野玫瑰根对硫喷妥钠麻醉的小鼠T淋巴细胞亚群改变的影响
作者：王艳 白丰沛 付佳
单位：王艳：佳木斯大学医学院第一附院麻醉科；白丰沛 付佳：佳木斯大学医学院免疫教研室
关键词：野玫瑰根；T淋巴细胞；硫喷妥钠；免疫功能
黑龙江医药科学990301
提要 目的：以正常小鼠及硫喷妥钠麻醉后小鼠(简称硫麻)为对照，观察野玫瑰根醇提液及多糖成份对正常小鼠及硫麻后小鼠T细胞亚群影响。方法：T细胞亚群测定应用单克隆抗体直接免疫荧光技术，由流式细胞仪测定。结果：硫麻组较正常对照组CD4细胞、CD4/CD8比值下降，CD8细胞升高；服醇提液和多糖成份正常小鼠和服醇提液后麻醉组各指标无显著改变；服多糖后麻醉组CD4细胞、CD4/CD8比值下降；服醇提液麻醉组较硫麻对照组CD4细胞升高。结论：野玫瑰根醇提液可减轻硫麻引起的免疫功能抑制。
, http://www.100md.com
The effect of composition of wild rose root on change in T lymphocyte subsets in mice following thiopentane anaesthesia
Wang Yan, et al
Abstract Objective: To observe the change in T lymphocyte subsets in normal mice and the groups with thiopentane anesthesia (TA), both of them were given the composition of wild rose root extracted by alcohol (WRRP). The contrast group was composed of normal mice and TA mice. Method: The quantity of T (WRRAEC) or polysaccharides composition of wild rose root lymphocyte subsets was measured by flow cytometer and monocional antibodies and immunofluo-rescence technique. Results: 1. The CD4 cell and the CD4/CD8 ratio were decreased in the TA mice compared with normal mice , while the CD8 cell inoreased. 2. There was no obvious change in the quantity of CD4 and CD8 cell, both in normal groups with WRRAEC or WRRP and the TA mice used WRRAEC. 3. The CD4 cell and the CD4/CD8 ratio decreased in the groups with WRRP after TA. 4.After TA the CD4 cell increased in the groups with WRRAEC compared with those without WRRAEC. Conclusion: The composition of WRRAEC could mitigate the immunal inhibition of TA.
, 百拇医药
Key words wild rose root; T lymphocyte; Thiopentane Anesthesia
野玫瑰为野生蔷薇科植物，其根、花、果均可药用。野玫瑰根为其干燥成熟根茎。Yoshida[1]等发现其内含有内酯、鞣质、总甙、生物碱类、蛋白质、蒽醌、还原糖、总黄酮及酚类等成份。近年研究表明，野玫瑰根可增强免疫功能[2,3]，但它对T细胞亚群有何影响目前未见报道。本实验观察服用野玫瑰根醇提液及多糖成份的正常小鼠及其在硫喷妥钠麻醉后T淋巴细胞亚群有何变化。
1 材料和方法
1.1 药品制备[4]
野玫瑰根于初春采自黑龙江省佳木斯市四丰山，经洗净、切碎后称重。野玫瑰根以70%乙醇浸泡过夜，加热回流数小时，滤液为甲液；药渣水煎数次，滤液为乙液。甲、乙液分别加热浓缩至小体积，加乙醇至溶液含量80%以上，静止过夜后离心。甲上清液回收乙醇，加热至无醇味，以蒸馏水配成相当于每毫升含生药1g的醇提液。甲、乙液沉淀混合，以蒸馏水配成与醇提液同浓度的多糖溶液。
, http://www.100md.com
1.2 实验动物与分组
健康昆明种小白鼠、雄性、由白求恩医科大学动物部购进。7～9周龄，体重20～25g。完全随机分为6组。Ⅰ正常对照组；Ⅱ硫喷妥钠麻醉组；Ⅲ、Ⅳ醇提液组，Ⅴ、Ⅵ多糖组。Ⅰ、Ⅱ组以蒸馏水灌胃，0.5ml/d，Ⅲ～Ⅳ组分别以醇提液、多糖溶液灌胃，20g/kg.d。各组给药均每天1次，连续14d。其中Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ组于给药第14天，灌胃后6h以1%硫喷妥钠(上海新亚药业有限公司，批号9708101)生理盐水溶液60mg/kg腹腔注射麻醉，麻醉时间约为30～120min(以小鼠翻正反射消失为标准)。所有动物均于麻醉后20h同批处理，眼球摘除取血。
3 实验方法
T淋巴细胞亚群应用单克隆抗体直接免疫荧光技术由美国BD公司FACS Calibur流式细胞仪测定，使用软件Cellquest。FITC标记的大鼠抗小鼠CD4、CD8淋巴细胞抗体由北京医科大学免疫室购进。
, 百拇医药
4 结果
见附表。硫喷妥钠麻醉组小鼠较正常对照CD4细胞、CD4/CD8比值下降，CD8细胞升高。正常小鼠服用野玫瑰根各提取成份后CD4、CD8细胞无显著改变。而服醇提液组麻醉后CD4、CD8细胞亦无显著变化，服多糖组麻醉后则CD4细胞、CD4/CD8比值下降。服醇提液组麻醉后较不服药麻醉组CD4细胞升高。
附表 野玫瑰根提取成份对正常小鼠及硫喷妥钠麻醉小鼠T细胞亚群影响(
±s) 分组
例数(n)
, http://www.100md.com
CD4(%)
CD8(%)
CD4/CD8
Ⅰ(阴性对照)
8
40.99±5.37
20.96±3.80
2.02±0.50
Ⅱ(阳性对照)
8
35.99±4.69*
, http://www.100md.com
24.89±3.80*
1.48±0.29**
Ⅲ
5
39.79±5.49
22.61±4.68
1.79±0.35
Ⅳ
5
40.72±3.50△
24.23±3.35
1.72±0.35
, http://www.100md.com
Ⅴ
7
37.75±5.74
19.16±5.43
2.08±0.51
Ⅵ
7
34.97±5.01*
23.01±4.74
1.57±0.40*
与正常对照组比较*P<0.05 **P<0.01 与硫喷妥钠麻醉组比较△P<0.05
, http://www.100md.com
5 讨论
T淋巴细胞不仅是细胞免疫的效应细胞，而且还是重要的免疫调节细胞。其中CD4、CD8细胞对机体细胞免疫、体液免疫发挥重要的调节作用。免疫系统的稳定有赖于TH/Ts两个亚群之间的平衡。有研究表明[5]，CD4/CD8比值降低是疾病严重程度和预后不良的重要标志。麻醉是现代手术必不可少的环节。研究证实，麻醉药物可影响机体的免疫功能[6][7]。本实验亦观察到硫喷妥钠麻醉后小鼠CD4/CD8比值下降，引起免疫系统失衡、免疫功能抑制。硫喷妥钠是临床常用的巴比妥类静脉麻醉药，在非巴比妥类静脉全麻药中尚无可完全取代者[8]。本实验尝试在麻醉前服用野玫瑰根提取成份预防硫喷妥钠麻醉引起的T淋巴细胞亚群改变。结果表明野玫瑰根醇提液可减轻硫喷妥钠引起的免疫系统失衡。药物作用的机理尚不清楚，值得进一步研究。
, 百拇医药
参考文献
1.Yoshida T, Tanaka K, Xin-Min CH, et al. Dimeric ellagitannins laevigatins E,F and G, form rosa laevigata. Phytochemistry, 1989,28(9):2451
2.白丰沛,李玉环,王景华,等.野玫瑰根煎剂对小白鼠免疫功能增强与抗炎作用的实验研究.中国医药学报,1993,8(增):21
3.白丰沛,王景华,陈志,等.野玫瑰根煎剂对成年与老龄小鼠免疫功能影响的比较.佳木斯医学院学报,1994,17(6):30
4.佟丽华,杨波,王健华,等.三七多糖的提取分离.佳木斯医学院学报,1988,11(3):202
5.Syrijala H, Surcel HM, l lonen J.lOW CD4/CD8 lymphocyte ratin in acute myocardial infection. Clin Exp lmmunol, 1991, 83(2):326
6.成克定,综述.麻醉与免疫研究进展.国外医学,麻醉与复苏分册,1990,11(3):129
7.程明华,综述.麻醉对免疫细胞功能的影响.国外医学.麻醉与复苏分册,1990,11(3):137
8.郑斯聚,段世明,主编.麻醉药理学,第1版,北京:中国医药科技出版社,1990:78
(1998-09-14收稿 1998-09-29修回), http://www.100md.com
单位：王艳：佳木斯大学医学院第一附院麻醉科；白丰沛 付佳：佳木斯大学医学院免疫教研室
关键词：野玫瑰根；T淋巴细胞；硫喷妥钠；免疫功能
黑龙江医药科学990301
提要 目的：以正常小鼠及硫喷妥钠麻醉后小鼠(简称硫麻)为对照，观察野玫瑰根醇提液及多糖成份对正常小鼠及硫麻后小鼠T细胞亚群影响。方法：T细胞亚群测定应用单克隆抗体直接免疫荧光技术，由流式细胞仪测定。结果：硫麻组较正常对照组CD4细胞、CD4/CD8比值下降，CD8细胞升高；服醇提液和多糖成份正常小鼠和服醇提液后麻醉组各指标无显著改变；服多糖后麻醉组CD4细胞、CD4/CD8比值下降；服醇提液麻醉组较硫麻对照组CD4细胞升高。结论：野玫瑰根醇提液可减轻硫麻引起的免疫功能抑制。
, http://www.100md.com
The effect of composition of wild rose root on change in T lymphocyte subsets in mice following thiopentane anaesthesia
Wang Yan, et al
Abstract Objective: To observe the change in T lymphocyte subsets in normal mice and the groups with thiopentane anesthesia (TA), both of them were given the composition of wild rose root extracted by alcohol (WRRP). The contrast group was composed of normal mice and TA mice. Method: The quantity of T (WRRAEC) or polysaccharides composition of wild rose root lymphocyte subsets was measured by flow cytometer and monocional antibodies and immunofluo-rescence technique. Results: 1. The CD4 cell and the CD4/CD8 ratio were decreased in the TA mice compared with normal mice , while the CD8 cell inoreased. 2. There was no obvious change in the quantity of CD4 and CD8 cell, both in normal groups with WRRAEC or WRRP and the TA mice used WRRAEC. 3. The CD4 cell and the CD4/CD8 ratio decreased in the groups with WRRP after TA. 4.After TA the CD4 cell increased in the groups with WRRAEC compared with those without WRRAEC. Conclusion: The composition of WRRAEC could mitigate the immunal inhibition of TA.
, 百拇医药
Key words wild rose root; T lymphocyte; Thiopentane Anesthesia
野玫瑰为野生蔷薇科植物，其根、花、果均可药用。野玫瑰根为其干燥成熟根茎。Yoshida[1]等发现其内含有内酯、鞣质、总甙、生物碱类、蛋白质、蒽醌、还原糖、总黄酮及酚类等成份。近年研究表明，野玫瑰根可增强免疫功能[2,3]，但它对T细胞亚群有何影响目前未见报道。本实验观察服用野玫瑰根醇提液及多糖成份的正常小鼠及其在硫喷妥钠麻醉后T淋巴细胞亚群有何变化。
1 材料和方法
1.1 药品制备[4]
野玫瑰根于初春采自黑龙江省佳木斯市四丰山，经洗净、切碎后称重。野玫瑰根以70%乙醇浸泡过夜，加热回流数小时，滤液为甲液；药渣水煎数次，滤液为乙液。甲、乙液分别加热浓缩至小体积，加乙醇至溶液含量80%以上，静止过夜后离心。甲上清液回收乙醇，加热至无醇味，以蒸馏水配成相当于每毫升含生药1g的醇提液。甲、乙液沉淀混合，以蒸馏水配成与醇提液同浓度的多糖溶液。
, http://www.100md.com
1.2 实验动物与分组
健康昆明种小白鼠、雄性、由白求恩医科大学动物部购进。7～9周龄，体重20～25g。完全随机分为6组。Ⅰ正常对照组；Ⅱ硫喷妥钠麻醉组；Ⅲ、Ⅳ醇提液组，Ⅴ、Ⅵ多糖组。Ⅰ、Ⅱ组以蒸馏水灌胃，0.5ml/d，Ⅲ～Ⅳ组分别以醇提液、多糖溶液灌胃，20g/kg.d。各组给药均每天1次，连续14d。其中Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ组于给药第14天，灌胃后6h以1%硫喷妥钠(上海新亚药业有限公司，批号9708101)生理盐水溶液60mg/kg腹腔注射麻醉，麻醉时间约为30～120min(以小鼠翻正反射消失为标准)。所有动物均于麻醉后20h同批处理，眼球摘除取血。
3 实验方法
T淋巴细胞亚群应用单克隆抗体直接免疫荧光技术由美国BD公司FACS Calibur流式细胞仪测定，使用软件Cellquest。FITC标记的大鼠抗小鼠CD4、CD8淋巴细胞抗体由北京医科大学免疫室购进。
, 百拇医药
4 结果
见附表。硫喷妥钠麻醉组小鼠较正常对照CD4细胞、CD4/CD8比值下降，CD8细胞升高。正常小鼠服用野玫瑰根各提取成份后CD4、CD8细胞无显著改变。而服醇提液组麻醉后CD4、CD8细胞亦无显著变化，服多糖组麻醉后则CD4细胞、CD4/CD8比值下降。服醇提液组麻醉后较不服药麻醉组CD4细胞升高。
附表 野玫瑰根提取成份对正常小鼠及硫喷妥钠麻醉小鼠T细胞亚群影响(
±s) 分组例数(n)
, http://www.100md.com
CD4(%)
CD8(%)
CD4/CD8
Ⅰ(阴性对照)
8
40.99±5.37
20.96±3.80
2.02±0.50
Ⅱ(阳性对照)
8
35.99±4.69*
, http://www.100md.com
24.89±3.80*
1.48±0.29**
Ⅲ
5
39.79±5.49
22.61±4.68
1.79±0.35
Ⅳ
5
40.72±3.50△
24.23±3.35
1.72±0.35
, http://www.100md.com
Ⅴ
7
37.75±5.74
19.16±5.43
2.08±0.51
Ⅵ
7
34.97±5.01*
23.01±4.74
1.57±0.40*
与正常对照组比较*P<0.05 **P<0.01 与硫喷妥钠麻醉组比较△P<0.05
, http://www.100md.com
5 讨论
T淋巴细胞不仅是细胞免疫的效应细胞，而且还是重要的免疫调节细胞。其中CD4、CD8细胞对机体细胞免疫、体液免疫发挥重要的调节作用。免疫系统的稳定有赖于TH/Ts两个亚群之间的平衡。有研究表明[5]，CD4/CD8比值降低是疾病严重程度和预后不良的重要标志。麻醉是现代手术必不可少的环节。研究证实，麻醉药物可影响机体的免疫功能[6][7]。本实验亦观察到硫喷妥钠麻醉后小鼠CD4/CD8比值下降，引起免疫系统失衡、免疫功能抑制。硫喷妥钠是临床常用的巴比妥类静脉麻醉药，在非巴比妥类静脉全麻药中尚无可完全取代者[8]。本实验尝试在麻醉前服用野玫瑰根提取成份预防硫喷妥钠麻醉引起的T淋巴细胞亚群改变。结果表明野玫瑰根醇提液可减轻硫喷妥钠引起的免疫系统失衡。药物作用的机理尚不清楚，值得进一步研究。
, 百拇医药
参考文献
1.Yoshida T, Tanaka K, Xin-Min CH, et al. Dimeric ellagitannins laevigatins E,F and G, form rosa laevigata. Phytochemistry, 1989,28(9):2451
2.白丰沛,李玉环,王景华,等.野玫瑰根煎剂对小白鼠免疫功能增强与抗炎作用的实验研究.中国医药学报,1993,8(增):21
3.白丰沛,王景华,陈志,等.野玫瑰根煎剂对成年与老龄小鼠免疫功能影响的比较.佳木斯医学院学报,1994,17(6):30
4.佟丽华,杨波,王健华,等.三七多糖的提取分离.佳木斯医学院学报,1988,11(3):202
5.Syrijala H, Surcel HM, l lonen J.lOW CD4/CD8 lymphocyte ratin in acute myocardial infection. Clin Exp lmmunol, 1991, 83(2):326
6.成克定,综述.麻醉与免疫研究进展.国外医学,麻醉与复苏分册,1990,11(3):129
7.程明华,综述.麻醉对免疫细胞功能的影响.国外医学.麻醉与复苏分册,1990,11(3):137
8.郑斯聚,段世明,主编.麻醉药理学,第1版,北京:中国医药科技出版社,1990:78
(1998-09-14收稿 1998-09-29修回), http://www.100md.com