重症乙型肝炎患者HBV前C区点突变及临床意义
作者：沈成义 周仲辉
单位：沈成义 (川北医学院病生教研室 南充 637000)；周仲辉 (川北医学院附属医院传染科)
关键词：重症肝炎；乙型肝炎病毒；基因突变；聚合酶链反应
川北医学院学报990306 摘 要 为探讨HBV前C区突变株感染与重症乙型肝炎的关系，我们用PCR方法对24例重症乙型肝炎患者HBV前C区第1896位点突变进行了检测，结果发现重症乙型肝炎患者单纯突变株测出率为45.83%，野生株与突变株同时测出率为41.67%，突变株总测出率高达87.5%，提示HBV前C区第1896位点突变易导致乙型肝炎重症化。
文章编号：1005-3697(1999)03-0011-02 中图分类号：R373.2 文献标识码：A
1 资料和方法
, 百拇医药
1.1 研究对象 HBsAg、抗HBe、HBV DNA 阳性24例重症乙型肝炎患者均系1997年5月—1999年5月住院者，其诊断标准参照第五次全国传染病寄生虫病学术会议修订标准，其中男性17例，女性7例，平均年龄(32.46±19.26)岁。
1.2 血清HBV DNA的制备和PCR扩增 待检血清25μl，加入裂解液(华美公司提供)25μl，煮浮15 min,离心后取上清即为HBV DNA模板液。根据已报道的HBV基因组DNA序列，按3′端碱基特异性聚合酶链反应分析原理设计引物[1]。3′端引物：3′TCC ACA CTC CAA AAG ACA(2287-2270)，野生株5′端引物：5′GTG CCT TGG GTG GCT TTG(1879—1896)，突变株5′端引物：5′GTG CCT TGG GTG GCT TTA(1879—1896)。在2μl HBV DNA模板液中分别加入PCR反应液和0.5nmol/L引物，置于美国基因公司生产的PCR自动循环仪中，95 ℃变性1 min,64 ℃退火1min,72 ℃延伸1.5 min,共30个循环，72 ℃5 min结束反应。取8μl PCR反应液行2%琼脂糖电泳，以出现408bp条带为阳性结果。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 DNA前C区点突变检测结果 单纯突变株阳性11例，占45.83%，单纯野生株阳性3例，占12.50%，突变株与野生株均为阳性者10例，占41.67%，突变株总检出率为87.5%。
2.2 性别、年龄与HBV突变株感染间关系 男、女患者突变株检出率分别为82.35%和85.71%，差异无显著意义(p>0.5)。野生株和突变株同时感染者、单纯突变株检出者及单纯突变株检出者平均年龄差异无显著性。
3 讨 论
HBV感染引起重症肝炎的原因多种多样，而HBV基因突变可导致乙型肝炎慢性化并能使病情加重已得到公认，但就重症乙型肝炎中HBV前C区突变株报道较少且病例数均较小。本文就24例乙型重症肝炎进行了乙型肝炎病毒前C区突变株(1896点G→A突变)的检测，结果单纯突变株检出率为45.83%，突变株与野生株同时检出率为41.67%，突变株总检出率为87.50%，与国内有关报道相似[2]，但高于慢性乙型肝炎的检出率[3]，提示HBV前C区1896位点G→A突变与肝损害的严重程度有关，临床检测HBV前C区1896位点G→A突变株对患者的诊疗及预后判断有重要意义。
, 百拇医药
从我们检测的24例乙型重症肝炎患者的结果分析来看，HBV突变株的检出率与性别、年龄无关，但由于病例数不够多，尚虽进一步研究。
参考文献
1 Goergen B.Comparison of mutation speciffic PCR and direct sequencing of PCR-prodct for the detection of te HBV pre-c stop codon. Hepatology, 1992;16:232
2 李旭，等.慢性乙型肝炎患者HBV前C区点突变有临床意义.中华肝脏病杂志，1998；4：223
3 王爱莲，等.乙型肝炎病毒前C区变异的研究.中华医学杂志，1994；74：144
(收稿日期：1999-06-30), http://www.100md.com
单位：沈成义 (川北医学院病生教研室 南充 637000)；周仲辉 (川北医学院附属医院传染科)
关键词：重症肝炎；乙型肝炎病毒；基因突变；聚合酶链反应
川北医学院学报990306 摘 要 为探讨HBV前C区突变株感染与重症乙型肝炎的关系，我们用PCR方法对24例重症乙型肝炎患者HBV前C区第1896位点突变进行了检测，结果发现重症乙型肝炎患者单纯突变株测出率为45.83%，野生株与突变株同时测出率为41.67%，突变株总测出率高达87.5%，提示HBV前C区第1896位点突变易导致乙型肝炎重症化。
文章编号：1005-3697(1999)03-0011-02 中图分类号：R373.2 文献标识码：A
1 资料和方法
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1.1 研究对象 HBsAg、抗HBe、HBV DNA 阳性24例重症乙型肝炎患者均系1997年5月—1999年5月住院者，其诊断标准参照第五次全国传染病寄生虫病学术会议修订标准，其中男性17例，女性7例，平均年龄(32.46±19.26)岁。
1.2 血清HBV DNA的制备和PCR扩增 待检血清25μl，加入裂解液(华美公司提供)25μl，煮浮15 min,离心后取上清即为HBV DNA模板液。根据已报道的HBV基因组DNA序列，按3′端碱基特异性聚合酶链反应分析原理设计引物[1]。3′端引物：3′TCC ACA CTC CAA AAG ACA(2287-2270)，野生株5′端引物：5′GTG CCT TGG GTG GCT TTG(1879—1896)，突变株5′端引物：5′GTG CCT TGG GTG GCT TTA(1879—1896)。在2μl HBV DNA模板液中分别加入PCR反应液和0.5nmol/L引物，置于美国基因公司生产的PCR自动循环仪中，95 ℃变性1 min,64 ℃退火1min,72 ℃延伸1.5 min,共30个循环，72 ℃5 min结束反应。取8μl PCR反应液行2%琼脂糖电泳，以出现408bp条带为阳性结果。
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2 结 果
2.1 DNA前C区点突变检测结果 单纯突变株阳性11例，占45.83%，单纯野生株阳性3例，占12.50%，突变株与野生株均为阳性者10例，占41.67%，突变株总检出率为87.5%。
2.2 性别、年龄与HBV突变株感染间关系 男、女患者突变株检出率分别为82.35%和85.71%，差异无显著意义(p>0.5)。野生株和突变株同时感染者、单纯突变株检出者及单纯突变株检出者平均年龄差异无显著性。
3 讨 论
HBV感染引起重症肝炎的原因多种多样，而HBV基因突变可导致乙型肝炎慢性化并能使病情加重已得到公认，但就重症乙型肝炎中HBV前C区突变株报道较少且病例数均较小。本文就24例乙型重症肝炎进行了乙型肝炎病毒前C区突变株(1896点G→A突变)的检测，结果单纯突变株检出率为45.83%，突变株与野生株同时检出率为41.67%，突变株总检出率为87.50%，与国内有关报道相似[2]，但高于慢性乙型肝炎的检出率[3]，提示HBV前C区1896位点G→A突变与肝损害的严重程度有关，临床检测HBV前C区1896位点G→A突变株对患者的诊疗及预后判断有重要意义。
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从我们检测的24例乙型重症肝炎患者的结果分析来看，HBV突变株的检出率与性别、年龄无关，但由于病例数不够多，尚虽进一步研究。
参考文献
1 Goergen B.Comparison of mutation speciffic PCR and direct sequencing of PCR-prodct for the detection of te HBV pre-c stop codon. Hepatology, 1992;16:232
2 李旭，等.慢性乙型肝炎患者HBV前C区点突变有临床意义.中华肝脏病杂志，1998；4：223
3 王爱莲，等.乙型肝炎病毒前C区变异的研究.中华医学杂志，1994；74：144
(收稿日期：1999-06-30), http://www.100md.com