胃癌癌前病变演化与细胞凋亡和增殖的关系
作者：许岸高 李韶光 刘集鸿 浓剑刚 姜泊 甘爱华
单位：516001 广东省惠州市中心人民医院(许岸高、李韶光、刘集鸿、甘爱华)；第一军医大学附属南方医院(沈剑刚、姜泊)
关键词：胃肿瘤；脱噬作用；增殖细胞核抗原
中华医学杂志990308 【摘要】 目的 了解细胞凋亡和增殖及基因bcl-2、p53表达在浅表性胃炎、萎缩性胃炎、肠上皮化生、不典型增生、早期胃癌、进展期胃癌患者这演化序列中的规律和可能作用。方法 采用原位末端标记法(TUNEL)检测其细胞凋亡，采用免疫组织化学检测其增殖细胞核抗原(PCNA)标记和bcl-2、P53蛋白表达。结果 浅表性胃炎、萎缩性胃炎、肠上皮化生、不典型增生、早期胃癌和晚期胃癌的细胞凋亡指数分别为(6.4±1.9)%、(14.1±4.1)%、(23.3±6.1)%、(17.4±2.6)%、(11.3±3.7)%、(6.3±2.0)%；PCNA指数分别为(11.3±2.2)%、(18.9±6.5)%、(20.3±7.3)%、(40.0±10.6)%、(53.1±10.9)%和(72.4±18.4)%；bcl-2蛋白表达分别为10.0%、23.3%、40.0%、56.7%、85.7%和46.7%；P53蛋白表达分别为0%、0%、0%、4.3%、14.3%和53.3%。结论 (1)在胃癌演化序列中，起初3个阶段的凋亡指数和PCNA指数同时上升，而在不典型增生期开始，PCNA继续上升，而凋亡指数逐渐下降。(2)在胃癌中，bcl-2蛋白的表达与P53蛋白的表达呈反向关系，前者可能是胃癌早期的行为，后者则可能是胃癌中晚期的行为。
, 百拇医药
Correlation between apoptosis and proliferation in gastric pre-carcinoam XU Angao, LI Shaoguang, LIU Jihong, et al. Reseach Laboratory of Digestive Disease, Huizhou Central People′s Hospital, Guangdong 516001
【Abstract】 Objective To clarify the correlation between apoptosis/proliferation and the expressions of oncogene bcl-2 and P53 in the changes from superficial gastritis, intestinal metaplasia, dysplasia, gastric cancer in early stage to advanced gastric cancer. Methods TUNEL method was used to detect apoptosis. Immunohistochemical analysis was used to detect the expressions of proliferating cellular nuclear antigen(PCNA), bcl-2 protein and P53 protein. Results In the patients of superficial gastritis, atrophic gastritis, intestinal metaplasia, dysplasia, early gastric cancer and advanced gastric cancer and advanced gastric cancer, apoptotic indexes were: (6.4±1.9)%，(14.1±4.1)%，(23.3±6.1)%，(17.4±2.6)%，(11.3±3.7)%，(6.3±2.0)% respectively. PCNA indexes were : (11.3±2.2)%,(18.9±6.5)%,(20.3±7.3)%,(40.0±10.6)%,(53.1±10.9)% and (72.4±18.4)% respectively; the expression rates of bcl-2 were 10.0%,23.3%,40.0%,56.7%,85.7% and 46.7% . The expression rates of P53 were : 0%,0%,0%,4.3%,14.3% and 53.3% . The difference in the majority of observed indexes were significant (P<0.05～0.01) . Conclusion During the changes of gastric cancer, the apoptotic and proliferating indexes incerased simultaneously in superficial gastritis , atrophic gastritis and intestinal metaplasia. However, PCNA indexes further increased but apoptotic indexes decreased in dysplasia, early gastric cancer and advanced gastric cancer and advanced gastric cancer . The former may be the phenomenon in early gastric cancer and advanced gastric cancer and advanced gastic cancer. The former may be the phenomenon in ear early gastric cancer the latter may be the phenomenon in advanced gastric cancer.
, 百拇医药
【Key words】 Stomach neoplasms Apoptosis Proliferating cell Nuclear Antigen
(Natl Med J China, 1999,79:185-186)
胃癌的发病机理仍不十分清楚。细胞增殖与凋亡的失衡导致细胞的过度积聚，可能是胃癌发生的病理基础。作者通过检测癌前病变和胃癌的细胞凋亡、增殖指数，以及相关基因bcl-2、P53蛋白的表达规律，以探讨胃癌的发生发展机制。
对象和方法
一、对象
155例标本均为我院胃镜活检手术切除标本。其中浅表性胃炎30例，萎缩性胃炎30例，肠上皮化生28例，不典型增生23例，早期胃癌14例和进展期胃癌30例。经统计学处理，各组病例间的平均年龄和男女比例差异无显著意义。
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二、方法
1.细胞凋亡的检测：采用末端转移酶介导的duTP切口末端标记法。试剂购自Boehringer Mannhein公司。操作步骤参照Ishida等[1]报道的进行。细胞核呈棕褐色着染或细胞浆因核DNA逸出呈阳性着染者，为凋亡细胞。每例观察5个视野，每个视野计数100个细胞核，计数中凋亡细胞比率的均数为凋亡指数。
2.免疫组织化学法检测：采用SP法染色。增殖细胞核抗原(PCNA)、bcl-2蛋白和P53蛋白单克隆抗体、以及生物素标记羊抗鼠IgG试剂购自Dako公司。具体方法简述如下：组织切片常规脱蜡及复水后，使用0.3%H2O2甲醇阻断内原酶。用1%的正常马血清滴片以减少非特异性着色。再滴入相应单克隆抗体，4℃冰箱过夜，继而滴入1∶200生物素标记物，45分钟后清洗切片后再滴入1∶200稀释的Avidin-HRP试剂，经0.1%DAB-H2O2显色后，苏木素染色，常规脱水封片。以细胞核染呈棕黄色至深棕黄色为阳性细胞，单纯细胞浆着色，而核无着色，或细胞核、细胞浆均无着色为阴性。PCNA标记指数的计算同凋亡指数。
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3.统计学处理：用t检验进行显著性检验。
结 果
一、以DNA原位末端标记法和bcl-2蛋白表达反映细胞凋亡状态，以PCNA标记和P53蛋白表达反映细胞增殖状态。细胞凋亡、增殖与胃癌及相关病变的关系(见表1)。
表1 胃癌癌前病变演化与细胞凋亡及增殖的关系(%，
±s) 组别
例数
凋亡指数
PCNA
bcl-2
, http://www.100md.com p53
浅表性胃炎
30
6.4±1.9
11.3±2.2
10.0
0
萎缩性胃炎
30
14.4±4.1*
18.9±6.5*
23.3*
, 百拇医药
0
肠上皮化生
28
23.3±6.1*
20.3±7.3
40.0*
0
不典型增生
23
17.4±2.6*
40.0±10.6*
56.7*
, 百拇医药
4.3
早期胃癌
14
11.3±3.7*
53.1±10.9*
85.7*
14.3*
进展期胃癌
30
6.3±2.0*
72.4±18.4*
, http://www.100md.com
46.7*
53.30*
注：与上一组疾病比较，*P<0.05～0.01
二、在由浅表性胃炎向进展期胃癌这一演变序列中，凋亡指数开始逐渐增高至肠上皮化生时到达高峰，随后出现下降，至进展期胃癌时最低。而bcl-2蛋白表达的阳性率走向亦与凋亡指数相似，只是高峰后移至早期胃癌。
三、在胃癌演化序列中，PCNA标记指数逐渐增高，直到进展期胃癌才达高峰。P53蛋白的表达规律亦与PCNA标记指数变化规律相似，但阳性细胞只见于不典型增生和胃癌。
讨 论
维持胃粘膜的正常结构依赖于胃粘膜细胞的丧失与更新的动态平衡。正常的细胞凋亡机制可以清除机体内受损、变异和衰老的细胞。正常的胃粘膜在上皮表面的细胞层内可发现凋亡细胞，并在腔内见到凋亡小体[2]。术后胃粘膜细胞凋亡检测表明，在正常胃粘膜，凋亡细胞少见，而在胃炎和肠上皮化生的粘膜，则容易出现细胞凋亡[1]。本研究显示，在胃癌演化序列中，以胃粘膜肠化生为分界点，在前半阶段，随病变的加重凋亡指数逐渐上升，在后半阶段则随病变的加重而下降。而细胞增殖指数在整个演化序列中，一直处于逐步上升状态。说明在致病因子作用下，在疾病的起始阶段，胃粘膜细胞的凋亡与增殖同时增加，粘膜内无细胞积聚或积聚不明显，当病变发展到一定时期(可能在不典型增生期)，细胞凋亡开始下降，粘膜内的细胞积聚增加，最终导致癌变形成。因此，在胃粘膜不典型增生期，使用诱导细胞凋亡的药物可能有助于预防胃癌的形成。调控胃肠上皮细胞凋亡与增殖的机制很复杂[3]。本结果显示，在胃癌演化序列中，bcl-2蛋白的表达逐渐增加，在早期胃癌时阳性率高达85.7%，显著高于不典型增生和进展期胃癌(P<0.05)，提示bcl-2的表达可能胃癌发生过程中的早期行为。
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本组资料提示，在进展期胃癌，bcl-2的表达下降可能与P53突变后蛋白表达上调有关。总之，在胃癌的演化序列中，胃癌的形成与细胞凋亡减少而增殖增加密切相关，可能多种基因参与细胞凋亡与增殖的调控。
本课题为广东省医药科学技术研究基金资助项目
参考文献
1 Ishida M, Gomyo Y, Tatebe S, et al. Apoptosis in human gastric mucosa, chronic gastritis, dysplasia and carcinoma:analysis by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated duTP-biotin nick end labelling. Virchows Arch, 1996, 428: 229-235.
, http://www.100md.com
2 Iwanga T, Han H, Adchi K, et al. A novel mechanism for disposing of effete epithelial cells in the small intestine of guniea pigs. Gastroenterology, 1993,105:1089.
3 Vollmers HP, Dammtich J, Hensel F, et al. Differential Expression of Apoptosis Receptors on Diffuse and Intestinal Type Stomach Catcinoma. Cancer, 1997, 79:433-440.
(收稿：1998-03-24 修回：1998-10-16), 百拇医药
单位：516001 广东省惠州市中心人民医院(许岸高、李韶光、刘集鸿、甘爱华)；第一军医大学附属南方医院(沈剑刚、姜泊)
关键词：胃肿瘤；脱噬作用；增殖细胞核抗原
中华医学杂志990308 【摘要】 目的 了解细胞凋亡和增殖及基因bcl-2、p53表达在浅表性胃炎、萎缩性胃炎、肠上皮化生、不典型增生、早期胃癌、进展期胃癌患者这演化序列中的规律和可能作用。方法 采用原位末端标记法(TUNEL)检测其细胞凋亡，采用免疫组织化学检测其增殖细胞核抗原(PCNA)标记和bcl-2、P53蛋白表达。结果 浅表性胃炎、萎缩性胃炎、肠上皮化生、不典型增生、早期胃癌和晚期胃癌的细胞凋亡指数分别为(6.4±1.9)%、(14.1±4.1)%、(23.3±6.1)%、(17.4±2.6)%、(11.3±3.7)%、(6.3±2.0)%；PCNA指数分别为(11.3±2.2)%、(18.9±6.5)%、(20.3±7.3)%、(40.0±10.6)%、(53.1±10.9)%和(72.4±18.4)%；bcl-2蛋白表达分别为10.0%、23.3%、40.0%、56.7%、85.7%和46.7%；P53蛋白表达分别为0%、0%、0%、4.3%、14.3%和53.3%。结论 (1)在胃癌演化序列中，起初3个阶段的凋亡指数和PCNA指数同时上升，而在不典型增生期开始，PCNA继续上升，而凋亡指数逐渐下降。(2)在胃癌中，bcl-2蛋白的表达与P53蛋白的表达呈反向关系，前者可能是胃癌早期的行为，后者则可能是胃癌中晚期的行为。
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Correlation between apoptosis and proliferation in gastric pre-carcinoam XU Angao, LI Shaoguang, LIU Jihong, et al. Reseach Laboratory of Digestive Disease, Huizhou Central People′s Hospital, Guangdong 516001
【Abstract】 Objective To clarify the correlation between apoptosis/proliferation and the expressions of oncogene bcl-2 and P53 in the changes from superficial gastritis, intestinal metaplasia, dysplasia, gastric cancer in early stage to advanced gastric cancer. Methods TUNEL method was used to detect apoptosis. Immunohistochemical analysis was used to detect the expressions of proliferating cellular nuclear antigen(PCNA), bcl-2 protein and P53 protein. Results In the patients of superficial gastritis, atrophic gastritis, intestinal metaplasia, dysplasia, early gastric cancer and advanced gastric cancer and advanced gastric cancer, apoptotic indexes were: (6.4±1.9)%，(14.1±4.1)%，(23.3±6.1)%，(17.4±2.6)%，(11.3±3.7)%，(6.3±2.0)% respectively. PCNA indexes were : (11.3±2.2)%,(18.9±6.5)%,(20.3±7.3)%,(40.0±10.6)%,(53.1±10.9)% and (72.4±18.4)% respectively; the expression rates of bcl-2 were 10.0%,23.3%,40.0%,56.7%,85.7% and 46.7% . The expression rates of P53 were : 0%,0%,0%,4.3%,14.3% and 53.3% . The difference in the majority of observed indexes were significant (P<0.05～0.01) . Conclusion During the changes of gastric cancer, the apoptotic and proliferating indexes incerased simultaneously in superficial gastritis , atrophic gastritis and intestinal metaplasia. However, PCNA indexes further increased but apoptotic indexes decreased in dysplasia, early gastric cancer and advanced gastric cancer and advanced gastric cancer . The former may be the phenomenon in early gastric cancer and advanced gastric cancer and advanced gastic cancer. The former may be the phenomenon in ear early gastric cancer the latter may be the phenomenon in advanced gastric cancer.
, 百拇医药
【Key words】 Stomach neoplasms Apoptosis Proliferating cell Nuclear Antigen
(Natl Med J China, 1999,79:185-186)
胃癌的发病机理仍不十分清楚。细胞增殖与凋亡的失衡导致细胞的过度积聚，可能是胃癌发生的病理基础。作者通过检测癌前病变和胃癌的细胞凋亡、增殖指数，以及相关基因bcl-2、P53蛋白的表达规律，以探讨胃癌的发生发展机制。
对象和方法
一、对象
155例标本均为我院胃镜活检手术切除标本。其中浅表性胃炎30例，萎缩性胃炎30例，肠上皮化生28例，不典型增生23例，早期胃癌14例和进展期胃癌30例。经统计学处理，各组病例间的平均年龄和男女比例差异无显著意义。
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二、方法
1.细胞凋亡的检测：采用末端转移酶介导的duTP切口末端标记法。试剂购自Boehringer Mannhein公司。操作步骤参照Ishida等[1]报道的进行。细胞核呈棕褐色着染或细胞浆因核DNA逸出呈阳性着染者，为凋亡细胞。每例观察5个视野，每个视野计数100个细胞核，计数中凋亡细胞比率的均数为凋亡指数。
2.免疫组织化学法检测：采用SP法染色。增殖细胞核抗原(PCNA)、bcl-2蛋白和P53蛋白单克隆抗体、以及生物素标记羊抗鼠IgG试剂购自Dako公司。具体方法简述如下：组织切片常规脱蜡及复水后，使用0.3%H2O2甲醇阻断内原酶。用1%的正常马血清滴片以减少非特异性着色。再滴入相应单克隆抗体，4℃冰箱过夜，继而滴入1∶200生物素标记物，45分钟后清洗切片后再滴入1∶200稀释的Avidin-HRP试剂，经0.1%DAB-H2O2显色后，苏木素染色，常规脱水封片。以细胞核染呈棕黄色至深棕黄色为阳性细胞，单纯细胞浆着色，而核无着色，或细胞核、细胞浆均无着色为阴性。PCNA标记指数的计算同凋亡指数。
, http://www.100md.com
3.统计学处理：用t检验进行显著性检验。
结 果
一、以DNA原位末端标记法和bcl-2蛋白表达反映细胞凋亡状态，以PCNA标记和P53蛋白表达反映细胞增殖状态。细胞凋亡、增殖与胃癌及相关病变的关系(见表1)。
表1 胃癌癌前病变演化与细胞凋亡及增殖的关系(%，
±s) 组别例数
凋亡指数
PCNA
bcl-2
, http://www.100md.com p53
浅表性胃炎
30
6.4±1.9
11.3±2.2
10.0
0
萎缩性胃炎
30
14.4±4.1*
18.9±6.5*
23.3*
, 百拇医药
0
肠上皮化生
28
23.3±6.1*
20.3±7.3
40.0*
0
不典型增生
23
17.4±2.6*
40.0±10.6*
56.7*
, 百拇医药
4.3
早期胃癌
14
11.3±3.7*
53.1±10.9*
85.7*
14.3*
进展期胃癌
30
6.3±2.0*
72.4±18.4*
, http://www.100md.com
46.7*
53.30*
注：与上一组疾病比较，*P<0.05～0.01
二、在由浅表性胃炎向进展期胃癌这一演变序列中，凋亡指数开始逐渐增高至肠上皮化生时到达高峰，随后出现下降，至进展期胃癌时最低。而bcl-2蛋白表达的阳性率走向亦与凋亡指数相似，只是高峰后移至早期胃癌。
三、在胃癌演化序列中，PCNA标记指数逐渐增高，直到进展期胃癌才达高峰。P53蛋白的表达规律亦与PCNA标记指数变化规律相似，但阳性细胞只见于不典型增生和胃癌。
讨 论
维持胃粘膜的正常结构依赖于胃粘膜细胞的丧失与更新的动态平衡。正常的细胞凋亡机制可以清除机体内受损、变异和衰老的细胞。正常的胃粘膜在上皮表面的细胞层内可发现凋亡细胞，并在腔内见到凋亡小体[2]。术后胃粘膜细胞凋亡检测表明，在正常胃粘膜，凋亡细胞少见，而在胃炎和肠上皮化生的粘膜，则容易出现细胞凋亡[1]。本研究显示，在胃癌演化序列中，以胃粘膜肠化生为分界点，在前半阶段，随病变的加重凋亡指数逐渐上升，在后半阶段则随病变的加重而下降。而细胞增殖指数在整个演化序列中，一直处于逐步上升状态。说明在致病因子作用下，在疾病的起始阶段，胃粘膜细胞的凋亡与增殖同时增加，粘膜内无细胞积聚或积聚不明显，当病变发展到一定时期(可能在不典型增生期)，细胞凋亡开始下降，粘膜内的细胞积聚增加，最终导致癌变形成。因此，在胃粘膜不典型增生期，使用诱导细胞凋亡的药物可能有助于预防胃癌的形成。调控胃肠上皮细胞凋亡与增殖的机制很复杂[3]。本结果显示，在胃癌演化序列中，bcl-2蛋白的表达逐渐增加，在早期胃癌时阳性率高达85.7%，显著高于不典型增生和进展期胃癌(P<0.05)，提示bcl-2的表达可能胃癌发生过程中的早期行为。
, http://www.100md.com
本组资料提示，在进展期胃癌，bcl-2的表达下降可能与P53突变后蛋白表达上调有关。总之，在胃癌的演化序列中，胃癌的形成与细胞凋亡减少而增殖增加密切相关，可能多种基因参与细胞凋亡与增殖的调控。
本课题为广东省医药科学技术研究基金资助项目
参考文献
1 Ishida M, Gomyo Y, Tatebe S, et al. Apoptosis in human gastric mucosa, chronic gastritis, dysplasia and carcinoma:analysis by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated duTP-biotin nick end labelling. Virchows Arch, 1996, 428: 229-235.
, http://www.100md.com
2 Iwanga T, Han H, Adchi K, et al. A novel mechanism for disposing of effete epithelial cells in the small intestine of guniea pigs. Gastroenterology, 1993,105:1089.
3 Vollmers HP, Dammtich J, Hensel F, et al. Differential Expression of Apoptosis Receptors on Diffuse and Intestinal Type Stomach Catcinoma. Cancer, 1997, 79:433-440.
(收稿：1998-03-24 修回：1998-10-16), 百拇医药