RAU患者外周血NK细胞活性的测定
作者：邓雪莲 彭国光
单位：528000佛山，佛山市第一人民医院
关键词：复发性阿弗他溃疡；NK细胞；外周血活性测定
临床口腔医学杂志990311 提 要 目的 初步探讨复发性阿弗他溃疡(recurrent aphthous ulcer,RAU)患者外周血自然杀伤细胞(NK细胞)活性与RAU发病的关联性。方法 应用乳酸脱氢酶(LDH)法对22例RAU患者在发病时和不发病时的外周血NK细胞活性进行测定，并与11例无RAU病史的健康者的NK细胞活性对照。结果 RAU患者在发病时NK细胞活性是20.20±13.58%，不发病时17.92±13.68%，而健康人对照组NK细胞活性是16.45±6.53%，三组各自配对，统计学显示NK细胞活性无明显差别，(P>0.05)。结论 RAU患者发病时和不发病时外周血NK细胞活性与健康人群NK细胞差异在统计学上无显著意义，提示RAU的发生与外周血NK细胞活性可能无直接关联。
, http://www.100md.com
Investigation on the activity of Natural Killer cell of peripheral blood in patients with RAU
Dung Xuelan,Pung Gugang.
1st Municipal Hospital of Fushan.Fushan 528000.
Abstract Objective The main purpose of the present study was investigate the Natural Killer cell activity in patients with recurrent aphthous ulceration.Methods NK cell activity was measured with LDH during active and inactive disease of 22 patients with RAU.Eleven healthy persons with a negative history of RAU served as controls.Results The results of NK cell activity are as follows:Active patients:20.2±13.58%,Inactive patients:17.92±13.68%,Controls:16.45±6.53%,P>0.05.Conclusion The report suggests NK cell activity was not significantly different between active and inactive patients and between patients and controls.
, 百拇医药
Key words recurrent aphthousul ulceration Natrual Killer cell activity
材料和方法
检测对象：RAU的诊断以新版高等教材为标准，患者均为轻型RAU，患病时间为0.5～14年，所有RAU患者在采血前未经任何治疗，未服免疫抑制剂药物，无其它口腔疾患，身心健康。健康对照组者是自愿的，无系统性的免疫性疾病的常人(表1)。
表1 一般临床资料 组 别
例 数
性别(M/F)
年 龄
RAU患者
, http://www.100md.com
22
7/15
40.18±14.12
健康对照组
11
9/2
30.00±14.15
NK细胞活性检测：NK细胞活性检测采用乳酸脱氢酶(LDH)法〔1，2〕，每个病人和对照组都在上午7时30分至8时30分获取静脉血4～5毫升，以肝素抗凝，经梯度离心取外周血单个核细胞(PBMNC)洗2～3次，调细胞浓度为4×106/ml备用，此细胞为效应细胞，分别在有RAU病史患者发病时与不发病时，健康人对照组取样测定。
, 百拇医药
靶细胞K562经18～22小时培养后，取出洗2～3次，调细胞浓度为2×106/ml备用，加样，试阴、阳对照，将效细胞靶细胞混合成一定比例后，37℃孵育2小时，再离心取上清，在32℃环境中，用分光光度计测340nm波长的光密度，然后用公式换算成NK细胞杀伤率。
结果见表2。表2 三组外周血NK细胞活性结果比较 组 别
例 数
NK细胞活性
X±S(%)
a.健康对照组
11
, http://www.100md.com 16.45±6.53
b.RAU发病时NK细胞活性
22
20.20±13.58
c.RAU不发病时NK细胞活性
22
17.92±13.68
a组与b组，b组与c组及a组与c组的P值分别都大于0.05。
①RAU患者外周血NK细胞活性发病时为20.20±13.58%。②RAU患者外周血NK细胞活性不发病时为17.92±13.68%。③健康对照组外周血NK细胞活性为16.45±6.53%。统计学处理，两组作t检验，三组间作配对t检验，RAU患者外周血NK细胞活性在发病时、不发病时，并与健康对照组比较，无显著性差异,(P>0.05)。讨 论
, http://www.100md.com
1. RAU是一种多因素口腔粘膜病，多个研究报告RAU患者机体免疫功能异常，循环免疫复合物(CIC)增多，T细胞数目/功能下降，表现为体液免疫亢进，细胞免疫降低〔3，4，5〕。NK细胞是否参与RAU的发生，已引起有关学者的关注，国外有学者研究发现RAU患者的发生与外周血NK细胞活性无关〔6〕，但不少研究并不能证实NK细胞与RAU发生有直接联系〔7，8〕。本研究通过LDH法检测RAU患者外周血NK细胞活性，发现RAU病人发病时和不发病时NK细胞活性与正常健康人对比，无显著性差异(P>0.05)。结果与Pedersen研究结果一致〔6〕。
2. NK细胞是重要的淋巴细胞亚群，无细胞粘附性，无吞噬力，是一群异质性多功能的免疫细胞，能释放细胞因子，杀伤突变或受病毒感染的靶细胞，而且具有生理性免疫调节作用。Nabel等认为NK细胞对抗体生成的调节是通过直接杀伤B细胞而实现的〔9〕。也有学者认为NK细胞对B细胞的这种抑制作用可能是通过辅助细胞(A细胞)起作用的，NK细胞可能作用于A细胞表面的某一靶结构—转铁蛋白受体(TFR)，干扰其对抗原的递呈作用，从而间接地抑制B细胞的活性。Scala等研究发现，NK细胞对T细胞也有重要的调节作用，在T细胞增殖反应中起辅助细胞的作用。表明NK细胞对体液免疫起抑制作用，提高细胞免疫作用。而RAU发病的免疫不平衡，则为体液免疫亢进，细胞免疫降低，本研究中，RAU发病时，不发病时和健康人对照组的NK细胞活性无显著差异,提示NK细胞可能不参与RAU的免疫系统调节：体液免疫与细胞免疫改变导致RAU的过程与NK细胞无关。
, 百拇医药
3. 尽管本研究中RAN患者外周血NK细胞与RAU的发生可能无关。但这并不排除NK细胞在局部损害中发生作用。近来Pedersen和Sun等学者研究显示，RAU可能与水痘带状疱疹病毒或巨细胞病毒有关，NK细胞具有非特异杀伤受病毒侵犯的细胞。因而在RAU病群中进行水痘带状疱疹病毒和巨细胞病毒NK细胞非特异杀伤活力的研究是必要的。(在本研究过程中，得到我院临床研究所和统计室的大力支持，特此致谢!)
参考文献
1 陈丙蓉等，简易自然杀伤试验—LDH释放改良法，上海免疫学杂志.1989；9(4)：218
2 车至香等，T淋巴细胞亚群及NK细胞活性在胃癌时的变化，中国实验临床免疫学杂志.1995；7(1)31～32
3 黄永谦，洪虹.复发性口疮患者部分免疫指标的检测及分析，实用口腔医学杂志，1994；10(3)：212
, 百拇医药
4 魏秀峰等.复发性阿弗它溃疡患者IL2活性IL2受体及Ts功能的研究，口腔医学纵横杂志，1994；10(4)：207
5 Leher t.Immunologic aspect of recurrent oral ulcers.Oral Surg.1972;33:80
6 Pedersen A.Pedersen BK.Natural killer cell function and number of peripheral blood are nol altered in reurrent aphthous ulceration.Oral Surg,Oral Med,Oral Pathol.76(5)619-9,1993 Nov.
7 Kaneko F,Takanhashiy.Muramatsu R,etal.Natural killer cell numbers and function in peripheral blood lymphoid cells in Behcet’s disease.Br J Dermatol 1985;113:313～8.
8 Hamzaouik,Ayed Kh,Hamza M,Touraine JL.Natural Killer cells in behcet’s disease.Clim Exp Immunol 1988;71:126～31.
9 卓安山等，NK细胞的基础和临床研究进展，上海免疫学杂志，1991；11(3)：189～192
(收稿：1999—01—22), 百拇医药
单位：528000佛山，佛山市第一人民医院
关键词：复发性阿弗他溃疡；NK细胞；外周血活性测定
临床口腔医学杂志990311 提 要 目的 初步探讨复发性阿弗他溃疡(recurrent aphthous ulcer,RAU)患者外周血自然杀伤细胞(NK细胞)活性与RAU发病的关联性。方法 应用乳酸脱氢酶(LDH)法对22例RAU患者在发病时和不发病时的外周血NK细胞活性进行测定，并与11例无RAU病史的健康者的NK细胞活性对照。结果 RAU患者在发病时NK细胞活性是20.20±13.58%，不发病时17.92±13.68%，而健康人对照组NK细胞活性是16.45±6.53%，三组各自配对，统计学显示NK细胞活性无明显差别，(P>0.05)。结论 RAU患者发病时和不发病时外周血NK细胞活性与健康人群NK细胞差异在统计学上无显著意义，提示RAU的发生与外周血NK细胞活性可能无直接关联。
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Investigation on the activity of Natural Killer cell of peripheral blood in patients with RAU
Dung Xuelan,Pung Gugang.
1st Municipal Hospital of Fushan.Fushan 528000.
Abstract Objective The main purpose of the present study was investigate the Natural Killer cell activity in patients with recurrent aphthous ulceration.Methods NK cell activity was measured with LDH during active and inactive disease of 22 patients with RAU.Eleven healthy persons with a negative history of RAU served as controls.Results The results of NK cell activity are as follows:Active patients:20.2±13.58%,Inactive patients:17.92±13.68%,Controls:16.45±6.53%,P>0.05.Conclusion The report suggests NK cell activity was not significantly different between active and inactive patients and between patients and controls.
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Key words recurrent aphthousul ulceration Natrual Killer cell activity
材料和方法
检测对象：RAU的诊断以新版高等教材为标准，患者均为轻型RAU，患病时间为0.5～14年，所有RAU患者在采血前未经任何治疗，未服免疫抑制剂药物，无其它口腔疾患，身心健康。健康对照组者是自愿的，无系统性的免疫性疾病的常人(表1)。
表1 一般临床资料 组 别
例 数
性别(M/F)
年 龄
RAU患者
, http://www.100md.com
22
7/15
40.18±14.12
健康对照组
11
9/2
30.00±14.15
NK细胞活性检测：NK细胞活性检测采用乳酸脱氢酶(LDH)法〔1，2〕，每个病人和对照组都在上午7时30分至8时30分获取静脉血4～5毫升，以肝素抗凝，经梯度离心取外周血单个核细胞(PBMNC)洗2～3次，调细胞浓度为4×106/ml备用，此细胞为效应细胞，分别在有RAU病史患者发病时与不发病时，健康人对照组取样测定。
, 百拇医药
靶细胞K562经18～22小时培养后，取出洗2～3次，调细胞浓度为2×106/ml备用，加样，试阴、阳对照，将效细胞靶细胞混合成一定比例后，37℃孵育2小时，再离心取上清，在32℃环境中，用分光光度计测340nm波长的光密度，然后用公式换算成NK细胞杀伤率。
结果见表2。表2 三组外周血NK细胞活性结果比较 组 别
例 数
NK细胞活性
X±S(%)
a.健康对照组
11
, http://www.100md.com 16.45±6.53
b.RAU发病时NK细胞活性
22
20.20±13.58
c.RAU不发病时NK细胞活性
22
17.92±13.68
a组与b组，b组与c组及a组与c组的P值分别都大于0.05。
①RAU患者外周血NK细胞活性发病时为20.20±13.58%。②RAU患者外周血NK细胞活性不发病时为17.92±13.68%。③健康对照组外周血NK细胞活性为16.45±6.53%。统计学处理，两组作t检验，三组间作配对t检验，RAU患者外周血NK细胞活性在发病时、不发病时，并与健康对照组比较，无显著性差异,(P>0.05)。讨 论
, http://www.100md.com
1. RAU是一种多因素口腔粘膜病，多个研究报告RAU患者机体免疫功能异常，循环免疫复合物(CIC)增多，T细胞数目/功能下降，表现为体液免疫亢进，细胞免疫降低〔3，4，5〕。NK细胞是否参与RAU的发生，已引起有关学者的关注，国外有学者研究发现RAU患者的发生与外周血NK细胞活性无关〔6〕，但不少研究并不能证实NK细胞与RAU发生有直接联系〔7，8〕。本研究通过LDH法检测RAU患者外周血NK细胞活性，发现RAU病人发病时和不发病时NK细胞活性与正常健康人对比，无显著性差异(P>0.05)。结果与Pedersen研究结果一致〔6〕。
2. NK细胞是重要的淋巴细胞亚群，无细胞粘附性，无吞噬力，是一群异质性多功能的免疫细胞，能释放细胞因子，杀伤突变或受病毒感染的靶细胞，而且具有生理性免疫调节作用。Nabel等认为NK细胞对抗体生成的调节是通过直接杀伤B细胞而实现的〔9〕。也有学者认为NK细胞对B细胞的这种抑制作用可能是通过辅助细胞(A细胞)起作用的，NK细胞可能作用于A细胞表面的某一靶结构—转铁蛋白受体(TFR)，干扰其对抗原的递呈作用，从而间接地抑制B细胞的活性。Scala等研究发现，NK细胞对T细胞也有重要的调节作用，在T细胞增殖反应中起辅助细胞的作用。表明NK细胞对体液免疫起抑制作用，提高细胞免疫作用。而RAU发病的免疫不平衡，则为体液免疫亢进，细胞免疫降低，本研究中，RAU发病时，不发病时和健康人对照组的NK细胞活性无显著差异,提示NK细胞可能不参与RAU的免疫系统调节：体液免疫与细胞免疫改变导致RAU的过程与NK细胞无关。
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3. 尽管本研究中RAN患者外周血NK细胞与RAU的发生可能无关。但这并不排除NK细胞在局部损害中发生作用。近来Pedersen和Sun等学者研究显示，RAU可能与水痘带状疱疹病毒或巨细胞病毒有关，NK细胞具有非特异杀伤受病毒侵犯的细胞。因而在RAU病群中进行水痘带状疱疹病毒和巨细胞病毒NK细胞非特异杀伤活力的研究是必要的。(在本研究过程中，得到我院临床研究所和统计室的大力支持，特此致谢!)
参考文献
1 陈丙蓉等，简易自然杀伤试验—LDH释放改良法，上海免疫学杂志.1989；9(4)：218
2 车至香等，T淋巴细胞亚群及NK细胞活性在胃癌时的变化，中国实验临床免疫学杂志.1995；7(1)31～32
3 黄永谦，洪虹.复发性口疮患者部分免疫指标的检测及分析，实用口腔医学杂志，1994；10(3)：212
, 百拇医药
4 魏秀峰等.复发性阿弗它溃疡患者IL2活性IL2受体及Ts功能的研究，口腔医学纵横杂志，1994；10(4)：207
5 Leher t.Immunologic aspect of recurrent oral ulcers.Oral Surg.1972;33:80
6 Pedersen A.Pedersen BK.Natural killer cell function and number of peripheral blood are nol altered in reurrent aphthous ulceration.Oral Surg,Oral Med,Oral Pathol.76(5)619-9,1993 Nov.
7 Kaneko F,Takanhashiy.Muramatsu R,etal.Natural killer cell numbers and function in peripheral blood lymphoid cells in Behcet’s disease.Br J Dermatol 1985;113:313～8.
8 Hamzaouik,Ayed Kh,Hamza M,Touraine JL.Natural Killer cells in behcet’s disease.Clim Exp Immunol 1988;71:126～31.
9 卓安山等，NK细胞的基础和临床研究进展，上海免疫学杂志，1991；11(3)：189～192
(收稿：1999—01—22), 百拇医药