PCR技术检测HBV DNA评价
作者：郑 真 李新建 杨双旺 胡亚琴 李晓华
单位：郑 真 李新建 杨双旺 胡亚琴 解放军第四五四医院(南京 210002)；李晓华 南京炮兵学院门诊部
关键词：乙型肝炎病毒 DNA 聚合酶链反应
临床消化病杂志990307 摘 要 目的：为评价聚合酶链反应(PCR)技术检测HBV DNA较之传统酶联免疫吸附测定法(ELISA)的优越性，评价HBsAg阴性消化科住院病人携带HBV的状态。方法：我们使用PCR技术检测了119例ELISA法检测HBsAg阴性的消化科住院病人的HBV DNA，并与103例ELISA法检测HBsAg阴性传染科住院肝炎病人相比较。结果：52.1%的消化科住院病人HBsAg、抗-HBs、抗-HBe、HBeAg、抗-HBc(统称HBVM)阳性，30.3% HBV DNA阳性；89.3%的传染科住院肝炎病人HBVM阳性，59.2% HBV DNA阳性。表明消化科住院病人的HBV感染率和HBV DNA阳性率均显著地低于传染科住院肝炎病人(P<0.005；P<0.005)。而且两组病人之间HBV DNA阳性率的差异仅存在于HBVM均阴性的HBV感染模式中。结论：PCR检测HBV DNA评价HBV携带状态更准确，弥补了ELISA检测HBsAg的不足。消化科住院病人中存在HBsAg阴性的HBV携带者，两组HBVM阳性病人实际上来自于同一群体。
, http://www.100md.com
Evaluation of HBV DNA Measured with PCR
Zheng Zhen, Li Xin-jian, Yang Shuang-wang, et al
Department of Gastroenterology, of PLA 454 Hospital
Abstract Purpose: To evaluated whether the patients with negative HBsAg carry HBV in the department of gastroenterology of our hospital. Methods: The HBV DNA was measured with polymerase chain reaction (PCR) technique in 119 patients with negative HBsAg in department of gastroenterology, and compared with 103 patients with negative HBsAg in department of. Results: The results showed that 52.1% of the patients in the department of gastrogenterology were positive HBVM (HBsAg, anti-HBs, HBeAg, ani-HBe and anti-HBc), and 30.3% HBV DNAwas positive in the patients. This two indexes were markedly lower compared with the patients in department of. The difference of the rate of positive HBV DNA in the two groups was only in the HBV infective model of negative HBVM. Conclusion: The results suggested that there were HBV carriers in negative HBsAg patients in the department of gastroenteroloyg, and positive HBVM patients of the two groups actually come from the same group.
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Key words HBV DNA PCR
东西方国家在乙型肝炎病毒(HBV)感染的各个方面均存在很大的差异，而在HBV携带的表示方面却采取了相同的方法，都以HBsAg作为HBV现症感染和携带的评价指标。这种指标建立在HBV血清学检测的基础之上，是否能够代表HBV携带状态仍需论证。鉴于HBV DNA是HBV的遗传基因，可作为HBV存在的直接指标，我们以聚合酶链反应(PCR)检测HBsAg阴性住院病人血液的HBV DNA，旨在探讨消化科HBsAg阴性住院病人的HBV携带状态。
1 材料和方法
1.1 病人：对连续住院、ELISA法检测HBsAg阴性的222例病人采用PCR技术进行HBV指标检测，其中消化科住院病人119例，男92例，女27例，年龄17～77岁，平均42.62±12.83岁；传染科住院肝炎病人103例，男69例，女34例，年龄10～70岁，平均37.95±13.79岁，包括各种类型的病毒性肝炎，但以乙型肝炎为主。
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1.2 血清HBV免疫学指标检测：使用ELISA法检测血清的HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc(统称HBVM)。试剂盒购于华美生物工程公司，按说明书操作。
1.3 PCR检测HBV DNA：使用PCR法检测同份血清的HBV DNA。试剂盒购于上海医科大学预防研究所，按说明书操作。
2 结 果
2.1 两组病人HBV感染和HBV DNA阳性率比较见表1。表1提示传染科住院肝炎病人的HBV感染率和HBV DNA阳性率均显著地高于消化科住院病人。
表1 两组病人HBV感染和HBV DNA阳性率比较
传染科
消化科
, 百拇医药
x2
P
例数
%
例数
%
HBVM阳性
92
89.3
62
52.1
36.00
<0.005
, 百拇医药
HBV-DNA阳性
61
59.2
36
30.3
18.84
<0.005
2.2 HBsAg阴性者血清HBVM模式与HBV DNA的关系见表2。表2提示HBVM均阴性模式中传染科住院肝炎病人的HBV DNA阳性率显著高于消化科住院病人，其它HBVM模式两组病人间并无显著性差异。表2 HBsAg阴性者血清HBVM模式与HBV DNA的关系 HBVM
传 染 科
消 化 科
, 百拇医药
x2
P
抗-HBs
HBeAg
抗-HBe
抗-HBc
总例数
HBV DNA阳性
总例数
HBV DNA阳性
例数
%
例数
, 百拇医药
%
+
-
-
-
31
16
51.6
35
11
31.4
2.77
>0.05
-
, 百拇医药
-
-
+
13
6
46.6
8
7
87.5
3.59
>0.05
+
-
-
, 百拇医药
+
12
6
50.0
4
3
75.0
0.76
>0.05
-
-
+
+
4
, 百拇医药
3
75.0
1
1
100.0
0.31
>0.05
+
-
+
+
4
2
50.0
, 百拇医药
0
0
0
0
-
-
-
-
39
28
71.8
71
14
19.7
, 百拇医药
28.92
<0.05
3 讨 论
3.1 PCR是HBV高度敏感和特异的检测方法，EILSA检测HBsAg敏感性在ng水平，因此HBsAg阴性只能说明其水平在EILSA检测的阈值之下，并不能肯定HBsAg的消失。HBV的S基因发生变异会导致HBsAg的抗原性发生改变，致使血液中存在HBsAg而用常规方法不能检出，造成HBsAg的假阴性反应。PCR检测HBV DNA系将HBV的基因片段作几何级扩增，其敏感性可达ag水平，是HBV高度敏感和特异的检测方法，其使用高度保守的HBV基因片段为引物，避免了HBV变异对检测的影响。因此PCR检测HBV DNA评价HBV的携带状态，弥补了ELISA检测HBsAg的不足，能更准确地评价HBV携带状态。
3.2 总体比较，传染科住院病人的HBV感染率和HBV DNA阳性率均显著地高于消化科住院病人，但从HBV感染模式分析，这种差异仅存在于HBVM均阴性的模式之中。而在HBVM阳性各种模式中，两组患者之间并无显著性差异。传染科住院肝炎病人的HBV DNA阳性率并非都高于消化科住院病人。表明两组患者实际上来自同一群体，这也与消化科收治的肝硬化病人实际上绝大多数由HBV感染所致[1]，以及HBV感染也可能成为胆囊炎和胰腺炎的病因[2]等事实相一致。因此，在这些疾病的治疗中应该统筹考虑HBV感染的问题。
, 百拇医药
3.3 HBsAg作为HBV携带和医院内感染的监测指标会使人产生HBsAg阴性血液无传染性的误解。实际上，HBsAg只是HBV的外壳抗原，其本身并无传染性，而HBV DNA本身即可引起HBV感染，才是血液具有HBV传染性的直接指标。HBsAg阴性而HBV DNA阳性的血液具有传染性已被动物实验[3]、流行病学调查[4]及分子病毒学研究所证实[5]。本资料30.3%的消化科HBsAg阴性住院病人HBV DNA阳性，说明他们是HBsAg阴性的HBV携带者。以HBsAg为HBV传染性指标，会使这部分病人排除在HBV传染源之外，成为隐性的传染源。因此，消化科HBV携带者的隔离指标仍值得研究。
参考文献
1 骆抗先编著.乙型肝炎-基础和临床.北京：人民卫生出版社，1997，387.
2 高寿征主编.病毒性肝炎防治研究.北京：北京出版社，1993，305.
, http://www.100md.com
3 Alessandro NO, Roger ZM, Purcell RH, et al. Infectity and pathoge-
nicity in chimpanzees of a surface gene mutant of hepatitis B virus that emerged in a vaccinated in fant. J Infect Dis,1997,175(3)∶511.
4 Lin HJ, Laicllan JY. Evidence for intrafamilial transmission of hepatitis B virus from sequence analysis of mutant HBV DNAs in two Chinese families. Lancet,1990,336∶208.
5 Sun CF, Pao CC, Wu SY, et al. Screening for hepatitis B virus in health blood donors by molecular DNA hydridization analysis. J Chin Microbiol,1998,26∶1848.
(1998 10 18收稿), 百拇医药
单位：郑 真 李新建 杨双旺 胡亚琴 解放军第四五四医院(南京 210002)；李晓华 南京炮兵学院门诊部
关键词：乙型肝炎病毒 DNA 聚合酶链反应
临床消化病杂志990307 摘 要 目的：为评价聚合酶链反应(PCR)技术检测HBV DNA较之传统酶联免疫吸附测定法(ELISA)的优越性，评价HBsAg阴性消化科住院病人携带HBV的状态。方法：我们使用PCR技术检测了119例ELISA法检测HBsAg阴性的消化科住院病人的HBV DNA，并与103例ELISA法检测HBsAg阴性传染科住院肝炎病人相比较。结果：52.1%的消化科住院病人HBsAg、抗-HBs、抗-HBe、HBeAg、抗-HBc(统称HBVM)阳性，30.3% HBV DNA阳性；89.3%的传染科住院肝炎病人HBVM阳性，59.2% HBV DNA阳性。表明消化科住院病人的HBV感染率和HBV DNA阳性率均显著地低于传染科住院肝炎病人(P<0.005；P<0.005)。而且两组病人之间HBV DNA阳性率的差异仅存在于HBVM均阴性的HBV感染模式中。结论：PCR检测HBV DNA评价HBV携带状态更准确，弥补了ELISA检测HBsAg的不足。消化科住院病人中存在HBsAg阴性的HBV携带者，两组HBVM阳性病人实际上来自于同一群体。
, http://www.100md.com
Evaluation of HBV DNA Measured with PCR
Zheng Zhen, Li Xin-jian, Yang Shuang-wang, et al
Department of Gastroenterology, of PLA 454 Hospital
Abstract Purpose: To evaluated whether the patients with negative HBsAg carry HBV in the department of gastroenterology of our hospital. Methods: The HBV DNA was measured with polymerase chain reaction (PCR) technique in 119 patients with negative HBsAg in department of gastroenterology, and compared with 103 patients with negative HBsAg in department of. Results: The results showed that 52.1% of the patients in the department of gastrogenterology were positive HBVM (HBsAg, anti-HBs, HBeAg, ani-HBe and anti-HBc), and 30.3% HBV DNAwas positive in the patients. This two indexes were markedly lower compared with the patients in department of. The difference of the rate of positive HBV DNA in the two groups was only in the HBV infective model of negative HBVM. Conclusion: The results suggested that there were HBV carriers in negative HBsAg patients in the department of gastroenteroloyg, and positive HBVM patients of the two groups actually come from the same group.
, http://www.100md.com
Key words HBV DNA PCR
东西方国家在乙型肝炎病毒(HBV)感染的各个方面均存在很大的差异，而在HBV携带的表示方面却采取了相同的方法，都以HBsAg作为HBV现症感染和携带的评价指标。这种指标建立在HBV血清学检测的基础之上，是否能够代表HBV携带状态仍需论证。鉴于HBV DNA是HBV的遗传基因，可作为HBV存在的直接指标，我们以聚合酶链反应(PCR)检测HBsAg阴性住院病人血液的HBV DNA，旨在探讨消化科HBsAg阴性住院病人的HBV携带状态。
1 材料和方法
1.1 病人：对连续住院、ELISA法检测HBsAg阴性的222例病人采用PCR技术进行HBV指标检测，其中消化科住院病人119例，男92例，女27例，年龄17～77岁，平均42.62±12.83岁；传染科住院肝炎病人103例，男69例，女34例，年龄10～70岁，平均37.95±13.79岁，包括各种类型的病毒性肝炎，但以乙型肝炎为主。
, http://www.100md.com
1.2 血清HBV免疫学指标检测：使用ELISA法检测血清的HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc(统称HBVM)。试剂盒购于华美生物工程公司，按说明书操作。
1.3 PCR检测HBV DNA：使用PCR法检测同份血清的HBV DNA。试剂盒购于上海医科大学预防研究所，按说明书操作。
2 结 果
2.1 两组病人HBV感染和HBV DNA阳性率比较见表1。表1提示传染科住院肝炎病人的HBV感染率和HBV DNA阳性率均显著地高于消化科住院病人。
表1 两组病人HBV感染和HBV DNA阳性率比较
传染科
消化科
, 百拇医药
x2
P
例数
%
例数
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HBVM阳性
92
89.3
62
52.1
36.00
<0.005
, 百拇医药
HBV-DNA阳性
61
59.2
36
30.3
18.84
<0.005
2.2 HBsAg阴性者血清HBVM模式与HBV DNA的关系见表2。表2提示HBVM均阴性模式中传染科住院肝炎病人的HBV DNA阳性率显著高于消化科住院病人，其它HBVM模式两组病人间并无显著性差异。表2 HBsAg阴性者血清HBVM模式与HBV DNA的关系 HBVM
传 染 科
消 化 科
, 百拇医药
x2
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抗-HBs
HBeAg
抗-HBe
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总例数
HBV DNA阳性
总例数
HBV DNA阳性
例数
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, 百拇医药
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31
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2.77
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, 百拇医药
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19.7
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28.92
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3 讨 论
3.1 PCR是HBV高度敏感和特异的检测方法，EILSA检测HBsAg敏感性在ng水平，因此HBsAg阴性只能说明其水平在EILSA检测的阈值之下，并不能肯定HBsAg的消失。HBV的S基因发生变异会导致HBsAg的抗原性发生改变，致使血液中存在HBsAg而用常规方法不能检出，造成HBsAg的假阴性反应。PCR检测HBV DNA系将HBV的基因片段作几何级扩增，其敏感性可达ag水平，是HBV高度敏感和特异的检测方法，其使用高度保守的HBV基因片段为引物，避免了HBV变异对检测的影响。因此PCR检测HBV DNA评价HBV的携带状态，弥补了ELISA检测HBsAg的不足，能更准确地评价HBV携带状态。
3.2 总体比较，传染科住院病人的HBV感染率和HBV DNA阳性率均显著地高于消化科住院病人，但从HBV感染模式分析，这种差异仅存在于HBVM均阴性的模式之中。而在HBVM阳性各种模式中，两组患者之间并无显著性差异。传染科住院肝炎病人的HBV DNA阳性率并非都高于消化科住院病人。表明两组患者实际上来自同一群体，这也与消化科收治的肝硬化病人实际上绝大多数由HBV感染所致[1]，以及HBV感染也可能成为胆囊炎和胰腺炎的病因[2]等事实相一致。因此，在这些疾病的治疗中应该统筹考虑HBV感染的问题。
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3.3 HBsAg作为HBV携带和医院内感染的监测指标会使人产生HBsAg阴性血液无传染性的误解。实际上，HBsAg只是HBV的外壳抗原，其本身并无传染性，而HBV DNA本身即可引起HBV感染，才是血液具有HBV传染性的直接指标。HBsAg阴性而HBV DNA阳性的血液具有传染性已被动物实验[3]、流行病学调查[4]及分子病毒学研究所证实[5]。本资料30.3%的消化科HBsAg阴性住院病人HBV DNA阳性，说明他们是HBsAg阴性的HBV携带者。以HBsAg为HBV传染性指标，会使这部分病人排除在HBV传染源之外，成为隐性的传染源。因此，消化科HBV携带者的隔离指标仍值得研究。
参考文献
1 骆抗先编著.乙型肝炎-基础和临床.北京：人民卫生出版社，1997，387.
2 高寿征主编.病毒性肝炎防治研究.北京：北京出版社，1993，305.
, http://www.100md.com
3 Alessandro NO, Roger ZM, Purcell RH, et al. Infectity and pathoge-
nicity in chimpanzees of a surface gene mutant of hepatitis B virus that emerged in a vaccinated in fant. J Infect Dis,1997,175(3)∶511.
4 Lin HJ, Laicllan JY. Evidence for intrafamilial transmission of hepatitis B virus from sequence analysis of mutant HBV DNAs in two Chinese families. Lancet,1990,336∶208.
5 Sun CF, Pao CC, Wu SY, et al. Screening for hepatitis B virus in health blood donors by molecular DNA hydridization analysis. J Chin Microbiol,1998,26∶1848.
(1998 10 18收稿), 百拇医药