干扰素-α1b治疗前C区变异株引起的慢性乙型肝炎的疗效
作者：邱望龙 崔雪莲 皇甫丽 黄四邑 潘志灵 刘梅花
单位：
关键词：
中华传染病杂志990315
α-干扰素是目前认为治疗慢性乙型肝炎(慢乙肝)抗病毒最有效的药物之一，但仅部分有效，治疗前血清中HBV DNA含量和丙氨酸转氨酶(ALT)水平是其重要的影响因素[1]。近年分子生物学技术的进展发现HBV基因变异可能是影响干扰素疗效的另一重要因素[2]。HBV前C区核苷酸1896G置换成A(A 1896变异)，产生一终止密码，使HBe蛋白合成提前终止，但不影响病毒复制和HBc蛋白合成。该前C区突变株在我国慢乙肝患者中检出率高[3]，其对干扰素治疗应答如何尚无定论。我们对11例用基因重组干扰素-α1b治疗的前C区A 1896变异慢乙肝患者进行了前瞻性研究，现将结果报告如下。
, 百拇医药
材料和方法
一、研究对象
40例用干扰素治疗慢乙肝是本院传染科1995～1996年住院患者，诊断分型标准按1995年(北京)第五次全国传染病与寄生虫病学术会议修订的方案。干扰素-α1b(赛洛金，深圳科兴公司生产)，300万单位，每周3次，肌内注射，疗程6个月。于治疗前和治疗后每隔1个月检测ALT和HBV DNA含量，随访6个月，期间不用任何降酶药。
将6个月疗程后ALT降至正常，血清中HBV DNA(分子杂交法)转阴者评为有应答；疗程结束时ALT仍未降至正常评为无应答；随访6个月内又出现ALT升高者为复发；随访6个月内ALT持续正常者为持续应答。其中11例在治疗前用聚合酶链反应(PCR)结合限制性片段长段多态性(RFLP)技术检出有前C区A 1896变异株感染，称为变异株组，余29例未检出A 1896变异株者称为野生株组。两组治疗前各项临床参数见表1，比较差异无显著性(P>0.05)。
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表1 两组临床资料比较 临床参数
变异株组
野生株组
例数
11
29
性别(男/女)
11/0
27/2
年龄(岁)
33.5±9.9
29.5±11.9
病程(年)
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5.9±4.8
6.1±5.1
慢性肝炎 轻度
8
22
中度
3
7
HBeAg(+)
4
21
抗-HBe(+)
7
, 百拇医药
8
ALT(IU/L)
255.3±129.3
254.0±155.4
ALB(g/L)
39.7±2.2
41.5±3.1
二、方法
(一) 血清HBV标志检测 HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc均用酶免疫法测定，试剂由深圳月亮湾生物制品公司生产。
(二) HBV前C区A 1896变异检测 套式-PCR(Nested-PCR)扩增HBV前C/C区基因，用错配PCR结合RFLP分析来检测前C区A 1896点突变，所用引物和操作步骤详见文献[4]。
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(三) HBV DNA定量 采用信号引物能量转移的定量PCR，EP-9600扩增仪，AG-9600荧光分析检测仪，试剂系美国Biotronics公司产品，不对称扩增和信号扩增等操作严格按试剂说明书进行，具体步骤见文献[5]。结果
一、前C突变株慢乙肝干扰素治疗应答
11例前C区A 1896变异株慢乙肝中6例为变异株和野生株混合感染，其中4例血清HBeAg阳性，2例为血清抗-HBe阳性。5例单独变异株感染均为血清抗-HBe阳性。11例中有7例治疗结束时ALT降至正常，近期应答率为63%，其中5例在随访6个月内复发，复发率为71%(5/7)，持续应答率为18%(2/11)，无应答者4例。1例变异株混合和1例单独感染者在疗程结束时和随访中变异株分别被清除，而2例变异株混合感染者在随访中野生株被清除，变为单独变异株感染。1例野生株患者在干扰素治疗过程中转变为变异株感染，并对干扰素治疗无应答。与野生株对照组的近期应答率65%(19/29)比较差异无显著性(P>0.75)，但复发率和持续应答率则明显低于和高于变异株组。
, 百拇医药
二、变异株组干扰素治疗前后HBV DNA定量及与疗效的关系
A 1896变异株组和野生株组治疗前HBV DNA含量(见表2)比较无统计学差异(P>0.2)，两组疗程结束时DNA定量均显著低于治疗前(P<0.001)，但随访6个月后DNA含量逐渐回升，变异株组与治疗前比较差异无显著性(P>0.2)，而野生株组仍显著低于治疗前(P<0.005)。
表2 两组干扰素治疗前、后HBV DNA含量比较(
,拷贝/μl) 分 组
例数
治疗前
疗程结束时
, 百拇医药
随访6个月
变异株组
11
5.7±0.9
3.4±0.8
5.2±1.9
野生株组
29
5.3±1.2
2.7±1.6
3.8±2.1
注：表内HBV DNA含量为对数值
, 百拇医药
讨论
本研究结果显示前C区A 1896变异慢乙肝患者对干扰素治疗近期应答率(63%)与野生株组相近，但半年内复发率高达57%，明显高于野生株对照组，使一年内的持续应答率仅为18%，表明前C区A 1896变异株虽不影响干扰素治疗应答，但可能是干扰素治疗后肝炎复发的一个重要原因。前C区A 1896变异株慢乙肝患者干扰素治疗应答国外报道不一，Brunetto等[6]报道抗-HBe(+)慢乙肝用干扰素治疗24周后有67%的HBV DNA转为阴性(分子杂交)，其疗效与HBeAg(+)者相近，但停药后半年内有87%患者复发。而Lok等[7]报道A 1896变异患者干扰素治疗55%可获得持续应答(随访半年)，明显高于野生株组的17%，但同时发现A 1896变异者其ALT水平相对较高，因此作者认为感染A 1896变异株者对干扰素应答高可能是间接的。Fattovich等[2]认为对干扰素的应答能力不受前C区变异的影响，但受C基因变异的影响。本研究结果与Brunetto等[6]的报道相同。
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干扰素有调节机体免疫应答的作用，对HBV感染施加免疫压力，有潜在诱发变异可能。我们在29例野生株干扰素治疗过程中只有1例转换为变异株感染，且该例对干扰素无应答。表明干扰素治疗诱发A 1896变异的可能性不大，但A 1896变异的出现可能会使干扰素治疗失败。当然，我们仅检测前C区A 1896一个点突变，干扰素治疗是否可诱发其它部位如C基因的变异值得进一步探讨。
A 1896变异组和野生株组在治疗前HBV DNA含量无显著性差别，疗程结束时两者都明显下降，表明两者对干扰素都有应答，但变异组在随访中HBV DNA含量又明显上升至治疗前水平，野生株组也有所回升但仍明显低于治疗前水平。进一步说明A 1896变异虽不影响干扰素应答，但可能是治疗后复发的一个重要因素。, http://www.100md.com
单位：
关键词：
中华传染病杂志990315
α-干扰素是目前认为治疗慢性乙型肝炎(慢乙肝)抗病毒最有效的药物之一，但仅部分有效，治疗前血清中HBV DNA含量和丙氨酸转氨酶(ALT)水平是其重要的影响因素[1]。近年分子生物学技术的进展发现HBV基因变异可能是影响干扰素疗效的另一重要因素[2]。HBV前C区核苷酸1896G置换成A(A 1896变异)，产生一终止密码，使HBe蛋白合成提前终止，但不影响病毒复制和HBc蛋白合成。该前C区突变株在我国慢乙肝患者中检出率高[3]，其对干扰素治疗应答如何尚无定论。我们对11例用基因重组干扰素-α1b治疗的前C区A 1896变异慢乙肝患者进行了前瞻性研究，现将结果报告如下。
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材料和方法
一、研究对象
40例用干扰素治疗慢乙肝是本院传染科1995～1996年住院患者，诊断分型标准按1995年(北京)第五次全国传染病与寄生虫病学术会议修订的方案。干扰素-α1b(赛洛金，深圳科兴公司生产)，300万单位，每周3次，肌内注射，疗程6个月。于治疗前和治疗后每隔1个月检测ALT和HBV DNA含量，随访6个月，期间不用任何降酶药。
将6个月疗程后ALT降至正常，血清中HBV DNA(分子杂交法)转阴者评为有应答；疗程结束时ALT仍未降至正常评为无应答；随访6个月内又出现ALT升高者为复发；随访6个月内ALT持续正常者为持续应答。其中11例在治疗前用聚合酶链反应(PCR)结合限制性片段长段多态性(RFLP)技术检出有前C区A 1896变异株感染，称为变异株组，余29例未检出A 1896变异株者称为野生株组。两组治疗前各项临床参数见表1，比较差异无显著性(P>0.05)。
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表1 两组临床资料比较 临床参数
变异株组
野生株组
例数
11
29
性别(男/女)
11/0
27/2
年龄(岁)
33.5±9.9
29.5±11.9
病程(年)
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5.9±4.8
6.1±5.1
慢性肝炎 轻度
8
22
中度
3
7
HBeAg(+)
4
21
抗-HBe(+)
7
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8
ALT(IU/L)
255.3±129.3
254.0±155.4
ALB(g/L)
39.7±2.2
41.5±3.1
二、方法
(一) 血清HBV标志检测 HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc均用酶免疫法测定，试剂由深圳月亮湾生物制品公司生产。
(二) HBV前C区A 1896变异检测 套式-PCR(Nested-PCR)扩增HBV前C/C区基因，用错配PCR结合RFLP分析来检测前C区A 1896点突变，所用引物和操作步骤详见文献[4]。
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(三) HBV DNA定量 采用信号引物能量转移的定量PCR，EP-9600扩增仪，AG-9600荧光分析检测仪，试剂系美国Biotronics公司产品，不对称扩增和信号扩增等操作严格按试剂说明书进行，具体步骤见文献[5]。结果
一、前C突变株慢乙肝干扰素治疗应答
11例前C区A 1896变异株慢乙肝中6例为变异株和野生株混合感染，其中4例血清HBeAg阳性，2例为血清抗-HBe阳性。5例单独变异株感染均为血清抗-HBe阳性。11例中有7例治疗结束时ALT降至正常，近期应答率为63%，其中5例在随访6个月内复发，复发率为71%(5/7)，持续应答率为18%(2/11)，无应答者4例。1例变异株混合和1例单独感染者在疗程结束时和随访中变异株分别被清除，而2例变异株混合感染者在随访中野生株被清除，变为单独变异株感染。1例野生株患者在干扰素治疗过程中转变为变异株感染，并对干扰素治疗无应答。与野生株对照组的近期应答率65%(19/29)比较差异无显著性(P>0.75)，但复发率和持续应答率则明显低于和高于变异株组。
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二、变异株组干扰素治疗前后HBV DNA定量及与疗效的关系
A 1896变异株组和野生株组治疗前HBV DNA含量(见表2)比较无统计学差异(P>0.2)，两组疗程结束时DNA定量均显著低于治疗前(P<0.001)，但随访6个月后DNA含量逐渐回升，变异株组与治疗前比较差异无显著性(P>0.2)，而野生株组仍显著低于治疗前(P<0.005)。
表2 两组干扰素治疗前、后HBV DNA含量比较(
,拷贝/μl) 分 组例数
治疗前
疗程结束时
, 百拇医药
随访6个月
变异株组
11
5.7±0.9
3.4±0.8
5.2±1.9
野生株组
29
5.3±1.2
2.7±1.6
3.8±2.1
注：表内HBV DNA含量为对数值
, 百拇医药
讨论
本研究结果显示前C区A 1896变异慢乙肝患者对干扰素治疗近期应答率(63%)与野生株组相近，但半年内复发率高达57%，明显高于野生株对照组，使一年内的持续应答率仅为18%，表明前C区A 1896变异株虽不影响干扰素治疗应答，但可能是干扰素治疗后肝炎复发的一个重要原因。前C区A 1896变异株慢乙肝患者干扰素治疗应答国外报道不一，Brunetto等[6]报道抗-HBe(+)慢乙肝用干扰素治疗24周后有67%的HBV DNA转为阴性(分子杂交)，其疗效与HBeAg(+)者相近，但停药后半年内有87%患者复发。而Lok等[7]报道A 1896变异患者干扰素治疗55%可获得持续应答(随访半年)，明显高于野生株组的17%，但同时发现A 1896变异者其ALT水平相对较高，因此作者认为感染A 1896变异株者对干扰素应答高可能是间接的。Fattovich等[2]认为对干扰素的应答能力不受前C区变异的影响，但受C基因变异的影响。本研究结果与Brunetto等[6]的报道相同。
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干扰素有调节机体免疫应答的作用，对HBV感染施加免疫压力，有潜在诱发变异可能。我们在29例野生株干扰素治疗过程中只有1例转换为变异株感染，且该例对干扰素无应答。表明干扰素治疗诱发A 1896变异的可能性不大，但A 1896变异的出现可能会使干扰素治疗失败。当然，我们仅检测前C区A 1896一个点突变，干扰素治疗是否可诱发其它部位如C基因的变异值得进一步探讨。
A 1896变异组和野生株组在治疗前HBV DNA含量无显著性差别，疗程结束时两者都明显下降，表明两者对干扰素都有应答，但变异组在随访中HBV DNA含量又明显上升至治疗前水平，野生株组也有所回升但仍明显低于治疗前水平。进一步说明A 1896变异虽不影响干扰素应答，但可能是治疗后复发的一个重要因素。, http://www.100md.com