移的机制。FN与胃癌浸润转移密切相关，随着FN的合成肽研究及在动物实验中的深入，将抗粘附治疗用于临床，为抑制肿瘤的浸润转移提供一条新的治疗途径。
1 血液化疗科
作者简介：高洪文，32岁，硕士，主治医师，从事肿瘤病理学研究
4 参考文献
1 司殿生，王一理.粘附分子及其在病理学中的作用.中华病理学杂志，1994；23(4)：245
2 姜希宏，张 军，马 榕.粘附分子与乳腺癌的侵袭和转移.国外医学*肿瘤学分册，1988；25(2)：103
, http://www.100md.com
3 陈嘉薇，张艳梅，薛玉华.层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在肺癌中的分布和意义.中华肿瘤杂志，1996；18(4)：298
4 张荫昌，闫瑞芳，吕化仙.胃癌单克隆抗体83YH2在胃癌的免疫细胞化学检查.中华肿瘤学杂志，1986；8(3)：161
5 徐燕杰，王政民.纤维粘连蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达.肿瘤治疗研究，1994；21(3)：210
6 孔宪涛.细胞粘附分子.国外医学*分子生物学分册，1994；16(1)：1
〔1998-11-24收稿 1999-01-26修回〕, 百拇医药(高洪文 张冬梅1 许传杰)
单位：白求恩医科大学第二临床学院病理科，长春 130041
关键词：胃肿瘤；纤维结合蛋白；肿瘤转移
中国老年学杂志/990315 摘 要 目的 探讨纤维结合蛋白(Fibronectin FN)含量、表达与胃癌浸润转移的关系。方法 应用琼脂糖单向免疫扩散法和免疫酶染色ABC法检测胃癌病人血清中FN的含量及其在组织中的表达。结果 肿瘤病人血清中FN含量明显低于对照组，而且胃癌转移组其血清FN含量及组织中FN表达程度与非转移组间亦有明显不同(P<0.01)。结论 胃癌浸润转移与FN含量、表达有关，血清中FN含量及组织中FN表达程度可作为反映胃癌生物学行为的指标之一。
The infiltration and metastasis of gastric
, 百拇医药
carcinoma and t heir correlation with the
amount and expression of Fibronectin
Gao Hongwen,Zhang Dongmei,Xu Chuanjie
The Second Clinical Hospital,Bethune University of Medical Sciences,Changchun 13 0041
Objective To investigate the correlation quantitatively b etwe en expression of Fibronectin(FN) and the infiltration and metastasis of gastric carcinoma(GC).Methods Agar single diffusion and immunohis toch emical techniques were amployed to detect the fibronectin amount in blood and ex epression in tissue of the GC patients.Results The amount FN in blood of the Gc cases was obviously lower than the control,Fibronectin centen ts in blood and the expression in tissue in gc group with metastasis were signif icantly different with those in the nonmetastasis group(P<0.01).Conclusions The amount and expression FN is related to th e in filtration and metastasis of GC,and may be one of the biological behavior predic tors of GC.
, 百拇医药
Key words Stomach neoplasms Fibronectin Cancer matast asis
目前已发现了一些分子与肿瘤浸润过程中粘附、降解及移动有关〔1〕。肿瘤的恶性表型——浸润和转移是肿瘤细胞内在特性及其与细胞外基质相互作用的结果〔2〕。纤维结合蛋白(FN)是细胞外基质一种，它在体内的质和量与细胞转化及肿瘤的发生、发展、浸润和转移有关。研究发现，FN与肝癌、肺癌及膀胱癌的浸润转移密切相关〔3〕，所以，研究肿瘤病人组织及血清中纤维结合蛋白的表达及含量有重要意义。FN在胃癌中含量表达及其关系国内尚未见报道。因此，我们应用FN作为标记物探讨其与胃癌浸润转移的关系，兹将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源 胃癌病人血清及胃癌组织标本均由我院住院病人提供，均有病理诊断。胃癌病人40例，男31例，女9例，年龄52～73岁，平均年龄61.2岁，正常人血清来源于献血员。
, 百拇医药
1.2 试剂 FN单克隆抗体及ABC试剂购自北京中山生物工程公司。
1.3 FN检测方法 胃癌病人血清中FN检测采用琼脂糖单向免疫扩散法。
1.4 胃癌组织中FN表达检测 癌组织经10%中性福尔马林固定，常规制成蜡块，4 μm厚切片，二甲苯脱蜡、梯度酒精水化，3%过氧化氢-甲醇溶液处理30 min，除去内源性酶→1%牛血白蛋白保护20 min(室温)→加FN单克隆抗体于4 ℃下过夜，次日取出加生物素化抗鼠IgG，37 ℃温育90 min→取出加ABC酶复合物37 ℃温育90 min加DAB底物，室温避光10 min→苏木素复染，中间每一步均用PBS洗3次，每次5 min，梯度酒精脱水，二甲苯透明、封片。每一批均设阴性、阳性对照，光镜下判定结果。根据张荫昌法〔4〕：细胞膜及基底膜呈棕黄色为“
”、深黄色“”、淡黄色“+”、无黄色为阴性“-”。, 百拇医药
1.5 统计学方法 χ2和t检验。
2 结 果
2.1 胃癌组血清中FN含量明显低于健康对照组(P<0.01)，见表1。
表1 胃癌患者血清中FN含量(μg/ml)
n
±sP值
胃癌组
40
265.13±25.38
<0.01
, 百拇医药
对照组
50
323.64±28.21
2.2 转移组血清中FN含量明显低于未转移组，两组间差异非常显著，见表2。表2 转移癌组与未转移癌组血清中FN含量(μg/ml)
n
±sP值
转移癌组
18
196.21±30.11
<0.01
, 百拇医药
未转移癌组
22
272.78±27.36
2.3 转移组FN的阳性表达率为55%，阳性表达度以“+”为主；而非转移组FN的阳性表达率为86%，阳性表达度以“+～
”为主，见表3。表3 转移癌与未转移癌组织中FN的表达n
FN表达强度
P值
-
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, 百拇医药
转移癌组
18
8
7
2
1
<0.01
未转移癌组
22
3
7
9
3
3 讨 论
, 百拇医药
FN是一种高分子糖蛋白，分子量230～270KD，它具有非免疫调理素作用，又称为调理性α2表面结合糖蛋白(opsonic α2-surface binging glucoprotein)。可传递细胞与细胞之间的反应，使细胞粘附及伸展〔5〕，保持组织的完整性而发挥作用，循环中的FN进入血管组织成为粘附的多体型(multi-meric form)〔6〕。
本研究应用琼脂糖单向免疫扩散法和免疫酶染色ABC法检测胃癌病人血清中FN的含量及其FN在胃癌组织中的表达，结果表明：胃癌病人血清中FN含量明显低于健康对照组，差异非常显著。此外我们还分析了胃转移癌与非转移癌之间FN的含量，结果两组间差异亦非常显著。在胃癌组织中FN的表达，胃转移癌阳性表达率为55%，而未转移癌FN的阳性表达率为86%，而且在表达的阳性强度两组间差异亦非常显著。本实验结果表明转移癌无论血清还是组织中FN均减少或消失，这种变化有两种可能，即FN的合成减少或FN的降解增强所致。从而导致运转力下降及细胞表面结合力受损，有利于癌细胞逃离原发部位，在组织间形成迁移，形成新的转移灶。
, 百拇医药
FN在胃癌组织中的表达特点，胃未转移癌FN阳性表达部位于细胞膜及基底膜的界面呈完整的线状表达，胞浆也呈淡染，而间质呈阴性反应。而转移癌FN呈弱表达或消失，从而证实FN的表达是参与肿瘤浸润-转移的一种重要物质。因此，进一步研究它们的基因调控，研究它们竞争性抑制物，将有助于阐明肿瘤浸润转移的机制。FN与胃癌浸润转移密切相关，随着FN的合成肽研究及在动物实验中的深入，将抗粘附治疗用于临床，为抑制肿瘤的浸润转移提供一条新的治疗途径。
1 血液化疗科
作者简介：高洪文，32岁，硕士，主治医师，从事肿瘤病理学研究
4 参考文献
1 司殿生，王一理.粘附分子及其在病理学中的作用.中华病理学杂志，1994；23(4)：245
2 姜希宏，张 军，马 榕.粘附分子与乳腺癌的侵袭和转移.国外医学*肿瘤学分册，1988；25(2)：103
, http://www.100md.com
3 陈嘉薇，张艳梅，薛玉华.层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在肺癌中的分布和意义.中华肿瘤杂志，1996；18(4)：298
4 张荫昌，闫瑞芳，吕化仙.胃癌单克隆抗体83YH2在胃癌的免疫细胞化学检查.中华肿瘤学杂志，1986；8(3)：161
5 徐燕杰，王政民.纤维粘连蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达.肿瘤治疗研究，1994；21(3)：210
6 孔宪涛.细胞粘附分子.国外医学*分子生物学分册，1994；16(1)：1
〔1998-11-24收稿 1999-01-26修回〕, 百拇医药(高洪文 张冬梅1 许传杰)