应用离子对色谱技术同时测定天仙子中的三种生物碱
作者：李惠芬 张庆伟 张晓梅 董伟林
单位：李惠芬 张庆伟 张晓梅 董伟林天津医科大学(300070)
关键词：离子对色谱；山莨菪碱；东莨菪碱；阿托品
中草药/990210 摘 要 应用离子对色谱技术，同时测定天仙子中山莨菪碱、东莨菪碱、阿托品3种有效成分。色谱条件为YWG-C18柱，4.6 mm×250 mm，灵敏度：0.04 AUFS，柱温：室温，进样量：20 μL。山莨菪碱、东莨菪碱、阿托品的回收率分别为98.8%，RSD＝0.56%；100.4%，RSD＝1.2%；101.5%，RSD＝0.40%。
天仙子为茄科莨菪Hyoscyamus niger L.的干燥成熟种子〔1〕，所含的生物碱具有重要的医疗用途，但因其有大毒，5～10 mg即能产出显著中毒的症状〔2〕。因此，新药审批要求，处方中无论是作为君药还是臣药都必须检测。我们曾用薄层扫描法，对所含的生物碱做了分别测定〔3～5〕。笔者应用离子对色谱技术，反复优化分离条件〔6～7〕，不经分离同时测定了天仙子中山莨菪碱，东莨菪碱和阿托品3种有效成分的含量。此法与TLC测定方法比较，其操作简便、准确。
, 百拇医药
1 仪器、试剂及试药
日本岛津LC-6A高效液相色谱仪及SPD-2AS紫外检测，CR-3A色谱数据处理机。乙腈(色谱纯)，水(二次重蒸水)，氢溴酸山莨菪碱、氢溴酸东莨菪碱、硫酸阿托品(中国药品生物制品检定所)，天仙子分别由山西、宁波、辽宁、内蒙古、河北药材仓库购得。
2 色谱条件
色谱柱：YWG-C18 4.6 mm×250 mm，流动相为乙腈-0.05 mol/L庚烷磺酸钠水溶液(35∶65)，流速：1.5 mL/min，检测波长210 nm，灵敏度：0.04 AUFS，柱温：室温，进样量：20 μL。在上述条件下有关标准品及供试品溶液的分离情况见图1。
A-标准品 B-样品 1-山莨菪碱 2-东莨菪碱 3-阿托品
, 百拇医药
图1 样品色谱图
3 标准曲线制备
精密称取氢溴酸山莨菪碱、氢溴酸东莨菪碱、阿托品各10 mg，置10 mL容量瓶中，分别加入流动相溶解并稀释至刻度，摇匀、备用，作为各自的标准品贮备液1、2、3。
精密移取上述标准溶液0.25、0.50、1.0、2.0、3.5 mL置10 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀进样，得回归方程为：
Y氢溴酸山莨菪碱＝2687.335+518.6081C,r＝0.9998
Y氢溴酸东莨菪碱＝3279.663+548.6010C,r＝0.9993
Y硫酸阿托品＝271.8794+616.1999C,r＝0.9995
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4 样品测定
精密称取山西、宁波、辽宁、河北、内蒙古5个地区的样品粉末各4 g，装袋于索氏提取器中，加石油醚去脂6 h，取出，挥干石油醚，滴加氨水5 mL润湿，密闭50 min，挥去多余氨水，再置索氏提取器中，以氯仿提取总生物碱6 h至提取液无色，回收氯仿至少量，用10 mL左右氯仿洗涤并转移至300 mL分液漏斗中，以0.5%硫酸溶液(10、10、5 mL)分3次萃取，取酸液用浓氨水碱化至pH＝9～10，再以氯仿(10、10、5 mL)分3次提取，将氯仿层浓缩至干，以流动相移至10 mL容量瓶并稀释至刻度，摇匀，进样，色谱条件同前，计算结果见表1。
表1 样品测定结果(n＝6)(%) 地区
阿托品
含量
RSD
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东莨菪碱
含量
RSD
山莨菪碱
含量
RSD
山西
0.0507
1.8
0.0603
2.9
0.0203
2.9
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河北
0.0756
1.1
0.0215
2.7
0.1040
1.3
宁波
0.0414
2.3
0.0371
1.6
0.0286
, 百拇医药
2.4
辽宁
0.0771
2.0
0.0293
2.1
0.0251
1.8
内蒙
0.0533
2.6
0.0296
2.5
, 百拇医药
0.0455
2.4
5 回收率实验
照样品测定项，精密称取8份相同量样品，其中4份加入标准品贮备液1、2、3适量。照样品提取制备成回收溶液，测定加样回收率(n＝4)，得平均回收率分别为：山莨菪碱98.18%，RSD＝0.56%；东莨菪碱100.4%，RSD＝1.2%；阿托品101.5%，RSD＝0.40%。
6 讨论
6.1 在确定样品处理方法时，所筛选的提取方法提取率高，杂质少，不仅适用于薄层板点样要求，也适用于紫外光谱测定及色谱法进样要求。说明提取的样品纯净，操作方法可行。
6.2 在TLC、HPLC检测过程中，重点对莨菪烷类生物碱，即：山莨菪碱、东茛菪碱、阿托品的分离条件进行了反复优化，无论在薄层硅胶板上或YWG-C18柱上都能获得满意的分离效果。解决了天仙子中3种有效成分分离与测定的难题。为莨菪类样品定量测定开辟了一个新途径。
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6.3 样品测定结果还发现，不同产地的样品其内在质量相差很大。尤其东莨菪碱的含量差异很大；且阿托品与东莨菪碱含量比例也不一致，山西产地含量最高，浙江产地含量最低，此结果为临床安全用药，防止药品不良反应的发生提供了重要的参考依据。
*Address:Li Huifen,Tianjin University of Medical Sciences,Tianjin
参 考 文 献
[1] 中华人民共和国药典.一部.1995：40
[2] 江苏新医学院主编.中药大辞典.上海：上海科学技术出版社，1979：322
[3] 李惠芬，等.中草药，1993，24(8)：409
[4] 李惠芬，等.生物医药色谱新进展，1994，2：374
[5] 李惠芬，等.第二回中品分析技术セミナ-.1994：130
[6] Toshiyuki O, et al. Chem Pharm Bull,1989,37(9):2456
[7] Broun ND, et al. J Chromatogr,1978,150(1):225
(1998-10-03收稿), 百拇医药
单位：李惠芬 张庆伟 张晓梅 董伟林天津医科大学(300070)
关键词：离子对色谱；山莨菪碱；东莨菪碱；阿托品
中草药/990210 摘 要 应用离子对色谱技术，同时测定天仙子中山莨菪碱、东莨菪碱、阿托品3种有效成分。色谱条件为YWG-C18柱，4.6 mm×250 mm，灵敏度：0.04 AUFS，柱温：室温，进样量：20 μL。山莨菪碱、东莨菪碱、阿托品的回收率分别为98.8%，RSD＝0.56%；100.4%，RSD＝1.2%；101.5%，RSD＝0.40%。
天仙子为茄科莨菪Hyoscyamus niger L.的干燥成熟种子〔1〕，所含的生物碱具有重要的医疗用途，但因其有大毒，5～10 mg即能产出显著中毒的症状〔2〕。因此，新药审批要求，处方中无论是作为君药还是臣药都必须检测。我们曾用薄层扫描法，对所含的生物碱做了分别测定〔3～5〕。笔者应用离子对色谱技术，反复优化分离条件〔6～7〕，不经分离同时测定了天仙子中山莨菪碱，东莨菪碱和阿托品3种有效成分的含量。此法与TLC测定方法比较，其操作简便、准确。
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1 仪器、试剂及试药
日本岛津LC-6A高效液相色谱仪及SPD-2AS紫外检测，CR-3A色谱数据处理机。乙腈(色谱纯)，水(二次重蒸水)，氢溴酸山莨菪碱、氢溴酸东莨菪碱、硫酸阿托品(中国药品生物制品检定所)，天仙子分别由山西、宁波、辽宁、内蒙古、河北药材仓库购得。
2 色谱条件
色谱柱：YWG-C18 4.6 mm×250 mm，流动相为乙腈-0.05 mol/L庚烷磺酸钠水溶液(35∶65)，流速：1.5 mL/min，检测波长210 nm，灵敏度：0.04 AUFS，柱温：室温，进样量：20 μL。在上述条件下有关标准品及供试品溶液的分离情况见图1。
A-标准品 B-样品 1-山莨菪碱 2-东莨菪碱 3-阿托品
, 百拇医药
图1 样品色谱图
3 标准曲线制备
精密称取氢溴酸山莨菪碱、氢溴酸东莨菪碱、阿托品各10 mg，置10 mL容量瓶中，分别加入流动相溶解并稀释至刻度，摇匀、备用，作为各自的标准品贮备液1、2、3。
精密移取上述标准溶液0.25、0.50、1.0、2.0、3.5 mL置10 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀进样，得回归方程为：
Y氢溴酸山莨菪碱＝2687.335+518.6081C,r＝0.9998
Y氢溴酸东莨菪碱＝3279.663+548.6010C,r＝0.9993
Y硫酸阿托品＝271.8794+616.1999C,r＝0.9995
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4 样品测定
精密称取山西、宁波、辽宁、河北、内蒙古5个地区的样品粉末各4 g，装袋于索氏提取器中，加石油醚去脂6 h，取出，挥干石油醚，滴加氨水5 mL润湿，密闭50 min，挥去多余氨水，再置索氏提取器中，以氯仿提取总生物碱6 h至提取液无色，回收氯仿至少量，用10 mL左右氯仿洗涤并转移至300 mL分液漏斗中，以0.5%硫酸溶液(10、10、5 mL)分3次萃取，取酸液用浓氨水碱化至pH＝9～10，再以氯仿(10、10、5 mL)分3次提取，将氯仿层浓缩至干，以流动相移至10 mL容量瓶并稀释至刻度，摇匀，进样，色谱条件同前，计算结果见表1。
表1 样品测定结果(n＝6)(%) 地区
阿托品
含量
RSD
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东莨菪碱
含量
RSD
山莨菪碱
含量
RSD
山西
0.0507
1.8
0.0603
2.9
0.0203
2.9
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河北
0.0756
1.1
0.0215
2.7
0.1040
1.3
宁波
0.0414
2.3
0.0371
1.6
0.0286
, 百拇医药
2.4
辽宁
0.0771
2.0
0.0293
2.1
0.0251
1.8
内蒙
0.0533
2.6
0.0296
2.5
, 百拇医药
0.0455
2.4
5 回收率实验
照样品测定项，精密称取8份相同量样品，其中4份加入标准品贮备液1、2、3适量。照样品提取制备成回收溶液，测定加样回收率(n＝4)，得平均回收率分别为：山莨菪碱98.18%，RSD＝0.56%；东莨菪碱100.4%，RSD＝1.2%；阿托品101.5%，RSD＝0.40%。
6 讨论
6.1 在确定样品处理方法时，所筛选的提取方法提取率高，杂质少，不仅适用于薄层板点样要求，也适用于紫外光谱测定及色谱法进样要求。说明提取的样品纯净，操作方法可行。
6.2 在TLC、HPLC检测过程中，重点对莨菪烷类生物碱，即：山莨菪碱、东茛菪碱、阿托品的分离条件进行了反复优化，无论在薄层硅胶板上或YWG-C18柱上都能获得满意的分离效果。解决了天仙子中3种有效成分分离与测定的难题。为莨菪类样品定量测定开辟了一个新途径。
, http://www.100md.com
6.3 样品测定结果还发现，不同产地的样品其内在质量相差很大。尤其东莨菪碱的含量差异很大；且阿托品与东莨菪碱含量比例也不一致，山西产地含量最高，浙江产地含量最低，此结果为临床安全用药，防止药品不良反应的发生提供了重要的参考依据。
*Address:Li Huifen,Tianjin University of Medical Sciences,Tianjin
参 考 文 献
[1] 中华人民共和国药典.一部.1995：40
[2] 江苏新医学院主编.中药大辞典.上海：上海科学技术出版社，1979：322
[3] 李惠芬，等.中草药，1993，24(8)：409
[4] 李惠芬，等.生物医药色谱新进展，1994，2：374
[5] 李惠芬，等.第二回中品分析技术セミナ-.1994：130
[6] Toshiyuki O, et al. Chem Pharm Bull,1989,37(9):2456
[7] Broun ND, et al. J Chromatogr,1978,150(1):225
(1998-10-03收稿), 百拇医药
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