金黄色葡萄球菌L型诱导方法改进
作者：曹月升 张立志 刘朱梅
单位：河北省人民医院细菌室(石家庄050051)
关键词：葡萄球菌，金黄色；培养基
河北医科大学学报990331 中图号 R446.5
人工诱导金黄色葡萄球菌L型的方法曾有不少报道,作者仿效其试验,效果均不理想。在诸多资料启发下,对现行方法做了一些改进,结果比较满意,现报道如下。
1 材料与方法
1.1 菌株:金黄色葡萄球菌(ATCC 25923卫生部提供及由患者标本中分离所得)。
1.2 L型液体培养基:于牛肉浸液中加入2 g/dl蛋白胨,4.5 g/dl NaCl,混匀加热溶解后,调整pH7.6,121 ℃高压灭菌15 min,然后按10 %比例加入马血清或人血浆,分装试管。
1.3 L型固体培养基:同上,含琼脂0.8 g/dl。
1.4 抗生素纸片:新青霉素Ⅱ(50 μg/片)。
1.5 将L型液体培养基分装于①～⑤号试管中,在5个管中分别加入浓度为0.2万、0.4万、0.8万、1.6万、3.2万μ/ml的青霉素钠盐。
1.6 将金葡菌接种于普通肉汤中增菌,孵育18 h,吸取0.2 ml增菌液置第①管L型液体培养基中,35 ℃孵育3天后,取0.1 ml培养液置第②管中,再孵育3天后取0.1 ml培养液置第③管中……,如此连续转种至第⑤管孵育后,挑取其棉絮样沉淀,移种于L型固体培养基,用L型玻棒涂于整个平板,平板中央贴加新青霉素Ⅱ纸片。
1.7 35 ℃在CO2体积分数5 %的孵箱孵育。
2 结果与讨论
培养48 h后用低倍镜观察,可见典型的“油煎蛋”状菌落布满于抗生素纸片周围,此即金黄色葡萄球菌L型菌落。取针尖样的菌落进行革兰氏染色、胞壁染色及返祖试验。革兰氏染色呈染色不均匀的圆球体;胞壁染色菌体染成深紫色;接种普通肉汤1周后,转种血平板及L型平板,于L型平板上仍可见L型菌落。
实验结果表明,细菌L型变异受培养条件和诱导方法的多种因素影响,其中尤以抗生素的浓度最为重要。作者曾多次在具备培养条件下,用不同的单一的抗生素浓度进行诱导,均未成功。而在将抗生素的浓度由低到高逐渐加大,将菌液浓度由高到低逐渐减少,多次连续传代的情况下,取得了满意的效果。分析认为,细菌转变为L型是细菌对抗生素耐变、适应的结果,是亚致死损伤所致细胞壁破裂后的一种稳定的生存形态。抗生素的浓度变化过程,给细菌的适应、衍化以至L型的形成创造了有利条件。
(1998-08-01 收稿), 百拇医药
单位：河北省人民医院细菌室(石家庄050051)
关键词：葡萄球菌，金黄色；培养基
河北医科大学学报990331 中图号 R446.5
人工诱导金黄色葡萄球菌L型的方法曾有不少报道,作者仿效其试验,效果均不理想。在诸多资料启发下,对现行方法做了一些改进,结果比较满意,现报道如下。
1 材料与方法
1.1 菌株:金黄色葡萄球菌(ATCC 25923卫生部提供及由患者标本中分离所得)。
1.2 L型液体培养基:于牛肉浸液中加入2 g/dl蛋白胨,4.5 g/dl NaCl,混匀加热溶解后,调整pH7.6,121 ℃高压灭菌15 min,然后按10 %比例加入马血清或人血浆,分装试管。
1.3 L型固体培养基:同上,含琼脂0.8 g/dl。
1.4 抗生素纸片:新青霉素Ⅱ(50 μg/片)。
1.5 将L型液体培养基分装于①～⑤号试管中,在5个管中分别加入浓度为0.2万、0.4万、0.8万、1.6万、3.2万μ/ml的青霉素钠盐。
1.6 将金葡菌接种于普通肉汤中增菌,孵育18 h,吸取0.2 ml增菌液置第①管L型液体培养基中,35 ℃孵育3天后,取0.1 ml培养液置第②管中,再孵育3天后取0.1 ml培养液置第③管中……,如此连续转种至第⑤管孵育后,挑取其棉絮样沉淀,移种于L型固体培养基,用L型玻棒涂于整个平板,平板中央贴加新青霉素Ⅱ纸片。
1.7 35 ℃在CO2体积分数5 %的孵箱孵育。
2 结果与讨论
培养48 h后用低倍镜观察,可见典型的“油煎蛋”状菌落布满于抗生素纸片周围,此即金黄色葡萄球菌L型菌落。取针尖样的菌落进行革兰氏染色、胞壁染色及返祖试验。革兰氏染色呈染色不均匀的圆球体;胞壁染色菌体染成深紫色;接种普通肉汤1周后,转种血平板及L型平板,于L型平板上仍可见L型菌落。
实验结果表明,细菌L型变异受培养条件和诱导方法的多种因素影响,其中尤以抗生素的浓度最为重要。作者曾多次在具备培养条件下,用不同的单一的抗生素浓度进行诱导,均未成功。而在将抗生素的浓度由低到高逐渐加大,将菌液浓度由高到低逐渐减少,多次连续传代的情况下,取得了满意的效果。分析认为,细菌转变为L型是细菌对抗生素耐变、适应的结果,是亚致死损伤所致细胞壁破裂后的一种稳定的生存形态。抗生素的浓度变化过程,给细菌的适应、衍化以至L型的形成创造了有利条件。
(1998-08-01 收稿), 百拇医药