金黄地鼠颊囊癌变过程中细胞增殖及细胞凋亡的变化
作者：王文梅 郑际烈 周振英 唐巍 黄晓峰 蒋文晖
单位：210008 南京大学医学院附属口腔医院(王文梅、郑际烈、唐巍、黄晓峰、蒋文晖)；江苏省肿瘤防治研究所(周振英)
关键词：
中华口腔医学杂志/990326 我们采用流式细胞仪(flow cytometry, FCM)，对二甲基苯并蒽(dimethyl-benzanthracene, DMBA)诱导金黄地鼠颊囊癌模型癌变过程中DNA含量、细胞周期及细胞凋亡的变化进行了检测，观察该模型癌前病变及癌变过程的细胞动力学变化。
一、材料和方法
1.材料：5～8周叙利亚金黄地鼠，实验组25只(50侧)，0.5% DMBA丙酮液涂抹双侧颊囊，3次/周，空白对照组5只(10侧)。分别于诱导3、6、9、12周及诱导6周观察12周后处死动物，取颊粘膜进行常规病理检查和FCM(美国BD公司，型号FACS-Calibur)定量检测。
, 百拇医药
2.FCM定量检测：新鲜标本用机械剪碎网搓法制成单细胞悬液，再固定、碘化丙啶综合染液染色。使用FCM进行单参数DNA含量定量分析。微机控制程序自动获取10 000个细胞/样品，用ModFit LT程序分析细胞DNA含量。分析指标：①细胞凋亡(apoptosis, APO)；②S期细胞比例(S-phase cell fraction, SPF)，SPF=[S/(G0/1+S+G2M)]×100%；③DNA指数(DNA index, DI)和DNA倍体(二倍体和异倍体)。
二、结果
1.光镜观察结果：该动物模型具有从正常上皮细胞→上皮单纯增生→上皮异常增生→癌的进行性变化，诱导时间稳定，病理过程与人类相似。
2.FCM分析结果：癌肿组异倍体检出率最高为70%(14/20)，DNA含量最多，DI为1.188，与其他3组比较差异有显著性；SPF的增加在异常增生组达到顶峰，其与正常粘膜组和单纯增生组比较差异有显著性，与癌肿组比较差异无显著性。异常增生组APO异常增多，与其他3组比较差异有显著性(P<0.05)；癌肿组APO较异常增生组下降，差异显著，与正常对照组及单纯增生组比较差异无显著性(P>0.05)(表1，2)。
, 百拇医药
表1 四组细胞增殖及细胞凋亡检测结果 组别
例数
DNA指数
倍体
SPF
细胞凋亡
±s
二倍体
异倍体
平均秩次
平均秩次
正常粘膜组
, 百拇医药 10
1.000±0.000
10
0
12.45
25.80
单纯增生组
12
1.028±0.020
10
2
22.92
21.13
, 百拇医药
异常增生组
18
1.043±0.110
15
3
39.03
40.31
癌肿组
20
1.188±0.160
6
14
, 百拇医药
36.55
29.60
注：P<0.001；DNA指数：t值为5.145；DNA倍体：χ2=17.82
表2 四组SPF及APO两两比较的秩和检验 对比组
SPF
细胞凋亡
t值
P值
t值
P值
一组与二组
, 百拇医药
-1.726
>0.05
0.750
>0.05
一组与三组
-4.676
<0.001
-2.571
<0.01
一组与四组
-4.323
<0.001
-0.690
, 百拇医药
>0.05
二组与三组
-2.966
<0.005
-3.351
<0.005
二组与四组
-2.561
<0.02
-1.593
>0.05
三组与四组
-0.526
>0.05
2.260
<0.05
三、讨论
FCM研究发现，地鼠颊囊从正常、单纯增生、异常增生到癌，DNA含量和异倍体出现率逐渐增高，且异常增生组织中SPF与癌比较无差异，提示形态学癌变出现之前，生物学状态已有“癌变”迹象。APO在异常增生组织中明显增加，推测为机体调节的结果，以加速消除异常增生的细胞，当增殖与凋亡平衡遭到破坏时，癌发生的可能性增大。 (收稿：1998-04-10 修回：1999-03-04), 百拇医药
单位：210008 南京大学医学院附属口腔医院(王文梅、郑际烈、唐巍、黄晓峰、蒋文晖)；江苏省肿瘤防治研究所(周振英)
关键词：
中华口腔医学杂志/990326 我们采用流式细胞仪(flow cytometry, FCM)，对二甲基苯并蒽(dimethyl-benzanthracene, DMBA)诱导金黄地鼠颊囊癌模型癌变过程中DNA含量、细胞周期及细胞凋亡的变化进行了检测，观察该模型癌前病变及癌变过程的细胞动力学变化。
一、材料和方法
1.材料：5～8周叙利亚金黄地鼠，实验组25只(50侧)，0.5% DMBA丙酮液涂抹双侧颊囊，3次/周，空白对照组5只(10侧)。分别于诱导3、6、9、12周及诱导6周观察12周后处死动物，取颊粘膜进行常规病理检查和FCM(美国BD公司，型号FACS-Calibur)定量检测。
, 百拇医药
2.FCM定量检测：新鲜标本用机械剪碎网搓法制成单细胞悬液，再固定、碘化丙啶综合染液染色。使用FCM进行单参数DNA含量定量分析。微机控制程序自动获取10 000个细胞/样品，用ModFit LT程序分析细胞DNA含量。分析指标：①细胞凋亡(apoptosis, APO)；②S期细胞比例(S-phase cell fraction, SPF)，SPF=[S/(G0/1+S+G2M)]×100%；③DNA指数(DNA index, DI)和DNA倍体(二倍体和异倍体)。
二、结果
1.光镜观察结果：该动物模型具有从正常上皮细胞→上皮单纯增生→上皮异常增生→癌的进行性变化，诱导时间稳定，病理过程与人类相似。
2.FCM分析结果：癌肿组异倍体检出率最高为70%(14/20)，DNA含量最多，DI为1.188，与其他3组比较差异有显著性；SPF的增加在异常增生组达到顶峰，其与正常粘膜组和单纯增生组比较差异有显著性，与癌肿组比较差异无显著性。异常增生组APO异常增多，与其他3组比较差异有显著性(P<0.05)；癌肿组APO较异常增生组下降，差异显著，与正常对照组及单纯增生组比较差异无显著性(P>0.05)(表1，2)。
, 百拇医药
表1 四组细胞增殖及细胞凋亡检测结果 组别
例数
DNA指数
倍体
SPF
细胞凋亡
±s二倍体
异倍体
平均秩次
平均秩次
正常粘膜组
, 百拇医药 10
1.000±0.000
10
0
12.45
25.80
单纯增生组
12
1.028±0.020
10
2
22.92
21.13
, 百拇医药
异常增生组
18
1.043±0.110
15
3
39.03
40.31
癌肿组
20
1.188±0.160
6
14
, 百拇医药
36.55
29.60
注：P<0.001；DNA指数：t值为5.145；DNA倍体：χ2=17.82
表2 四组SPF及APO两两比较的秩和检验 对比组
SPF
细胞凋亡
t值
P值
t值
P值
一组与二组
, 百拇医药
-1.726
>0.05
0.750
>0.05
一组与三组
-4.676
<0.001
-2.571
<0.01
一组与四组
-4.323
<0.001
-0.690
, 百拇医药
>0.05
二组与三组
-2.966
<0.005
-3.351
<0.005
二组与四组
-2.561
<0.02
-1.593
>0.05
三组与四组
-0.526
>0.05
2.260
<0.05
三、讨论
FCM研究发现，地鼠颊囊从正常、单纯增生、异常增生到癌，DNA含量和异倍体出现率逐渐增高，且异常增生组织中SPF与癌比较无差异，提示形态学癌变出现之前，生物学状态已有“癌变”迹象。APO在异常增生组织中明显增加，推测为机体调节的结果，以加速消除异常增生的细胞，当增殖与凋亡平衡遭到破坏时，癌发生的可能性增大。 (收稿：1998-04-10 修回：1999-03-04), 百拇医药