本室抗Hbe和抗HBc室间质评结果错误的原因与分析
作者：高荣升 杨立业 付成显
单位：高荣升：佳木斯大学医学院附属第一医院检验科；杨立业 付成显：佳木斯大学医学院检验系
关键词：抗Hbe；抗HBc；室间质量评价
黑龙江医药科学990320
室间质量评价可以客观地评价各实验室的试验结果，了解各实验室之间结果的差异，帮助其校正，使其结果具有可比性[1]。卫生部临床检验中心于1988年开始了全国乙肝标志物检验的室间质评工作。现将1994～1997年我室抗HBe和抗HBc室间质评的错误结果及其产生的原因分析如下。
1 材料与方法
1.1 对象
室间质评用质控物，卫生部临检中心发放，每年四批，每批五支；
, 百拇医药
1.2 试剂与仪器
抗HBe、抗HBc酶免试剂盒，华美生物工程公司产品：酶标仪，SLT-Rainbow，奥地利。
1.3 方法
在卫生部临检中心要求的指定日期，对该批质控物进行检验，其中抗HBc测定分为抗HBc(流)和抗HBc(临)两个项目。方法按试剂盒说明书严格要求进行，本室所得结果报卫生部临检中心，由临检中心对质评结果按以下方式[1]进行评分：样本检验结果与预期结果相符合时，获2分：不符合时获0分。通过各参与实验室的得分，获取该项目的全国平均分(
)和标准差(s)，通过SI公式获该室这个项目的SI得分：SI＝
, http://www.100md.com
当SI≥0时，说明该室该项目成绩居全国平均水平之上，即优于全国平均水平；当SI<0时，说明该室该项目成绩差于全国平均水平，处于全国平均水平之下。
2 结果
四年16批次80份样本的抗HBe测定，我室共有11份样本与预期结果不符，失误率13.8%。其中预期结果为阴性，而我室结果阳性(假阳性)7份，预期结果为阳性，我室结果阴性(假阴性)的4份。抗HBe错误的结果与全国平均水平的对比见表1。抗HBc测定共160次，我室有15次与预期结果不符，失误率9.4%，其中预期结果为阴性，而我室结果阳性(假阳性)6份，预期结果为阳性，我室结果阴性(假阴性)的9份。抗HBc错误的结果与全国平均水平的对比见表2。
表1 本室抗HBe错误结果与全国平均得分对照 批号
假阳性
, http://www.100md.com
假阴性
本室得分(x)
全国平均得分(x)
全国标准差(s)
SI
批号
本室得分(x)
全国平均得分(x)
全国标准差(s)
SI
942-2
0
1.68
, 百拇医药
0.71
-2.38
941-2
0
0.28
0.66
-0.42
961-1
0
1.92
0.37
-5.26
944-1
, http://www.100md.com
0
0.48
0.82
-0.58
971-5
0
1.81
0.58
-3.10
944-4
0
1.14
0.98
, 百拇医药
-1.16
972-4
0
1.94
0.35
-5.54
951-5
0
0.51
0.83
-0.61
973-3
0
, 百拇医药
1.95
0.32
-6.06
974-2
0
1.93
0.35
-5.47
974-5
0
1.43
0.89
-1.60
, 百拇医药
表2 本室抗HBc错误结果与全国平均得分对照 假阳性
假阴性
批号
本室得分(x)
全国平均得分(x)
全国标准差(s)
SI
批号
本室得分(x)
全国平均得分(x)
全国标准差(s)
SI
, http://www.100md.com
941-1
0
1.70
0.67
-2.53
944-4
0
1.16
0.96
-1.21
941-2
0
1.02
, http://www.100md.com
0.98
-1.03
951-2
0
1.52
0.83
-1.83
941-4
0
1.32
0.93
-1.42
951-4
, 百拇医药
0
0.61
0.91
-0.67
942-3
0
1.56
0.80
-4.99
952-5
0
1.35
0.92
, 百拇医药
-1.44
962-3
0
1.43
0.87
-1.64
961-2
0
1.02
0.98
-1.04
962-5
0
, 百拇医药
1.37
0.89
-1.55
963-1
0
1.28
0.93
-1.37
963-5
0
1.47
0.86
-1.71
, 百拇医药
971-1
0
1.30
0.93
-1.40
3 讨论
室间质评可以发现实验室本身不易发现的不准确性[1]，假阴性结果的存在。我室抗HBe测定出现了4份假阴性，对照同批次全国平均得分，其结果均较低，可以认为质控物中抗HBe的含量较低，全国各参与实验室的检出率都低。抗HBc测定的结果也反映了这种现象，即我室抗HBc假阴性时的全国平均得分也较低。可以认为国内使用的试剂盒敏感性普遍较低。从年度分布情况来看，我们使用的试剂盒敏感性不够，抗HBe主要出现于1994年，抗HBc则主要存在于1995和1996年。假阳性结果是我室抗HBe测定中存在的主要问题，11次错误的结果中有7次假阳性，抗HBc测定中也有6次假阳性，而同批次的全国平均得分均较高，导致我室SI负值过大，与全国的平均水平差距过大。这些假阳性结果的出现可能是在我室使用的试剂质量上及实验室操作等环节上存在着一些问题。抗HBe假阳性的结果主要出现于1997年，抗HBc假阳性则主要集中在1994年。抗HBe和抗HBc的酶免法检测，所用的方法为竞争抑制法，其实验结果取决于阴性对照值的高低。即(S-P)/N≥0.5或N/P≥2.1为cut off值，阴性对照(N)值过高，阳性率增高，假阳性也随之增多。实验中我们发现，试剂盒中阴性对照孔的吸光度值远高于正常人血清孔的吸光度，将试剂盒中的阴性对照血清作总蛋白测定，其蛋白含量极低，似表明我们所使用试剂盒的阴性对照血清不是正常人血清，或蛋白浓度过低导致了吸光度过高，假阳性增多。由于实验原理所决定，酶免疫测定的竞争抑制法的实验结果，与实验所用的中和抗原的浓度和含量也有极大的关系[2]。中和抗原浓度和含量过高，试剂盒的敏感性下降，检出率低，假阴性增多；中和抗原的浓度和含量过低，试剂盒的敏感性提高，但假阳性的结果也增多。现国内使用的试剂盒多采用一步法，其中和抗原已加入到酶标抗体中，因此，我们认为，将中和抗原调整到合适的浓度，使试剂盒的敏感性和特异性均达到满意的程度，是各试剂厂家应重点做的工作。
, http://www.100md.com
酶免疫测定的影响因素较多，尤其是抗HBe等测定采用的竞争抑制法，又多了中和试剂这一影响最终结果的环节，因此试剂的质量是决定试验质量的关键因素。我室抗HBe和抗HBc假阴性、假阳性结果的出现均有年度分布的现象，也反映出生产家对试剂盒敏感性的要求有年度波动的现象。所以摘好实验室的质量控制，除加强实验室的条件建设、提高实验人员的技术素质之外，有必要建议试剂盒生产厂家进一步努力，使试剂盒的敏感性和特异性都达到一个较好的水平。
参考文献
1.郑怀竟主编.免疫学检验室间质评与室内质控.第1版,北京:北京医科大学中国协和医科大学出版社,1997,3～9
2.武建国主编.实用临床免疫学检验.第1版,南京:江苏科学技术出版社,1989:299
(1998-12-18收稿), http://www.100md.com
单位：高荣升：佳木斯大学医学院附属第一医院检验科；杨立业 付成显：佳木斯大学医学院检验系
关键词：抗Hbe；抗HBc；室间质量评价
黑龙江医药科学990320
室间质量评价可以客观地评价各实验室的试验结果，了解各实验室之间结果的差异，帮助其校正，使其结果具有可比性[1]。卫生部临床检验中心于1988年开始了全国乙肝标志物检验的室间质评工作。现将1994～1997年我室抗HBe和抗HBc室间质评的错误结果及其产生的原因分析如下。
1 材料与方法
1.1 对象
室间质评用质控物，卫生部临检中心发放，每年四批，每批五支；
, 百拇医药
1.2 试剂与仪器
抗HBe、抗HBc酶免试剂盒，华美生物工程公司产品：酶标仪，SLT-Rainbow，奥地利。
1.3 方法
在卫生部临检中心要求的指定日期，对该批质控物进行检验，其中抗HBc测定分为抗HBc(流)和抗HBc(临)两个项目。方法按试剂盒说明书严格要求进行，本室所得结果报卫生部临检中心，由临检中心对质评结果按以下方式[1]进行评分：样本检验结果与预期结果相符合时，获2分：不符合时获0分。通过各参与实验室的得分，获取该项目的全国平均分(
)和标准差(s)，通过SI公式获该室这个项目的SI得分：SI＝, http://www.100md.com
当SI≥0时，说明该室该项目成绩居全国平均水平之上，即优于全国平均水平；当SI<0时，说明该室该项目成绩差于全国平均水平，处于全国平均水平之下。
2 结果
四年16批次80份样本的抗HBe测定，我室共有11份样本与预期结果不符，失误率13.8%。其中预期结果为阴性，而我室结果阳性(假阳性)7份，预期结果为阳性，我室结果阴性(假阴性)的4份。抗HBe错误的结果与全国平均水平的对比见表1。抗HBc测定共160次，我室有15次与预期结果不符，失误率9.4%，其中预期结果为阴性，而我室结果阳性(假阳性)6份，预期结果为阳性，我室结果阴性(假阴性)的9份。抗HBc错误的结果与全国平均水平的对比见表2。
表1 本室抗HBe错误结果与全国平均得分对照 批号
假阳性
, http://www.100md.com
假阴性
本室得分(x)
全国平均得分(x)
全国标准差(s)
SI
批号
本室得分(x)
全国平均得分(x)
全国标准差(s)
SI
942-2
0
1.68
, 百拇医药
0.71
-2.38
941-2
0
0.28
0.66
-0.42
961-1
0
1.92
0.37
-5.26
944-1
, http://www.100md.com
0
0.48
0.82
-0.58
971-5
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1.81
0.58
-3.10
944-4
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1.14
0.98
, 百拇医药
-1.16
972-4
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1.94
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-5.54
951-5
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-0.61
973-3
0
, 百拇医药
1.95
0.32
-6.06
974-2
0
1.93
0.35
-5.47
974-5
0
1.43
0.89
-1.60
, 百拇医药
表2 本室抗HBc错误结果与全国平均得分对照 假阳性
假阴性
批号
本室得分(x)
全国平均得分(x)
全国标准差(s)
SI
批号
本室得分(x)
全国平均得分(x)
全国标准差(s)
SI
, http://www.100md.com
941-1
0
1.70
0.67
-2.53
944-4
0
1.16
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1.02
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0.98
-1.03
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0
1.52
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1.32
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-1.42
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-1.44
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3 讨论
室间质评可以发现实验室本身不易发现的不准确性[1]，假阴性结果的存在。我室抗HBe测定出现了4份假阴性，对照同批次全国平均得分，其结果均较低，可以认为质控物中抗HBe的含量较低，全国各参与实验室的检出率都低。抗HBc测定的结果也反映了这种现象，即我室抗HBc假阴性时的全国平均得分也较低。可以认为国内使用的试剂盒敏感性普遍较低。从年度分布情况来看，我们使用的试剂盒敏感性不够，抗HBe主要出现于1994年，抗HBc则主要存在于1995和1996年。假阳性结果是我室抗HBe测定中存在的主要问题，11次错误的结果中有7次假阳性，抗HBc测定中也有6次假阳性，而同批次的全国平均得分均较高，导致我室SI负值过大，与全国的平均水平差距过大。这些假阳性结果的出现可能是在我室使用的试剂质量上及实验室操作等环节上存在着一些问题。抗HBe假阳性的结果主要出现于1997年，抗HBc假阳性则主要集中在1994年。抗HBe和抗HBc的酶免法检测，所用的方法为竞争抑制法，其实验结果取决于阴性对照值的高低。即(S-P)/N≥0.5或N/P≥2.1为cut off值，阴性对照(N)值过高，阳性率增高，假阳性也随之增多。实验中我们发现，试剂盒中阴性对照孔的吸光度值远高于正常人血清孔的吸光度，将试剂盒中的阴性对照血清作总蛋白测定，其蛋白含量极低，似表明我们所使用试剂盒的阴性对照血清不是正常人血清，或蛋白浓度过低导致了吸光度过高，假阳性增多。由于实验原理所决定，酶免疫测定的竞争抑制法的实验结果，与实验所用的中和抗原的浓度和含量也有极大的关系[2]。中和抗原浓度和含量过高，试剂盒的敏感性下降，检出率低，假阴性增多；中和抗原的浓度和含量过低，试剂盒的敏感性提高，但假阳性的结果也增多。现国内使用的试剂盒多采用一步法，其中和抗原已加入到酶标抗体中，因此，我们认为，将中和抗原调整到合适的浓度，使试剂盒的敏感性和特异性均达到满意的程度，是各试剂厂家应重点做的工作。
, http://www.100md.com
酶免疫测定的影响因素较多，尤其是抗HBe等测定采用的竞争抑制法，又多了中和试剂这一影响最终结果的环节，因此试剂的质量是决定试验质量的关键因素。我室抗HBe和抗HBc假阴性、假阳性结果的出现均有年度分布的现象，也反映出生产家对试剂盒敏感性的要求有年度波动的现象。所以摘好实验室的质量控制，除加强实验室的条件建设、提高实验人员的技术素质之外，有必要建议试剂盒生产厂家进一步努力，使试剂盒的敏感性和特异性都达到一个较好的水平。
参考文献
1.郑怀竟主编.免疫学检验室间质评与室内质控.第1版,北京:北京医科大学中国协和医科大学出版社,1997,3～9
2.武建国主编.实用临床免疫学检验.第1版,南京:江苏科学技术出版社,1989:299
(1998-12-18收稿), http://www.100md.com