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编号:10220699
急性胰腺炎鼠血清一氧化氮的测定及意义
http://www.100md.com 《广东医学院学报》 1999年第3期
     作者:汪根树 刘维藩 李明意

    单位:广东医学院附属医院肝胆外科,湛江524001

    关键词:胰腺炎急性;一氧化氮;动物;实验

    广东医学院学报990306摘要 目的:检测急性胰腺炎(AP)鼠血清NO浓度 并讨论其意义。方法:Wistar大鼠56只随机分为实验组(30只)和对照组(26只)。经胰胆管注射牛磺胆酸钠诱发大鼠急性胰腺炎模型。术后6h、12h测定各组鼠血清NO浓度。结果:AP鼠血清NO水平明显升高(P<0.001)。结论:NO参与了AP的病理生理过程 。

    中图分类号: R 657.51

    Determination of serum nitric oxide in r ats with acute pancreatitis
, 百拇医药
    and its significance

    Wang Gengshu,Liu Weifang,Li Mingyi

    (Hepatobiliary Department of Affiliate d Hospital of Guangdong Medical Coll ege.Zhan jiang 524001)

    Abstract Objective:To detect s erum nitric oxide of rats with acute p ancreatitis (AP)and discuss its sign ificance.Methods:Fifty- six Wistar rats were divided randomly into AP Grou p (n=30) and control Group(n=26).AP was induced by injection of 4.5% sodi um taurocholate into the pancreatobi liary duct.Serum NO was detected at 6 and 12 hours after operation.R esults: Serum NO of rats with AP was significantly higher than that of rats i n control Group (P<0.001).Conc lusion: Nitric oxide might have a r ole in pathogenesis of AP.
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    Key words:pancreatitis,acute;nit ric oxide ;animals,laboratory

    一氧化氮(NO)是由血管内皮细胞合成释放的一种血管扩张因子,是一种重要的细胞内信使。其化学性质极为活泼,作为一种血管扩张剂和氧自由基,在各种炎症、脓毒血症等疾病的病理生理过程中起重要的作用。本实验检测急性胰腺炎(AP)鼠血清中NO的浓度并探讨其意义。

    1 材料和方法

    1.1 大鼠急性胰腺炎模型制备与分组 雄性Wistar大鼠56只(体重360~520g)随机分为实验组30只和对照组26只。术前12 h禁食。2%戊巴比妥1.0mL/kg体重腹腔注射麻醉,固定。经上腹正中切口进腹,提起十二指肠,用小血管夹分别夹住肝门部胆管及十二指肠端胰胆管。在肝门部用4.5号针穿刺胰胆管,注射4.5%牛磺胆酸钠2mL/kg体重,停留5min后拔出针头。即刻可见胰腺表面充血水肿,范围渐增大,随后片状发黑。对照组同样进腹后仅翻动胃和十二指肠。
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    1.2 标本收集 各组大鼠术后6h、12h分两批剖杀,用一次性5mL注射器吸取消炎痛-EDTA。Na2液约0.1mL后经下腔静脉穿刺抽血约5mL,颠倒混匀后注入试管,4°C离心3500 r/min)15min,分离血浆,置-20°C冰箱保存待测。取胰腺组织用10%福尔马林固定送病检。

    1.3 NO浓度测定 NO测定试剂盒购于南京聚力生物医学工程研究所,按其说明书检测。

    1.4 统计学处理 结果用±s表示,采用t’检验。

    2 结果

    实验组Wistar大鼠于注射牛磺胆酸6h及12h后,腹腔内有数量不等的血性腹水,12h量多于6 h,胰腺明显充血水肿,随后出血、呈片状发黑。病理学检查见胰腺水肿、大量炎症细胞浸润,呈灶状或大片状出血坏死,其周围小血管内可见微血栓形成。NO浓度测定结果见表1。
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    表1 两组Wistar大鼠血清NO浓度的比较

    (±s,c/(μ mol.L-1))

    组别

    n

    6h

    12h

    实验组

    30

    151.25±12.16*

    168.26±14.12*
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    对照组

    26

    42.18±5.96

    37.85± 6.32

    *与对照组比较,P均<0.001。

    3 讨论

    AP多为一种自限性疾病,约15%的患者可能发展为重症急性胰腺炎(SAP)。SAP病情凶险,进展迅猛,病死率高达40%,为外科常见严重急腹症之一。传统认为AP的发病是胰酶“自身消化”的结果。近年的研究表明,各种炎症介质如血小板激活因子(PAF)、磷脂酶A2(PLA2)、IL-1、IL-6、 IL-8、IL-10、TNF等在AP尤其是SAP中起重要作用[1~3]。本实验结果显示SAP鼠血清NO水平明显增高,提示NO也参与了SAP的发病过程。
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    NO源于血管内皮细胞,是一种无机小分子化合物,具广泛的生物学活性,在调节人体正常生理功能及许多疾病中起重要作用。NO化学性质极为活泼,在有氧及水的环境中很快转化为硝酸盐和亚硝酸盐。后两者性质稳定,已被证实为反映NO水平的良好指标。内源性NO通过左旋精氨酸-NO途径合成并释放。已证明至少存在两种NO合成酶:一是主要分布于血管内皮细胞和神经细胞的结构型NO合成 酶(cNOS);二是主要分布于血管内皮细胞和单核巨噬细胞的诱导型NO合成酶(iNOS)。前者产生适量NO以调节外周血管张力和血压等生理过程。后者在内毒素、TNF、IL-1、IL-2等刺激下产生过量NO可使外周血管持续 性扩张导致休克,并与多种酶尤其是线粒体酶相互作用,具有细胞毒性,且可改变免疫反应性[4~6]。近年认为NO是炎症反应时炎介质瀑布样连锁反应的终未 共同介质之一,在感染性休克时起关键作用。在炎症局部,NO有抗炎、杀菌等保 护作用。而在全身,它对机体有破坏作用,与发热等全身炎症反应综合症(SIR S)有关[7]。当炎症刺激过强或持续时间过长,NO释放过量,不仅引起发热,还可导致外周血管扩张和难治性休克,诱发多器官功能障碍。NO还可使机体免疫功能低下,增加对感染的易感性[8]
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    本实验中,AP鼠血清NO浓度高于对照组,可能由于AP时内毒素血症及TNF、IL-1等介质的释放激活了iNOS,大量NO释放,参与AP的各种病理过程。S AP时出现休克、MOF及感染,可能与NO扩张血管、细胞毒性及降低机体免疫力有关。AP早期少量NO释放,由于其抗炎、杀菌作用,对机体可能有保护作用。 如治疗不当或延误,内毒素血症加重,TNF、IL-1等释放增多,刺激机体放 大量NO,则促进休克、MOF及感染的发生和AP由水肿型转化为SAP。

    目前已知肾上腺糖皮质激素、酪氨酸激酶抑制剂、IL-4、IL-10、巨噬细胞灭活因子等能选择性抑制iNOS的表达,硝基-L-精氨酸(L-NNA)、单甲基-L-精氨酸(L-NAME)等可竞争性抑制cNOS和iNOS。根据 本实验,这些药物对SAP可能有治疗作用,值得进一步研究。

    4 参考文献

    1 Tenner S,Banks PA.Acute pancreat itis:nonsurgical management.World J Su rg,1997,21:143
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    2 Formela LJ,Galloway SW,Kingsnorth AN.Inflammatory mediators in acute pancreatitis.Br J Surg,1995,82:6

    3 Kingsnorth AN,Galloway SW,Formela LJ.Randomised double blind phase Ⅱ t rial of lexipafant,a platelet activa ting factor antagonist in human acut e pancreatitis.Br J Surg,1995,82:141 4

    4 Fosterman V,Schmidt HH,Pollok JS, et al.Isoforms of nitric oxide synth ase:characterization and purificatio n from different cell type.Biochem P harmacol,1991,42:1849
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    5 邱海波,陈德昌.一氧化氮生物作用的两面性与多器官功能障碍综合征.基础 医学与临床,1998,18:11

    6 Cunha FQ,Assreuy J,Moss DW,et al.D ifferential induction of nitric oxid e synthase in various organs of the mouse during endotoxemia:role of TNF -alpha and IL-1-beta et al.Immunolog y,1994,46:211

    7 龙海波,张训,候凡凡.一氧化氮及其抑制剂在内毒素休克中的作用.国外医 学生理病学与临床分册,1996,16:142

    8 Natanson C,Hoffman WD,Suffredini A F,et al.Selected treatment strategie s for septic shock based on proposed mechanisms of pathogenesis.Ann Inte rn Med,1994,129:771

    收稿日期:1998-12-06, http://www.100md.com