高效液相色谱法测定环孢素A滴眼液的含量
作者：张海燕 钟晓斌 黄振光
单位：张海燕(广西南宁市第二人民医院 南宁530031)；钟晓斌 黄振光(广西医科大学第一附属医院)
关键词：环胞素A；高效液相色谱法；滴眼液
中国医院药学杂志990311 摘要 目的:建立测定CsA滴眼液含量的HPLC法。方法:流动相为甲醇-水(84∶16)，检测波长214 nm，样品提取过滤后进行分析。结果:线性范围为5～40 ng.ml-1，相关系数r=0.9999，精密度1.10%，加样回收率100.1%。结论:该法简便，适用于环孢素A滴眼液的含量测定。
Determination of CsA eye drops by HPLC
Zhang Haiyan,Zhong Xiaobin,Huang Zhenguang
, http://www.100md.com
(The Second Hospital of Nanning,Nanning 530031)
ABSTRACT OBJECTIVE:A simple high performance liquid chromatographic method was established for determination of CsA eye drops.METHODS:The mobile phase was methanol-water(84∶16).The UV dectector was set at 214 nm,the sample was extracted by mobile phase.RESULTS:The linear range was from 5～40 ng.ml-1 r=0.999 9.The relative standard deviation was 1.10%.The recovery was 100.1%.CONCLUSIONS:The method is suitable for the determination of eye drops.
, http://www.100md.com
KEY WORDS cyclosporine,HPLC,eyedrops
环孢素A(Cyclosporine CsA)用于多种组织器官移植的排斥反应预防及一些免疫性疾病的治疗[1]，根据临床需要配制成0.5%环孢素A滴眼液，应用于眼角膜移植术后，由于其以蓖麻油为溶媒，含量测定较困难，根据文献[2]CsA其它制剂的测定方法，本文采用HPLC法测定其含量，操作简便，结果准确。
1 仪器与试药
1.1 仪器 LC-6A高效液相色谱仪(日本岛津)，SPD-6AV紫外检测器，C-R4A数据处理机，80-2型离心机(上海手术器械厂)，离心式微孔滤膜过滤器(0.45 μm天津市色谱科学技术公司产品开发部)。
1.2 试药 环孢素A对照品(浙江省药品检定所976 μg.mg-1)，0.5%环孢素A滴眼液(本院配，批号980114)，甲醇(优级纯，北京化工厂)。
, http://www.100md.com
1.3 处方 环孢素A注射液250 mg×2支(每支5 ml)，预处理蓖麻油90 ml。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Shim-Pack CLC-C8柱(150 mm×6 mm)，流动相：甲醇∶水(84∶16)，流：1.0 ml.min-1，检测波长：214 nm，柱温：70 ℃。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取对照品适量，置10 ml容量瓶中，加流动相溶解，配成浓度为1 μg.μl-1溶液。
2.3 样品溶液制备 用微量吸样器精密吸取0.2 ml样品置50 ml容量瓶中，加流动相超声波振荡，使CsA溶解定容后，用微孔滤膜离心过滤，得样品溶液。
, 百拇医药
2.4 线性关系 取对照品溶液适量，用流动相配制成5，10，20，30，40 ng.μl-1系列浓度，另取10 μl测定，以浓度X对峰高Y进行线性回归，得方程为：Y=72.14 X-3.04(r=0.999 9。结果表明：在5～40 μg.μl-1范围内线性关系良好。
2.5 稳定性试验 将样品溶液、对照品溶液放置24 h测定其峰高值基本不变。
2.6 系统适用性实验 取CsA标准液稀释后进行测定，色谱图见图1，计算理论塔板数为3 777，样品溶液进样测定，色谱图见图2，计算CsA与杂质峰的分离度为2.7。
图 1 标准溶液色谱图
, 百拇医药
图 2 样品溶液色谱图
2.7 精密度试验 同一样品取6份按样品溶液项下处理，进行分析，相对标准偏差为1.10%。
2.8 加样回收率 精密量取已知含量的样品6份，定量加入CsA对照品，依法测定，平均回收率为100.1%，RSD为1.4%。
2.9 样品测定 取0.5%环孢素A滴眼液三批970109，970302，970429，按“样品溶液测定”项下操作，测定结果为103.2%±1.2%，102.7%±1.6%，99.77%±0.47%。
3 讨论
0.5%环孢素A滴眼液是由环孢素A注射液与蓖麻油配制而成，由于蓖麻油粘性大，且不溶于流动相组分，故不能直接稀释进样，进行色谱分析，另外，由于CsA的最大吸收浓度为210 nm，在此波长处测定，受杂质影响较大，采用紫外法测定也很困难，本文采用流动相对样品中的CsA进行超声波振荡提取，0.45 μm微孔滤膜过滤后分析，提取完全，误差小，易于操作。
文献测定方法采用缓冲溶液作为流动相[2]，易损害色谱柱和泵，本文改用C8柱，直接用甲醇-水为流动相，能使CsA出峰尖对称，无杂质干扰(见图2)，测定结果准确，适用本制剂的快速定量分析。
参考文献
1 戴德根主编.实用新编药物手册.北京：人民军医出版社，1994，第1版：906～911
2 USP Ⅹ Ⅹ Ⅲ.1995：443～446
(1998年3月23日收稿), 百拇医药
单位：张海燕(广西南宁市第二人民医院 南宁530031)；钟晓斌 黄振光(广西医科大学第一附属医院)
关键词：环胞素A；高效液相色谱法；滴眼液
中国医院药学杂志990311 摘要 目的:建立测定CsA滴眼液含量的HPLC法。方法:流动相为甲醇-水(84∶16)，检测波长214 nm，样品提取过滤后进行分析。结果:线性范围为5～40 ng.ml-1，相关系数r=0.9999，精密度1.10%，加样回收率100.1%。结论:该法简便，适用于环孢素A滴眼液的含量测定。
Determination of CsA eye drops by HPLC
Zhang Haiyan,Zhong Xiaobin,Huang Zhenguang
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(The Second Hospital of Nanning,Nanning 530031)
ABSTRACT OBJECTIVE:A simple high performance liquid chromatographic method was established for determination of CsA eye drops.METHODS:The mobile phase was methanol-water(84∶16).The UV dectector was set at 214 nm,the sample was extracted by mobile phase.RESULTS:The linear range was from 5～40 ng.ml-1 r=0.999 9.The relative standard deviation was 1.10%.The recovery was 100.1%.CONCLUSIONS:The method is suitable for the determination of eye drops.
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KEY WORDS cyclosporine,HPLC,eyedrops
环孢素A(Cyclosporine CsA)用于多种组织器官移植的排斥反应预防及一些免疫性疾病的治疗[1]，根据临床需要配制成0.5%环孢素A滴眼液，应用于眼角膜移植术后，由于其以蓖麻油为溶媒，含量测定较困难，根据文献[2]CsA其它制剂的测定方法，本文采用HPLC法测定其含量，操作简便，结果准确。
1 仪器与试药
1.1 仪器 LC-6A高效液相色谱仪(日本岛津)，SPD-6AV紫外检测器，C-R4A数据处理机，80-2型离心机(上海手术器械厂)，离心式微孔滤膜过滤器(0.45 μm天津市色谱科学技术公司产品开发部)。
1.2 试药 环孢素A对照品(浙江省药品检定所976 μg.mg-1)，0.5%环孢素A滴眼液(本院配，批号980114)，甲醇(优级纯，北京化工厂)。
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1.3 处方 环孢素A注射液250 mg×2支(每支5 ml)，预处理蓖麻油90 ml。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Shim-Pack CLC-C8柱(150 mm×6 mm)，流动相：甲醇∶水(84∶16)，流：1.0 ml.min-1，检测波长：214 nm，柱温：70 ℃。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取对照品适量，置10 ml容量瓶中，加流动相溶解，配成浓度为1 μg.μl-1溶液。
2.3 样品溶液制备 用微量吸样器精密吸取0.2 ml样品置50 ml容量瓶中，加流动相超声波振荡，使CsA溶解定容后，用微孔滤膜离心过滤，得样品溶液。
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2.4 线性关系 取对照品溶液适量，用流动相配制成5，10，20，30，40 ng.μl-1系列浓度，另取10 μl测定，以浓度X对峰高Y进行线性回归，得方程为：Y=72.14 X-3.04(r=0.999 9。结果表明：在5～40 μg.μl-1范围内线性关系良好。
2.5 稳定性试验 将样品溶液、对照品溶液放置24 h测定其峰高值基本不变。
2.6 系统适用性实验 取CsA标准液稀释后进行测定，色谱图见图1，计算理论塔板数为3 777，样品溶液进样测定，色谱图见图2，计算CsA与杂质峰的分离度为2.7。
图 1 标准溶液色谱图
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图 2 样品溶液色谱图
2.7 精密度试验 同一样品取6份按样品溶液项下处理，进行分析，相对标准偏差为1.10%。
2.8 加样回收率 精密量取已知含量的样品6份，定量加入CsA对照品，依法测定，平均回收率为100.1%，RSD为1.4%。
2.9 样品测定 取0.5%环孢素A滴眼液三批970109，970302，970429，按“样品溶液测定”项下操作，测定结果为103.2%±1.2%，102.7%±1.6%，99.77%±0.47%。
3 讨论
0.5%环孢素A滴眼液是由环孢素A注射液与蓖麻油配制而成，由于蓖麻油粘性大，且不溶于流动相组分，故不能直接稀释进样，进行色谱分析，另外，由于CsA的最大吸收浓度为210 nm，在此波长处测定，受杂质影响较大，采用紫外法测定也很困难，本文采用流动相对样品中的CsA进行超声波振荡提取，0.45 μm微孔滤膜过滤后分析，提取完全，误差小，易于操作。
文献测定方法采用缓冲溶液作为流动相[2]，易损害色谱柱和泵，本文改用C8柱，直接用甲醇-水为流动相，能使CsA出峰尖对称，无杂质干扰(见图2)，测定结果准确，适用本制剂的快速定量分析。
参考文献
1 戴德根主编.实用新编药物手册.北京：人民军医出版社，1994，第1版：906～911
2 USP Ⅹ Ⅹ Ⅲ.1995：443～446
(1998年3月23日收稿), 百拇医药