p16蛋白在肾细胞癌中的表达及其与细胞增殖活性和预后的关系
作者：王万忠 杜德利 周瑞锦 邹烨 许纯孝 王家耀
单位：王万忠(山东省立医院病理科 济南 250021)；杜德利(山东省立医院病理科 济南 250021)；周瑞锦(山东省立医院病泌尿外科 济南 250021)；邹烨(山东省立医院病理科 济南 250021)；许纯孝(山东省立医院病泌尿外科，济南 250021)；王家耀(山东省立医院病理科 济南 250021)
关键词：肾肿瘤；癌；肾细胞；基因；抑制；肿瘤；免疫组织化学
临床与实验病理学杂志990345分类号 R737.11； R392.11 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)03-0278-01
抑癌基因p16在多种肿瘤中有缺失或突变〔1〕。本文应用免疫组化方法观察56例肾细胞癌(RCC)中p16蛋白的表达，结合观察增殖细胞核抗原(PCNA)的表达状况，分析p16蛋白表达与RCC细胞增殖活性及预后的关系。
, 百拇医药
1 材料和方法
56例RCC中，男性40例，女性16例，年龄14～71岁。组织学类型：透明细胞癌32例，颗粒细胞癌17例，混合细胞型7例。WHO组织学分级：G1 23例、G2 25例、G3 8例。临床分期：Ⅰ期9例，Ⅱ期14例，Ⅲ期27例，Ⅳ期6例。随访44例，其中5年死亡16例，5年生存率为63.3%。
石蜡包埋标本，4 μm切片，枸橼酸缓冲液抗原修复后，采用ABC法进行p16蛋白染色，兔抗人p16蛋白多克隆抗体(Santa Cruz产品)稀释度1∶50。采用LSAB法进行PCNA染色，鼠抗人PCNA单克隆抗体(Dako产品)稀释度1∶100。
p16蛋白免疫组化阳性显色细胞>30%为阳性；计数800个细胞中PCNA阳性细胞数，换算为PCNA标记指数(PCNA-LI)。统计学采用χ2检验、Ridit分析及t检验。
, 百拇医药
2 结果
56例RCC中p16蛋白阳性率为60.7%(34/56)，癌旁肾组织的阳性率为53.8%(14/26)，差异无显著性。各组织学类型中，颗粒细胞癌的p16阳性率(14/17，82.4%)显著高于透明细胞癌(15/32，46.9%；χ2=4.38，P<0.05)，混合细胞癌为71.4%(5/7)。各组织学分级的p16阳性率分别为：G1 30.4%(7/23),G2 80.0%(20/25),G3 87.5%(7/8)，差异有显著性(u=4.52，P<0.01)。各临床分期病例的p16阳性率：Ⅰ期33.3%(3/9)，Ⅱ期为71.4%(10/14),Ⅲ期59.3%(16/27)，Ⅳ期83.3%(5/6)，差异无显著性(u=1.32，P>0.05)。56例RCC的平均PCNA-LI为19.7%，各组织学分型RCC的PCNA-LI差异无显著性,在各组织学分级中，G3>G2>G1，差异有非常显著性(P<0.01)。PCNA高表达组23例的p16阳性率(73.9%，17/23)与PCNA低表达组(51.5%，17/33)差异无显著性(P>0.05)。在随访的44例中，p16阳性病例的5年生存率为56.0%(14/25)，阴性病例为73.3%(14/19)，两者相比差异无显著性(P>0.05)。PCNA高表达组的5年生存率为37.5%(6/16)，PCNA低表达组则为78.6%(22/28)，两组差异有显著性(P<0.05，表1)。
, 百拇医药
表1 RCC分级与PCNA-LI及p16蛋白表达的关系 WHO分级
PCNA-LI
(
±s)
p16**
+
-
G1
8.26±7.2
7
16
G2
, 百拇医药
23.36±22.0△△
20
5
G3
41.25±23.1##△△
7
1
t检验：与G1比，△△P<0.01；与G2比，##P<0.01
Ridit分析：u=4.25，**P<0.013 讨论
, 百拇医药 1994年Kamb在肾上皮转化细胞系中发现p16基因纯合性缺失〔1〕，Tam〔2〕则在另一细胞系中发现有p16蛋白高表达。Knapek〔3〕随后的研究显示，p16基因在小鼠肾肿瘤衍化细胞系中有高频度的缺失，在1/6的肾上皮转化细胞系中有缺失，但在12例RCC原发灶中却未发现p16基因异常，故认为在肾癌的体内发展过程中，p16基因可能不起直接作用。我们应用免疫组化研究发现有60.7%的RCC呈p16蛋白阳性，而以低分化组(G3级)最高，但p16蛋白阳性率与RCC临床分期及5年生存率无关，而且在不同细胞增殖活性，即不同PCNA-LI的病例中，p16蛋白阳性率也无显著性差异。本研究结果提示p16蛋白的免疫组化检测不能作为判断RCC病情进展及预后的一项独立指标，且p16蛋白与RCC细胞的增殖无明确相关性。而PCNA-LI则可做为RCC临床进展及预后判断的一项良好观察指标〔4〕。
参考文献
, 百拇医药
1，Kamb A, Gruis N, Weave-Feldhams J et al. A cell cyclin regulator potentially invoved in genesis of many tumor types. Science, 1994;264:436
2，Tam SW, Shay JW, Pagano M. Differential expresion and cell cyclin regulation of the cyclin-dependent kinase inhibitor p16INK4. Cancer Res, 1994;54:5 816
3，Knapek DF, Serrano M, Beach D et al. Association of rat p15INK4B/p16INK4 deletions with monosomy 5 in kindney epithelial cell lines but not primary renal tumors. Cancer Res, 1995;55:1 607
4，Cronin KJ, Williams NN, Kein MJ et al. Proliferating cell neclear antigen: a new prognostic indicator in renal cell carcinoma. J Urol, 1994;152:834
收稿日期：1998-09-09, http://www.100md.com
单位：王万忠(山东省立医院病理科 济南 250021)；杜德利(山东省立医院病理科 济南 250021)；周瑞锦(山东省立医院病泌尿外科 济南 250021)；邹烨(山东省立医院病理科 济南 250021)；许纯孝(山东省立医院病泌尿外科，济南 250021)；王家耀(山东省立医院病理科 济南 250021)
关键词：肾肿瘤；癌；肾细胞；基因；抑制；肿瘤；免疫组织化学
临床与实验病理学杂志990345分类号 R737.11； R392.11 文献标识码 A
文章编号 1001-7399(1999)03-0278-01
抑癌基因p16在多种肿瘤中有缺失或突变〔1〕。本文应用免疫组化方法观察56例肾细胞癌(RCC)中p16蛋白的表达，结合观察增殖细胞核抗原(PCNA)的表达状况，分析p16蛋白表达与RCC细胞增殖活性及预后的关系。
, 百拇医药
1 材料和方法
56例RCC中，男性40例，女性16例，年龄14～71岁。组织学类型：透明细胞癌32例，颗粒细胞癌17例，混合细胞型7例。WHO组织学分级：G1 23例、G2 25例、G3 8例。临床分期：Ⅰ期9例，Ⅱ期14例，Ⅲ期27例，Ⅳ期6例。随访44例，其中5年死亡16例，5年生存率为63.3%。
石蜡包埋标本，4 μm切片，枸橼酸缓冲液抗原修复后，采用ABC法进行p16蛋白染色，兔抗人p16蛋白多克隆抗体(Santa Cruz产品)稀释度1∶50。采用LSAB法进行PCNA染色，鼠抗人PCNA单克隆抗体(Dako产品)稀释度1∶100。
p16蛋白免疫组化阳性显色细胞>30%为阳性；计数800个细胞中PCNA阳性细胞数，换算为PCNA标记指数(PCNA-LI)。统计学采用χ2检验、Ridit分析及t检验。
, 百拇医药
2 结果
56例RCC中p16蛋白阳性率为60.7%(34/56)，癌旁肾组织的阳性率为53.8%(14/26)，差异无显著性。各组织学类型中，颗粒细胞癌的p16阳性率(14/17，82.4%)显著高于透明细胞癌(15/32，46.9%；χ2=4.38，P<0.05)，混合细胞癌为71.4%(5/7)。各组织学分级的p16阳性率分别为：G1 30.4%(7/23),G2 80.0%(20/25),G3 87.5%(7/8)，差异有显著性(u=4.52，P<0.01)。各临床分期病例的p16阳性率：Ⅰ期33.3%(3/9)，Ⅱ期为71.4%(10/14),Ⅲ期59.3%(16/27)，Ⅳ期83.3%(5/6)，差异无显著性(u=1.32，P>0.05)。56例RCC的平均PCNA-LI为19.7%，各组织学分型RCC的PCNA-LI差异无显著性,在各组织学分级中，G3>G2>G1，差异有非常显著性(P<0.01)。PCNA高表达组23例的p16阳性率(73.9%，17/23)与PCNA低表达组(51.5%，17/33)差异无显著性(P>0.05)。在随访的44例中，p16阳性病例的5年生存率为56.0%(14/25)，阴性病例为73.3%(14/19)，两者相比差异无显著性(P>0.05)。PCNA高表达组的5年生存率为37.5%(6/16)，PCNA低表达组则为78.6%(22/28)，两组差异有显著性(P<0.05，表1)。
, 百拇医药
表1 RCC分级与PCNA-LI及p16蛋白表达的关系 WHO分级
PCNA-LI
(
±s)p16**
+
-
G1
8.26±7.2
7
16
G2
, 百拇医药
23.36±22.0△△
20
5
G3
41.25±23.1##△△
7
1
t检验：与G1比，△△P<0.01；与G2比，##P<0.01
Ridit分析：u=4.25，**P<0.013 讨论
, 百拇医药 1994年Kamb在肾上皮转化细胞系中发现p16基因纯合性缺失〔1〕，Tam〔2〕则在另一细胞系中发现有p16蛋白高表达。Knapek〔3〕随后的研究显示，p16基因在小鼠肾肿瘤衍化细胞系中有高频度的缺失，在1/6的肾上皮转化细胞系中有缺失，但在12例RCC原发灶中却未发现p16基因异常，故认为在肾癌的体内发展过程中，p16基因可能不起直接作用。我们应用免疫组化研究发现有60.7%的RCC呈p16蛋白阳性，而以低分化组(G3级)最高，但p16蛋白阳性率与RCC临床分期及5年生存率无关，而且在不同细胞增殖活性，即不同PCNA-LI的病例中，p16蛋白阳性率也无显著性差异。本研究结果提示p16蛋白的免疫组化检测不能作为判断RCC病情进展及预后的一项独立指标，且p16蛋白与RCC细胞的增殖无明确相关性。而PCNA-LI则可做为RCC临床进展及预后判断的一项良好观察指标〔4〕。
参考文献
, 百拇医药
1，Kamb A, Gruis N, Weave-Feldhams J et al. A cell cyclin regulator potentially invoved in genesis of many tumor types. Science, 1994;264:436
2，Tam SW, Shay JW, Pagano M. Differential expresion and cell cyclin regulation of the cyclin-dependent kinase inhibitor p16INK4. Cancer Res, 1994;54:5 816
3，Knapek DF, Serrano M, Beach D et al. Association of rat p15INK4B/p16INK4 deletions with monosomy 5 in kindney epithelial cell lines but not primary renal tumors. Cancer Res, 1995;55:1 607
4，Cronin KJ, Williams NN, Kein MJ et al. Proliferating cell neclear antigen: a new prognostic indicator in renal cell carcinoma. J Urol, 1994;152:834
收稿日期：1998-09-09, http://www.100md.com
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