多发脑梗死血浆内皮素的动态变化及补肾化瘀中药的影响*
作者：李锐 王敬卿 陈松盛 郑清莲 王晋源
单位：李 锐 王敬卿 陈松盛 郑清莲 王晋源(第一临床医学院中西医结合研究所 西安 710061)
关键词：脑梗死；记忆；大鼠；内皮素；中药
西安医科大学学报/990318 摘要 采用放射免疫分析(RIA)对多发脑梗死模型组大鼠和补肾益脑、活血化瘀中药治疗组血浆内皮素(Endothelin, ET)进行动态测定，并用水迷宫试验评价其分辨性学习记忆能力。结果表明：多发脑梗死血浆ET存在先迅速升高，7d达峰后迅速下降，至14d达正常水平的时相变化；补肾益脑、活血化瘀中药组各时期ET水平均显著低于模型组(P<0.05)，且前者学习记忆能力缺损轻于后者(P<0.05)。提示补肾益脑、活血化瘀中药通过降低局部ET而改善脑梗死的结局。
内皮素(Endotheli,ET)在脑血管病的研究中日益受到重视，但脑梗死后血浆ET的动态变化过程尚未阐明，药物对该过程干预的报道较少。本研究用放免法测定脑梗死后血浆ET的动态变化过程及补肾益脑、活血化瘀中药复方对该过程的影响，以进一步了解ET在脑梗死发病中的作用及该复方治疗血管性痴呆的机理。
, 百拇医药
DYNAMIC CHANGES OF PLASMA ENDOTHELIN
IN A CEREBRAL MULTI-INFARCT RAT MODEL
AND EFFECTS OF CHINESE HERBS
Li Rui, Wnag Jingqing ,Cheng Songsheng et al
(Department of TCM,First Affiliated Hospital)
Abstract We observed time-course changes of plasma endothelin(ET) and the effects of TCM compound in a cerebral multi-infarct rat model,meanwhile learning and memory abilities of distinguishing tasks were also assessed. Results showed that plasma ET concentration increased rapidly untill 7day after cerebral infarction.After fourteen days plasms ET was close to basic level.Administration of the TCM compound, which was developed according to principals of invigorating the kidney and removing blood stasis, could decrease ET level of 3、7、10、14 days after infarction and improve deficits of learning and memory in distinguishing tasks.It indicates that the compound can improve the outcome of cerebral multi-infarction.Its mechanism is partially due to the decrease of plasma ET.
, 百拇医药
Key words cerebral infarct;learning ;memory;rat;endothelin;Chinese herbs
材料与方法
1 多发脑梗死动物模型制做 参照文献[1]制做。12月龄健康雄性SD大鼠，乌拉坦腹腔麻醉(1.0g/kg)，颈部正中切口，分离左侧颈总、颈内、颈外动脉及其分支，将预先制备的同种大鼠颈动脉微血栓(直径100μm～200μm)悬液1.5ml/kg自颈外动脉逆行插管注入颈内动脉造成多发脑梗死。假手术组只注入等量生理盐水，其余操作过程同模型组。
2 给药及分组 补肾益脑、活血化瘀中药复方是“醒脑胶囊”的筛选方，由制首乌、丹参、熟地、川芎、羊脑粉等组成，1 ml煎剂含原方生药1.925 g。将制成的模型16只，随机分为两组，分别灌胃给予中药(中药组)和生理盐水(模型组)，剂量均为11.4 ml/(kg*d)，共给药14d，以假手术组6只为对照。
, 百拇医药
3 血浆ET测定 分别于脑梗死3、7、10、14d早晨安静状态下采尾静脉血1ml，置预先加有20 μl抑肽酶、10%EDTA-Na2的冷试管中离心(4℃，3000 r/min,15min)，取血浆，-70℃待测。所有样品于1月内测定。ET放免试剂盒购自解放军总医院。本次试剂盒B0/T=0.3237,批内CV<5%。
4 分辨性学习记忆能力评价 采用Y型水迷宫试验进行定量评价。大鼠自起步区至安全台所需时间为游全程时间，中途进入盲臂1/2时即判为错误，记录错误总次数。水温24℃±1℃，于早晨9：00～11:00测验，连续7d，给药结束后进行。
5 统计学分析 所有数据以均数±标准差(
±s)表示，组间采用两两比较的q检验。
结果 1 脑梗死后ET的动态变化 脑梗死3d时血浆ET达(144.68±9.65)ng/L，显著高于假手术组(P<0.05)，7d时进一步升高，10d时下降，但仍高于假手术组；14d时，ET水平接近假手术组(P>0.05)。中药组3、7、10、14d ET水平均显著低于模型组(P<0.05)。见附表。
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附表 多发性脑梗塞后血浆ET的动态变化(ng/L) 组 别
例数
脑梗塞后(d)
3
7
10
14
模 型 组
6
144.68±9.65*△
184.34±21.26*△
123.97±5.47*△
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77.41±6.02*△
中 药 组
7
114.24±12.35*
144.39±8.69*
74.11±6.76
63.22±5.13
假手术组
6
68.23±6.12
66.62±5.17
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69.20±4.84
70.33±7.59
注：*与假手术组比较，P<0.01；△与中药组比较，P<0.05
2 脑梗死后分辨性学习记忆能力的变化 连续7d水迷宫测试显示，模型组动物游全程时间、错误次数均多于中药组和假手术组(P<0.05)。见图1、图2。
图1 中药对分辨性学习记忆的影响(游全程时间)
注：表示与中药组、假手术组相比，P<0.05
图2 中药组对分辨性学习记忆的影响(错误次数)
, 百拇医药
注：表示与中药组、假手术组相比，P<0.05
讨论
Ziv等[2]发现，脑梗死发病24h内血浆ET即显著升高；Estrada等[3]的研究证明，脑梗死患者发病7d时血浆ET仍显著高于正常对照组。本实验，多发脑梗死大鼠血浆ET 3d时已显著增高，7d左右达峰值，14d时接近正常。可见，脑梗死后血浆ET自3～14d内存在先升高后降低的时相变化。这一结果提示：在涉及ET与脑梗死发病的研究中，必须考虑到ET血浆含量与梗死的病程、病理时期关系密切，在描述ET变化时，必须提及此时脑梗死所处的时期，否则将会导致结果的混乱；同时，从血浆ET的动态变化过程与脑梗死病程的密切关系中，我们推测ET在脑梗死的进程中起着重要作用。
有人发现，脑梗死早期血浆ET的升高与加拿大神经功能指数(Canadian Neurological Scale)呈显著正相关[2]；也有人发现缺血性脑卒中血浆ET水平与病情严重程度关系密切。本实验中，血浆ET水平较高的模型组于14d后的学习记忆能力测试中学习记忆能力受损重于血浆ET水平较低的中药组，说明ET影响着脑梗死的结局。现认为，ET通过其强大的缩血管作用和促兴奋性氨基酸释放等加重脑梗死的程度。
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由于ET的半衰期短和极分泌现象(Polar secreation)的存在[4]，现普遍认为，ET的血浆浓度并不代表其局部分泌状况。因而本实验中血浆ET的升高反映了局部ET的浓度更高。局部高浓度的ET通过缩血管，促进兴奋性氨基酸释放等，使梗死周边甚至远隔部位血液灌流量降低、神经元坏死，加重脑梗死结局。中药组血浆ET的显著降低及学习记忆能力受损较轻说明，中药补肾益脑、活血化瘀方可能是通过减少局部ET的释放而改善脑梗死的病变。
血管内皮细胞并不是ET的唯一来源，实验表明，星形胶质细胞、血管平滑肌细胞、巨噬细胞等在一定条件下也可分泌ET，尤其是星形胶质细胞的激活可产生大量ET[5]。脑梗死后必然伴随脑星形胶质细胞的激活，其产生的ET进入脑脊液或通过受损的血脑屏障进入血液即可引起全脑血流量的降低和血浆ET的升高。因此我们认为，补肾益脑、活血化瘀中药作用的途径之一可能是通过抑制星形胶质细胞的激活而降低血浆ET浓度，但其具体机制还尚待进一步研究。另外，ET作为一种神经肽是否也像其它一些神经肽一样参与学习记忆过程也有待阐明。
, 百拇医药
*陕西省中医药管理局资助课题
参考文献
1 孙俊抛，田时雨，陈薇薇等.多发性脑梗塞痴呆动物模型的研究.中华神经精神科杂志，1994；27∶311
2 Ziv I,Fleminger G,Djaldetti R et al.Increased plasma endothelin-1 in acute ischemic stroke.Stroke, 1992;23∶1014
3 Estrada V,Tellez MJ, Moya J et al.High plasma levels of endothelin-1 and atrial natriuretic peptide in patients with acute ischemic stroke.Am J Hypertens, 1994;12(7)∶1085
, http://www.100md.com
4 Wagner OF,Christ G, Wojta J et al.Polar secretion of endothelin-1 by cultured endothelial cells.J Biolog Chem, 1992;267∶10066
5 Zhang M,Ollson Y.Reaction of astrocytes and microglial cells around hematogenous metatases of the human brain expression of endothelin-like immunoreactivity in reactive astrocvtes and activation of microglial cells.J Neurol Sci,1995;134∶26
(1998-01-28收稿 1999-03-13修回), http://www.100md.com
单位：李 锐 王敬卿 陈松盛 郑清莲 王晋源(第一临床医学院中西医结合研究所 西安 710061)
关键词：脑梗死；记忆；大鼠；内皮素；中药
西安医科大学学报/990318 摘要 采用放射免疫分析(RIA)对多发脑梗死模型组大鼠和补肾益脑、活血化瘀中药治疗组血浆内皮素(Endothelin, ET)进行动态测定，并用水迷宫试验评价其分辨性学习记忆能力。结果表明：多发脑梗死血浆ET存在先迅速升高，7d达峰后迅速下降，至14d达正常水平的时相变化；补肾益脑、活血化瘀中药组各时期ET水平均显著低于模型组(P<0.05)，且前者学习记忆能力缺损轻于后者(P<0.05)。提示补肾益脑、活血化瘀中药通过降低局部ET而改善脑梗死的结局。
内皮素(Endotheli,ET)在脑血管病的研究中日益受到重视，但脑梗死后血浆ET的动态变化过程尚未阐明，药物对该过程干预的报道较少。本研究用放免法测定脑梗死后血浆ET的动态变化过程及补肾益脑、活血化瘀中药复方对该过程的影响，以进一步了解ET在脑梗死发病中的作用及该复方治疗血管性痴呆的机理。
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DYNAMIC CHANGES OF PLASMA ENDOTHELIN
IN A CEREBRAL MULTI-INFARCT RAT MODEL
AND EFFECTS OF CHINESE HERBS
Li Rui, Wnag Jingqing ,Cheng Songsheng et al
(Department of TCM,First Affiliated Hospital)
Abstract We observed time-course changes of plasma endothelin(ET) and the effects of TCM compound in a cerebral multi-infarct rat model,meanwhile learning and memory abilities of distinguishing tasks were also assessed. Results showed that plasma ET concentration increased rapidly untill 7day after cerebral infarction.After fourteen days plasms ET was close to basic level.Administration of the TCM compound, which was developed according to principals of invigorating the kidney and removing blood stasis, could decrease ET level of 3、7、10、14 days after infarction and improve deficits of learning and memory in distinguishing tasks.It indicates that the compound can improve the outcome of cerebral multi-infarction.Its mechanism is partially due to the decrease of plasma ET.
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Key words cerebral infarct;learning ;memory;rat;endothelin;Chinese herbs
材料与方法
1 多发脑梗死动物模型制做 参照文献[1]制做。12月龄健康雄性SD大鼠，乌拉坦腹腔麻醉(1.0g/kg)，颈部正中切口，分离左侧颈总、颈内、颈外动脉及其分支，将预先制备的同种大鼠颈动脉微血栓(直径100μm～200μm)悬液1.5ml/kg自颈外动脉逆行插管注入颈内动脉造成多发脑梗死。假手术组只注入等量生理盐水，其余操作过程同模型组。
2 给药及分组 补肾益脑、活血化瘀中药复方是“醒脑胶囊”的筛选方，由制首乌、丹参、熟地、川芎、羊脑粉等组成，1 ml煎剂含原方生药1.925 g。将制成的模型16只，随机分为两组，分别灌胃给予中药(中药组)和生理盐水(模型组)，剂量均为11.4 ml/(kg*d)，共给药14d，以假手术组6只为对照。
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3 血浆ET测定 分别于脑梗死3、7、10、14d早晨安静状态下采尾静脉血1ml，置预先加有20 μl抑肽酶、10%EDTA-Na2的冷试管中离心(4℃，3000 r/min,15min)，取血浆，-70℃待测。所有样品于1月内测定。ET放免试剂盒购自解放军总医院。本次试剂盒B0/T=0.3237,批内CV<5%。
4 分辨性学习记忆能力评价 采用Y型水迷宫试验进行定量评价。大鼠自起步区至安全台所需时间为游全程时间，中途进入盲臂1/2时即判为错误，记录错误总次数。水温24℃±1℃，于早晨9：00～11:00测验，连续7d，给药结束后进行。
5 统计学分析 所有数据以均数±标准差(
±s)表示，组间采用两两比较的q检验。结果 1 脑梗死后ET的动态变化 脑梗死3d时血浆ET达(144.68±9.65)ng/L，显著高于假手术组(P<0.05)，7d时进一步升高，10d时下降，但仍高于假手术组；14d时，ET水平接近假手术组(P>0.05)。中药组3、7、10、14d ET水平均显著低于模型组(P<0.05)。见附表。
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附表 多发性脑梗塞后血浆ET的动态变化(ng/L) 组 别
例数
脑梗塞后(d)
3
7
10
14
模 型 组
6
144.68±9.65*△
184.34±21.26*△
123.97±5.47*△
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77.41±6.02*△
中 药 组
7
114.24±12.35*
144.39±8.69*
74.11±6.76
63.22±5.13
假手术组
6
68.23±6.12
66.62±5.17
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69.20±4.84
70.33±7.59
注：*与假手术组比较，P<0.01；△与中药组比较，P<0.05
2 脑梗死后分辨性学习记忆能力的变化 连续7d水迷宫测试显示，模型组动物游全程时间、错误次数均多于中药组和假手术组(P<0.05)。见图1、图2。
图1 中药对分辨性学习记忆的影响(游全程时间)
注：表示与中药组、假手术组相比，P<0.05
图2 中药组对分辨性学习记忆的影响(错误次数)
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注：表示与中药组、假手术组相比，P<0.05
讨论
Ziv等[2]发现，脑梗死发病24h内血浆ET即显著升高；Estrada等[3]的研究证明，脑梗死患者发病7d时血浆ET仍显著高于正常对照组。本实验，多发脑梗死大鼠血浆ET 3d时已显著增高，7d左右达峰值，14d时接近正常。可见，脑梗死后血浆ET自3～14d内存在先升高后降低的时相变化。这一结果提示：在涉及ET与脑梗死发病的研究中，必须考虑到ET血浆含量与梗死的病程、病理时期关系密切，在描述ET变化时，必须提及此时脑梗死所处的时期，否则将会导致结果的混乱；同时，从血浆ET的动态变化过程与脑梗死病程的密切关系中，我们推测ET在脑梗死的进程中起着重要作用。
有人发现，脑梗死早期血浆ET的升高与加拿大神经功能指数(Canadian Neurological Scale)呈显著正相关[2]；也有人发现缺血性脑卒中血浆ET水平与病情严重程度关系密切。本实验中，血浆ET水平较高的模型组于14d后的学习记忆能力测试中学习记忆能力受损重于血浆ET水平较低的中药组，说明ET影响着脑梗死的结局。现认为，ET通过其强大的缩血管作用和促兴奋性氨基酸释放等加重脑梗死的程度。
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由于ET的半衰期短和极分泌现象(Polar secreation)的存在[4]，现普遍认为，ET的血浆浓度并不代表其局部分泌状况。因而本实验中血浆ET的升高反映了局部ET的浓度更高。局部高浓度的ET通过缩血管，促进兴奋性氨基酸释放等，使梗死周边甚至远隔部位血液灌流量降低、神经元坏死，加重脑梗死结局。中药组血浆ET的显著降低及学习记忆能力受损较轻说明，中药补肾益脑、活血化瘀方可能是通过减少局部ET的释放而改善脑梗死的病变。
血管内皮细胞并不是ET的唯一来源，实验表明，星形胶质细胞、血管平滑肌细胞、巨噬细胞等在一定条件下也可分泌ET，尤其是星形胶质细胞的激活可产生大量ET[5]。脑梗死后必然伴随脑星形胶质细胞的激活，其产生的ET进入脑脊液或通过受损的血脑屏障进入血液即可引起全脑血流量的降低和血浆ET的升高。因此我们认为，补肾益脑、活血化瘀中药作用的途径之一可能是通过抑制星形胶质细胞的激活而降低血浆ET浓度，但其具体机制还尚待进一步研究。另外，ET作为一种神经肽是否也像其它一些神经肽一样参与学习记忆过程也有待阐明。
, 百拇医药
*陕西省中医药管理局资助课题
参考文献
1 孙俊抛，田时雨，陈薇薇等.多发性脑梗塞痴呆动物模型的研究.中华神经精神科杂志，1994；27∶311
2 Ziv I,Fleminger G,Djaldetti R et al.Increased plasma endothelin-1 in acute ischemic stroke.Stroke, 1992;23∶1014
3 Estrada V,Tellez MJ, Moya J et al.High plasma levels of endothelin-1 and atrial natriuretic peptide in patients with acute ischemic stroke.Am J Hypertens, 1994;12(7)∶1085
, http://www.100md.com
4 Wagner OF,Christ G, Wojta J et al.Polar secretion of endothelin-1 by cultured endothelial cells.J Biolog Chem, 1992;267∶10066
5 Zhang M,Ollson Y.Reaction of astrocytes and microglial cells around hematogenous metatases of the human brain expression of endothelin-like immunoreactivity in reactive astrocvtes and activation of microglial cells.J Neurol Sci,1995;134∶26
(1998-01-28收稿 1999-03-13修回), http://www.100md.com