一氧化氮对内毒素致肺微血管高通透性的保护作用*
作者：刘艳梅 张君岚 王殿华 凌亦凌 黄善生
单位：河北医科大学病理生理教研室(石家庄050017)
关键词：一氧化氮/分析；内毒素类/毒性；毛细血管通透性；肺
河北医科大学学报990316 中图号 R363.13;R563.8
急性肺损伤(acute lung injury，ALI)是临床常见危重病症，也是全身性炎症反应综合征(system inflammation response syndrome，SIRS)、多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome，MODS) 时最多出现的一种器官组织损伤。肺微血管通透性的增高是大肠杆菌脂多糖(lipopolysaccharides，LPS) 及其它原因致ALI 的基本病理生理过程之一。大量中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophils，PMN)在肺内聚集是其主要发生机制之一。因此有效减少PMN 在肺内的聚集,降低肺微血管通透性是防治LPS致ALI的重要环节。目前研究表明，一氧化氮(nitric oxide，NO)具有维持正常微血管内皮完整性的作用，而NO对微血管通透性的病理生理作用迄今尚无定论，尤其随着吸入NO应用于临床治疗，对于该问题的探讨更加引起关注。本研究采用气管内滴注给药，研究NO供体硝普钠(sodium nitroprusside，SNP)对LPS致ALI时肺微血管高通透性的作用，及其与肺内聚集的PMN之间的关系，以进一步研究通过促进PMN凋亡这一非炎性清除PMN方式来控制炎症反应过程减轻ALI 的机制，并为吸入NO的临床应用提供实验及理论依据。
, 百拇医药
1 材料和方法
SD大鼠，体质量200～250 g，雌雄不拘。实验分3组：假手术组(Sham组，n=7)，每只气管内滴注无菌生理盐水200 μl；内毒素组(LPS组，n=7)，每只气管内滴注LPS100 μg；内毒素+硝普钠组(LPS+SNP组,n=6),每只气管内同时滴注LPS100 μg+SNP5 μg)。滴注液体量均为200 μl。各组均采用乙醚吸入麻醉，无菌手术暴露气管，用7号针头行气管内穿刺、滴注无菌生理盐水或药物，缝合切口。术后6 h放血处死动物，行支气管肺泡灌洗。观测支气管肺泡灌洗液(bronchialveolar lavage fluid,BALF)中蛋白含量(改良酚试剂法)和PMN数目、肺组织内伊文思兰含量和肺组织形态学变化及染料单星蓝(monastral blue)的分布以评价肺损伤及微血管通透性的变化。统计学处理：数据用均数±标准误(
±
)表示。BALF中蛋白含量、肺组织中伊文思兰含量的结果用两样本均数比较t检验。BALF中PMN 数目用t′检验。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 BALF中蛋白含量：与Sham组相比，气管内滴注LPS组BALF中蛋白含量明显增加(38.306±4.841) μg/ml vs (95.216±7.234) μg/ml，P<0.01)；与LPS组相比LPS+SNP组降低至(74.962±6.123) μg/ml(P<0.05)，但仍明显高于Sham组(P<0.01)。
2.2 肺组织中伊文思兰含量：与Sham组相比，气管内滴注 LPS组肺组织中伊文思兰含量明显增加(29.513±1.568) μg/ml vs (40.593±3.193) μg/ml，P<0.01)；与 LPS组相比LPS+SNP组降低至(30.982±1.244) μg/ml(P<0.05),且和Sham组相比无显著差别(P>0.05)。
2.3 肺组织形态学及染料单星蓝分布的变化：高倍镜下可见LPS组肺泡萎陷,甚至消失，肺泡腔及间质内弥漫性炎细胞(PMN)浸润，部分区域有代偿性肺气肿，肺间质中可见较多的杆状、针状染料单星蓝颗粒的分布。SNP使肺损伤减轻，肺间质中染料单星蓝颗粒较LPS组减少。
, http://www.100md.com
2.4 BALF中PMN数目：与Sham组相比，气管内滴注LPS后使BALF中PMN数目显著增加(0.002±0.001)×106/ml vs (2.134±0.285)×106/ml,P<0.01) ；与LPS组相比LPS+SNP组降低至(0.532±0.069)×106/ml(P<0.01),但仍明显高于Sham组(P<0.01)。以上结果表明气管内滴注LPS可致大量PMN在肺内扣押并增高肺微血管通透性，而SNP则可减轻PMN在肺内的聚集并降低LPS所致肺微血管高通透性。
3 讨 论
本实验证实LPS气管内滴注可致大量PMN扣押在肺组织中，并参与ALI和肺微血管高通透性的发生，具体表现为BALF中蛋白含量及肺组织中伊文思兰含量的增多，且肺组织出现明显的ALI的形态学变化。而NO供体硝普钠可通过影响PMN在肺内的聚集，减轻肺损伤，降低肺微血管高通透性。说明PMN可能是造成ALI时肺微血管高通透性的重要效应细胞之一，NO通过减轻PMN在肺内的聚集而对LPS致ALI、肺微血管高通透性起到保护作用。
* 国家自然科学基金资助项目课题(No.39770311)
(1999-02-05 收稿), 百拇医药
单位：河北医科大学病理生理教研室(石家庄050017)
关键词：一氧化氮/分析；内毒素类/毒性；毛细血管通透性；肺
河北医科大学学报990316 中图号 R363.13;R563.8
急性肺损伤(acute lung injury，ALI)是临床常见危重病症，也是全身性炎症反应综合征(system inflammation response syndrome，SIRS)、多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome，MODS) 时最多出现的一种器官组织损伤。肺微血管通透性的增高是大肠杆菌脂多糖(lipopolysaccharides，LPS) 及其它原因致ALI 的基本病理生理过程之一。大量中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophils，PMN)在肺内聚集是其主要发生机制之一。因此有效减少PMN 在肺内的聚集,降低肺微血管通透性是防治LPS致ALI的重要环节。目前研究表明，一氧化氮(nitric oxide，NO)具有维持正常微血管内皮完整性的作用，而NO对微血管通透性的病理生理作用迄今尚无定论，尤其随着吸入NO应用于临床治疗，对于该问题的探讨更加引起关注。本研究采用气管内滴注给药，研究NO供体硝普钠(sodium nitroprusside，SNP)对LPS致ALI时肺微血管高通透性的作用，及其与肺内聚集的PMN之间的关系，以进一步研究通过促进PMN凋亡这一非炎性清除PMN方式来控制炎症反应过程减轻ALI 的机制，并为吸入NO的临床应用提供实验及理论依据。
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1 材料和方法
SD大鼠，体质量200～250 g，雌雄不拘。实验分3组：假手术组(Sham组，n=7)，每只气管内滴注无菌生理盐水200 μl；内毒素组(LPS组，n=7)，每只气管内滴注LPS100 μg；内毒素+硝普钠组(LPS+SNP组,n=6),每只气管内同时滴注LPS100 μg+SNP5 μg)。滴注液体量均为200 μl。各组均采用乙醚吸入麻醉，无菌手术暴露气管，用7号针头行气管内穿刺、滴注无菌生理盐水或药物，缝合切口。术后6 h放血处死动物，行支气管肺泡灌洗。观测支气管肺泡灌洗液(bronchialveolar lavage fluid,BALF)中蛋白含量(改良酚试剂法)和PMN数目、肺组织内伊文思兰含量和肺组织形态学变化及染料单星蓝(monastral blue)的分布以评价肺损伤及微血管通透性的变化。统计学处理：数据用均数±标准误(
±)表示。BALF中蛋白含量、肺组织中伊文思兰含量的结果用两样本均数比较t检验。BALF中PMN 数目用t′检验。, 百拇医药
2 结 果
2.1 BALF中蛋白含量：与Sham组相比，气管内滴注LPS组BALF中蛋白含量明显增加(38.306±4.841) μg/ml vs (95.216±7.234) μg/ml，P<0.01)；与LPS组相比LPS+SNP组降低至(74.962±6.123) μg/ml(P<0.05)，但仍明显高于Sham组(P<0.01)。
2.2 肺组织中伊文思兰含量：与Sham组相比，气管内滴注 LPS组肺组织中伊文思兰含量明显增加(29.513±1.568) μg/ml vs (40.593±3.193) μg/ml，P<0.01)；与 LPS组相比LPS+SNP组降低至(30.982±1.244) μg/ml(P<0.05),且和Sham组相比无显著差别(P>0.05)。
2.3 肺组织形态学及染料单星蓝分布的变化：高倍镜下可见LPS组肺泡萎陷,甚至消失，肺泡腔及间质内弥漫性炎细胞(PMN)浸润，部分区域有代偿性肺气肿，肺间质中可见较多的杆状、针状染料单星蓝颗粒的分布。SNP使肺损伤减轻，肺间质中染料单星蓝颗粒较LPS组减少。
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2.4 BALF中PMN数目：与Sham组相比，气管内滴注LPS后使BALF中PMN数目显著增加(0.002±0.001)×106/ml vs (2.134±0.285)×106/ml,P<0.01) ；与LPS组相比LPS+SNP组降低至(0.532±0.069)×106/ml(P<0.01),但仍明显高于Sham组(P<0.01)。以上结果表明气管内滴注LPS可致大量PMN在肺内扣押并增高肺微血管通透性，而SNP则可减轻PMN在肺内的聚集并降低LPS所致肺微血管高通透性。
3 讨 论
本实验证实LPS气管内滴注可致大量PMN扣押在肺组织中，并参与ALI和肺微血管高通透性的发生，具体表现为BALF中蛋白含量及肺组织中伊文思兰含量的增多，且肺组织出现明显的ALI的形态学变化。而NO供体硝普钠可通过影响PMN在肺内的聚集，减轻肺损伤，降低肺微血管高通透性。说明PMN可能是造成ALI时肺微血管高通透性的重要效应细胞之一，NO通过减轻PMN在肺内的聚集而对LPS致ALI、肺微血管高通透性起到保护作用。
* 国家自然科学基金资助项目课题(No.39770311)
(1999-02-05 收稿), 百拇医药