简易革兰氏染色法及其质量控制
作者：赵舒斌
单位：赵舒斌(宁夏银川市临床检验中心 750001)
关键词：
宁夏医学杂志990333 为了使染色方法更简便、快速，我们采用了革兰染色3步法，效果和四步法一样，现将革兰染色3步法与质量控制报告如下。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 结晶紫染色液：(1)甲液：结晶紫2g，95%乙醇20ml。(2)乙液：草酸铵0.8g，蒸馏水80ml。甲乙2液先分别溶解，然后混合在一起，过滤除去残渣后装入滴瓶中备用。
1.1.2 碘液：碘1g，碘化钾2g，蒸馏水100ml。先取少量蒸馏水加入碘和碘化钾，使碘完全溶解后再加入全部蒸馏水，分装于滴瓶中备用。
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1.1.3 复红酒精溶液：碱性复红0.4g，95%乙醇100ml(北京化工厂化学醇)。
1.2 革兰染色三步法的染色步骤：①在细菌涂片上加上结晶紫染色液，染1～2分钟，水洗，除尽水滴。②在涂片上加上碘液，平放1～2分钟，水洗，除尽水滴。③在涂片上加上复红酒精溶液，平放50～60秒，水洗，自干后用油镜作镜检。革兰阳性的细菌染成深紫色，革兰阴性细菌染成浅红色，色泽鲜明。
1.3 质量控制：①取新培养的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌，分别制成细菌悬液(标准菌株大肠杆菌，ATCC，25922；金黄色葡萄球菌，ATCC，25923)。②取洁净玻片数张，平放桌上，取一白金耳的大肠杆菌菌液放置于各玻片的左瑞，涂布成一个直径1～1.5cm的圆形细菌涂片，自干。③再用一小白金耳的金黄色葡萄球菌菌液放置于大肠杆菌涂片的中央，使成0.5cm左右的葡萄球菌菌液区，自干后在火焰上通过数次固定。存放玻片盒中备用。④实际工作时，取上列涂片一张，在大肠杆菌和葡萄球菌双重涂片的右侧，放上1滴或2滴(2处)生理盐水，取1种或2种被检菌，分别制成薄薄的涂片，自干，火焰固定后，与左侧质控菌双重涂片同时作革兰3步法染色。
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1.4 结果观察：先用油浸镜观察质控菌涂片的染色结果。正确染色结果，在涂片中央可见到染成浅红色的革兰阴性大肠杆菌和染成深紫色的革兰阳性的葡萄球菌，对比鲜明。若将镜头向外侧移动，可见到双重涂片和单层细菌涂片的交界区，在交界区的内侧可见到革兰阴性大肠杆菌和革兰阳性的葡萄球菌同时存在，而在交界区的外侧则只能见到单一的染成浅红色的革兰阴性大肠杆菌，界限分明，容易识别。
只有在质控区见到正确的染色结果时，方可接着观察质控区右侧的被检细菌的染色结果。这样可以确保被检细菌染色结果的准确性。
2 讨论
在设置有质控的情况下，我们应用这种革兰染色3步法试染过多种细菌，包括革兰阳性细菌，如表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、甲型乙型链球菌、肠道链球菌和革兰阴性细菌，如大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、肠道产气杆菌、伤寒杆菌和卡他双球菌等，均取得准确无误的染色结果，色泽鲜明，容易识别。细菌学染色方法的可靠性，很大程度上取决于染色方法本身的技术稳定性。本染色法中，结晶紫染色和碘液处理两步规定为1分钟，稍长时间也不致影响染色结果，而第三步即用复红酒精溶液退色和复染一步可能是关键性的，我们规定为50～60秒，经过上百次的染色试验证明是可靠的〔1〕。为了查明这步的可靠性，我们曾用3种细菌的涂片做了30秒、1分钟、2分钟、3分钟的不同时间的退色复染试验。结果表明，在3分钟以内的各次试验中结果一致良好。这一结果说明，本革兰染色3步法具有良好的技术稳定性，容易掌握，不易发生变动。染色结果的可靠性另一方面也决定于被检细菌的状态，新鲜培养的细菌能正确反映它本身应有的染色性，而老培养则常常可使一些革兰阳性菌变为革兰阴性菌，值得注意。
革兰染色4步染色效果很好，但操作比较复杂，现代实验室工作繁忙，对各项技术方法有力求简便的要求，以便在有限的时间内完成更多的任务。本文报道的革兰染色3步法，基本原理没有改变，只是把酒精退色和复染的两步合成1步中进行，这就可以达到减少操作，缩短时间，提高工作效率的目的。
参考文献
1 黄元桐，等.革兰染色三步法与质量控制.微生物学报，1996.36(1)
(收稿：1998—05—25 修回：1998—08—11)责编：马兴忠, 百拇医药
单位：赵舒斌(宁夏银川市临床检验中心 750001)
关键词：
宁夏医学杂志990333 为了使染色方法更简便、快速，我们采用了革兰染色3步法，效果和四步法一样，现将革兰染色3步法与质量控制报告如下。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 结晶紫染色液：(1)甲液：结晶紫2g，95%乙醇20ml。(2)乙液：草酸铵0.8g，蒸馏水80ml。甲乙2液先分别溶解，然后混合在一起，过滤除去残渣后装入滴瓶中备用。
1.1.2 碘液：碘1g，碘化钾2g，蒸馏水100ml。先取少量蒸馏水加入碘和碘化钾，使碘完全溶解后再加入全部蒸馏水，分装于滴瓶中备用。
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1.1.3 复红酒精溶液：碱性复红0.4g，95%乙醇100ml(北京化工厂化学醇)。
1.2 革兰染色三步法的染色步骤：①在细菌涂片上加上结晶紫染色液，染1～2分钟，水洗，除尽水滴。②在涂片上加上碘液，平放1～2分钟，水洗，除尽水滴。③在涂片上加上复红酒精溶液，平放50～60秒，水洗，自干后用油镜作镜检。革兰阳性的细菌染成深紫色，革兰阴性细菌染成浅红色，色泽鲜明。
1.3 质量控制：①取新培养的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌，分别制成细菌悬液(标准菌株大肠杆菌，ATCC，25922；金黄色葡萄球菌，ATCC，25923)。②取洁净玻片数张，平放桌上，取一白金耳的大肠杆菌菌液放置于各玻片的左瑞，涂布成一个直径1～1.5cm的圆形细菌涂片，自干。③再用一小白金耳的金黄色葡萄球菌菌液放置于大肠杆菌涂片的中央，使成0.5cm左右的葡萄球菌菌液区，自干后在火焰上通过数次固定。存放玻片盒中备用。④实际工作时，取上列涂片一张，在大肠杆菌和葡萄球菌双重涂片的右侧，放上1滴或2滴(2处)生理盐水，取1种或2种被检菌，分别制成薄薄的涂片，自干，火焰固定后，与左侧质控菌双重涂片同时作革兰3步法染色。
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1.4 结果观察：先用油浸镜观察质控菌涂片的染色结果。正确染色结果，在涂片中央可见到染成浅红色的革兰阴性大肠杆菌和染成深紫色的革兰阳性的葡萄球菌，对比鲜明。若将镜头向外侧移动，可见到双重涂片和单层细菌涂片的交界区，在交界区的内侧可见到革兰阴性大肠杆菌和革兰阳性的葡萄球菌同时存在，而在交界区的外侧则只能见到单一的染成浅红色的革兰阴性大肠杆菌，界限分明，容易识别。
只有在质控区见到正确的染色结果时，方可接着观察质控区右侧的被检细菌的染色结果。这样可以确保被检细菌染色结果的准确性。
2 讨论
在设置有质控的情况下，我们应用这种革兰染色3步法试染过多种细菌，包括革兰阳性细菌，如表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、甲型乙型链球菌、肠道链球菌和革兰阴性细菌，如大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、肠道产气杆菌、伤寒杆菌和卡他双球菌等，均取得准确无误的染色结果，色泽鲜明，容易识别。细菌学染色方法的可靠性，很大程度上取决于染色方法本身的技术稳定性。本染色法中，结晶紫染色和碘液处理两步规定为1分钟，稍长时间也不致影响染色结果，而第三步即用复红酒精溶液退色和复染一步可能是关键性的，我们规定为50～60秒，经过上百次的染色试验证明是可靠的〔1〕。为了查明这步的可靠性，我们曾用3种细菌的涂片做了30秒、1分钟、2分钟、3分钟的不同时间的退色复染试验。结果表明，在3分钟以内的各次试验中结果一致良好。这一结果说明，本革兰染色3步法具有良好的技术稳定性，容易掌握，不易发生变动。染色结果的可靠性另一方面也决定于被检细菌的状态，新鲜培养的细菌能正确反映它本身应有的染色性，而老培养则常常可使一些革兰阳性菌变为革兰阴性菌，值得注意。
革兰染色4步染色效果很好，但操作比较复杂，现代实验室工作繁忙，对各项技术方法有力求简便的要求，以便在有限的时间内完成更多的任务。本文报道的革兰染色3步法，基本原理没有改变，只是把酒精退色和复染的两步合成1步中进行，这就可以达到减少操作，缩短时间，提高工作效率的目的。
参考文献
1 黄元桐，等.革兰染色三步法与质量控制.微生物学报，1996.36(1)
(收稿：1998—05—25 修回：1998—08—11)责编：马兴忠, 百拇医药