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编号:10221219
儿童肺炎衣原体呼吸道感染的研究
http://www.100md.com 《广西医科大学学报》 1999年第3期
     作者:农光民 李树全 谢湘芝 苏瑞琼 姚龙

    单位:农光民 李树全 谢湘芝 苏瑞琼 姚龙 广西医科大学第一附属医院儿科 南宁 530021

    关键词:衣原体;肺炎;呼吸道感染;儿童

    广西医科大学学报990303

    摘要 目的:了解儿童呼吸道感染患者急性肺炎衣原体感染的情况及临床表现。方法:149例急性呼吸道感染患者,56例健康儿童,取静脉血,用微量荧光试验检测肺炎衣原体IgG和IgM抗体,其中88例呼吸道感染患者,56例健康儿童,取咽拭子标本,应用聚合酶链反应(PCR )检测肺炎衣原体DNA。结果:本组患者肺炎衣原体IgG抗体的阳性率为26%,对照组为5%(P<0.001),其中24例(16%)有肺炎衣原体急性感染的抗体,7例(8%)咽拭子肺炎衣原体PCR检测结果阳性,总的阳性率为19%。对照组无1例肺炎衣原体急性感染。下呼吸道感染患者的肺炎衣原体急性感染率明显高于上呼吸道感染患者,分别为23%、4%。肺炎衣原体急性感染的临床表现无特征性。结论:肺炎衣原体是儿童急性呼吸道感染的重要致病原。
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    中国图书资料分类法分类号 R563.1

    STUDY ON RESPIRATORY INFECTION OF CHILDREN CAUSED BY CHLA-MYDIA PNEUMONIAE

    Nong Guangmin,Li Shuquan,Xie Xiangzhi,et al

    Department of paediatrics,The First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University,Nanning 530021

    Abstract Objective:To determine the infected rate and the clinical features of children with acute respiratory infection caused by chlamydia pneumonia(C.Pn).Methods:A prospective study for C.pn infection was conducted in 149 patients with acute respiratory diseases and 56 children of good health.Serum samples were taken and immunoglobulins G and M (IgG and IgM) fractions of antibodies to C.Pn were studied by microimmunofluorescence test.At the same time, throat swab specimens of 88 patients and 56 healthy children were taken and C.pn DNA were detected by polymerase chain reaction(PCR).Results:The positive rate of micro-IF IgG antibodies was 26% in patients and 5% in healthy children (P<0.001).Twenty four patients(16%) were serologically diagnosed as having recent C.Pn infection and seven patients(8%) had the positive PCR in swab specimens.The total positive rate was 19% combining PCR with seroloy.There were not acute infection of C.pn in healthy children.The acute infected rate of C.Pn in lower respiratory infection (23%) was statistically higher than upper respiratory infection (4%) (P<0.05).1 case of upper respiratory infection,9 cases bronchitis,4 cases of asthma,and 15 cases of pneumonia were diagnosed as acute infection of C.Pn. The clinical feature of C.Pn infection was not specific.Conclusion:Data suggest that chlamydia pneumonia is an important pathogen that causes infections of the childhood respiratory tract.
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    Key words chlamydia;pneumonia;respiratory tract infection;childhood

    近年来,对肺炎衣原体(Chalamydia pneumonial Stain,简称C.Pn)所致呼吸道感染,逐渐引起重视。但国内有关儿童急性呼吸道感染与肺炎衣原体的相关性研究甚少。笔者于1997年6月至1998年10月,对149例急性呼吸道感染患儿血清C.Pn特异性抗体IgG、IgM进行测定,其中88例同时做咽拭子PCR-C.Pn DNA检测。现报告如下。

    1 对象和方法

    1.1 对象:1997年6月至1998年10月在我科住院的急性呼吸道感染患儿149例(观察组),其中肺炎55例,支气管炎46例,支气管哮喘急性发作23例,上呼吸道感染(包括感冒样疾病、咽炎、扁桃体炎)25例;男97例,女52例;年龄25 d至15岁,平均3.4岁。健康对照组56例,男38例,女18例,平均年龄3.9岁。
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    1.2 方法:①详细记录发病时间、症状和体征、胸片改变、临床诊断;②实验室检查:血常规、血沉;③标本采集:入院次日采集静脉血1~2 ml,分离血清后-20℃冰箱保存待检。其中88例入院次日采集咽拭子于1.5 ml生理盐水中,漂洗片刻,-20℃保存;④血清学检查:用倪安平和Grayston[1,2]描述的微量荧光法(MIF)检测149例患儿血清的C.PnIgG和IgM抗体。所用抗原由北京协和医院提供,结合物是兔抗人IgG和羊抗人IgM荧光抗体(Sigma公司产品)。肺炎衣原体急性感染的血清学诊断标准(包括下列任何一种):IgM滴度≥1∶32,IgG滴度≥1∶512。既往感染的标准是IgG滴度≤1∶512,但≥1∶16;⑤肺炎衣原体DNA扩增:标本处理,咽拭子标本离心10 min,弃上清,沉淀物加50 μl标本裂解液和2 μl(20 g/L)蛋白酶k;搅匀后60℃水浴作用1 h,10℃水浴中煮沸10 min,离心1 min,取20 μl上清待检。PCR检测:试剂盒由第三军医大学微生物教研室提供,C.Pn的引物序列为5′-TGACAACTGTAGAAATACAGC-3′和5′-GGCGCCTCTCTCCT-ATAAATA-3′,扩增片段为466bp的C.Pn16 Sr RNA基因。待检标本5 μl,加C.Pn-PCR反应液20 μl,混匀后94℃预变性5 min,稍加离心,加入Taq酶(1 u/μl)1 μl及2滴消毒液体石蜡油,置PCR扩增仪上72℃延伸1 min,94℃变性1 min,56℃退火1 min,反复进行35个循环。扩增结束后,在反应液中加入1 μl溴酚兰终止反应。取15 μl反应液,经1.2%琼脂糖凝胶电泳,在紫外灯下观察结果,若460bP处出现橙黄色条带,则C.Pn DNA阳性。每批标本检测均设阳性、阴性及空白对照;⑥统计学处理:采用卡方检验。
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    2 结果

    2.1 观察组及对照组不同年龄肺炎衣原体IgG抗体检查结果见表1。表1显示,观察组C.PnIgG抗体阳性率(26%)明显高于对照组(5%),两者有统计学差异(P<0.001)。观察组中6岁以下患儿的阳性率为23%,6岁以上患儿的阳性率为36%,但二者无显著性差异(P>0.05)。对照组IgM全部阴性。

    2.2 在149例患者中有29例(19%)具有肺炎衣原体近期感染的依据,其中24例(16%)单份血清符合急性感染诊断标准,7例(8%)咽拭子PCR阳性,2例(1%)血清学和PCR同时阳性。而对照组则无1例有肺炎衣原体急性感染的依据。肺炎衣原体急性感染率以12~15岁患者最高(50%),0~1岁组最低(11%),见表2。

    表1 观察组与对照组不同年龄C.PnIgG结果 组别

    年龄
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    (岁)

    n

    C.PnIgG

    阳性数

    阳性率(%)

    观察组

    ~1

    45

    10

    22

    ~3

    50

    14
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    28

    ~6

    26

    4

    15

    ~12

    22

    6

    27

    ~15

    6

    4

    67

    合计
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    149

    38

    26*

    对照组

    ~1

    5

    0

    0

    ~3

    32

    1

    3

    ~6

, 百拇医药     11

    0

    0

    ~12

    8

    2

    25

    合计

    56

    3

    5

    *与对照组比较,χ2=16.885 1,P<0.001表2 C.Pn急性感染率与年龄的关系(例,%) 年龄
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    (岁)

    n

    急性感染数

    ~1

    45

    5(11)*

    ~3

    50

    10(20)

    ~6

    26

    6(23)

    ~12
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    22

    5(23)

    ~15

    6

    3(50)

    合计

    149

    29(19)

    * 与~15岁组比较,P<0.05

    2.3 不同呼吸道感染疾病组C.Pn急性感染率见表3。表3 不同呼吸道感染疾病组C.Pn急性感染率(例,%) 病种

    n

    急性感染数
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    急性上呼吸道感染

    25

    1(4)

    急性下呼吸道感染

    支气管炎

    46

    9(20)

    支气管哮喘急性发作

    23

    4(17)

    院外获得性肺炎

    55

    15(27)
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    合计

    124

    28(23)*

    * 与上呼吸道感染组比较,χ2=4.582 4,P<0.05

    2.4 肺炎衣原体急性感染患者(29例)的临床表现:发热15例(轻中度热14例,高热1例),全部病例均有不同程度的咳嗽,咳痰或湿性咳嗽18例,气促及发绀10例,喘息9例,咽红21例,肺部闻及音25例;胸片检查:5例正常,10例肺纹理增粗,12例小斑状阴影,1例肺气肿,1例未检;血沉检查8例,均正常;血WBC>10.0×109/L 11例,(4.0~10.0)×109/L 18例;1例病程超过1个月,其余病程均在2周内;1例肺炎并婴儿肝炎的患者表现为重症肺炎,出现心衰、呼衰,4例肺炎患者同时有神经系统损害,其中3例表现为脑炎,1例为格林-巴利综合征。3 讨论
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    肺炎衣原体于1986年被正式命名,现已证明其感染呈世界性分布,是人类重要的呼吸道感染病原,一般认为其感染主要发生在成人和年长儿[1]。本研究结果显示,在149例急性呼吸道感染儿童中,肺炎衣原体IgG阳性率为26%,高于国内李文仲等[3]报道的6%,其中6岁以下组阳性率为23%,6岁以上组阳性率为36%,年龄最小的仅为52 d,说明各年龄组小儿均可感染肺炎衣原体。对照组的肺炎衣原体IgG阳性率仅为5%,明显低于观察组,与美国西雅图10岁以下小儿的血清抗体流行率5%相近[4]

    本组病例16%具有肺炎衣原体急性感染的证据,其中12~15岁组发病率最高,6例中有2例IgG滴度分别为1∶512,1∶1 024,1例IgM滴度为1∶32,但由于该组样本数过少,是否其发病率真正高于其他组,尚须进一步观察。29例急性感染患儿中,至少有3例可认为是再发性感染,因为他们具有较高的IgG抗体,但无IgM抗体。本组病例有20%支气管炎患者、17%支气管哮喘急性发作患者、28%肺炎患者、1%上呼吸道感染患者与肺炎衣原体急性感染有关,较国外报道的肺炎衣原体急性感染率要高[6],而且下呼吸道感染患者肺炎衣原体的急性感染率明显高于上呼吸道感染患者。初步证实在南宁地区肺炎衣原体也是小儿急性呼吸道感染,尤其是下呼吸道感染的重要病原之一。
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    肺炎衣原体感染临床症状相差悬殊,可以从无症状到致死性肺炎,多数表现为轻症,临床上以肺炎为主,与支原体肺炎颇为相似[5]。本组肺炎衣原体急性感染患者与一般急性呼吸道感染患者比较,无特异性临床表现。Hahn等[7]报道了肺炎衣原体感染与喘息的关联。我们也发现了9例肺炎衣原体急性感染患者出现喘息症状,包括4例支气管哮喘急性发作,3例哮喘性支气管炎、2例喘息性肺炎。提示肺炎衣原体可致支气管哮喘或哮喘性支气管炎。近来有报道,肺炎衣原体感染可有肺外表现,如脑炎、肝炎、格林-巴利综合征等。本组有3例急性肺炎衣原体感染的肺炎患者,同时表现有脑炎症状,另1例为格林-巴利综合征,是单纯肺炎衣原体感染所致,还是混合感染,因为未做其他病原学检查,无法肯定,但应引起注意。

    肺炎衣原体的实验诊断主要根据分离培养和血清学检测。一直以来分离培养较困难,阳性率低,不利于临床诊断。近年开展聚合酶链反应(PCR)技术检测肺炎衣原体抗原。我们联合咽拭子PCR及血清学检测肺炎衣原体急性感染的阳性率为19%,较单用PCR(7%)或单用血清学(16%)高。但二者的诊断符合率低,仅2例同时阳性。因为肺炎衣原体MIF抗体出现较慢,IgM发病后3周出现,IgG发病后6~8周出现,本组5例PCR阳性,抗体阴性患儿的病程均在10 d内,故可能出现假阴性。
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    *本课题受广西自治区教育厅自然科学基金资助

    参考文献

    1 Grayston JT,Campbell LA,Kuocc,et al.A new respiratory tract pathogen:chlamydia pneumonia stain TWAR.J Infect Dis,1990,161:618~625

    2 倪安平,王辉,董平,等.肺炎、支气管炎和急性上呼吸道感染患者肺炎衣原体感染的研究.中华内科杂志,1995,34(6):388~391

    3 李文仲,汪玎妍,罗宪玲,等.小儿下呼吸道衣原体感染的研究.中华儿科杂志,1998,36(10):626~627

    4 Saikku P,Ruutu P,Lcinonen M,et al.Aute lower respirtory tract infection associated with chlamydial TWAR antibody in Filipino children.J Infect Dis,1988,158(5):1095~1097

    5 穆魁津,何权主编.肺部感染.北京:北京医科大学,中国协和医科大学联合出版社,1996.425~426

    6 Marric TJ.Chlamydia pnenmoniae.Thorax,1993;48(1):1~4

    7 Hahn DL,Gdubjatnikov R.Asthma and chlamydia infection:a case series.J Fam Pract,1994,38:589~595

    收稿日期:1999-02-20, 百拇医药