茶多酚漱口液防龋的动物实验研究
作者：杨 松 刘天佳 刘建国
单位：杨松 华西医科大学口腔医学院 (现在云南省红十字会医院口腔内科) 610041
关键词：
华西口腔医学杂志990329 茶有防龋作用。经常饮茶者,患龋率较低。通常认为茶的防龋作用是茶中氟化物的作用[1]。随着茶叶中另一主要成分茶多酚对口腔致龋菌和菌斑作用研究的深入,茶多酚防龋的作用已日益受到重视。本文旨在通过茶多酚防龋的动物实验,为茶多酚的临床应用提供科学依据。
1 材料和方法
远缘链球菌(S.sobrinus 6715)由华西医科大学口腔生物工程重点实验室提供。茶多酚纯度大于95%(四川省筠连县茶多酚厂)。
选用25 d鼠龄断乳SD大鼠48只(四川抗生素实验动物中心提供),雌雄各半,随机分为4组,每组12只。分别为0.5%茶多酚组、0.2%氟化钠组、0.5%茶多酚加0.2%氟化钠组和蒸馏水组,记录体重,饲以致龋饲料2000号[1]。26～29 d鼠龄期间给予抗生素(四环素4 mg/g食物、青霉素4000 U/ml饮水)。30～33 d鼠龄期间连续4 d于大鼠口腔中接种远缘链球菌6715。于34～90 d鼠龄期间,各组分别用上述漱口液处理:大鼠取仰位,用钝针头注射器注0.25 ml漱口液于大鼠口腔,维持15 s,每天处理2次,早晚各1次,处理后30 min内禁饮、禁食。连续处理57 d。89 d鼠龄时,记录体重,麻醉大鼠,同时于腹腔注射匹罗卡品(0.75 mg/kg体重)。收集唾液0.5 ml。取0.1 ml唾液作1.0×102倍稀释,取稀释液0.1 ml涂于轻唾液琼脂培养基上,37 ℃厌氧培养48 h,根据菌落形态作变形链球菌菌落计数。实验结束后,处死大鼠,取颌骨标本,根据Keyes[2]经典评分方法,对鼠磨牙龋进行综合评估。实验结果均采用t检验进行统计分析。
, http://www.100md.com
2 结 果
2.1 唾液变形链球菌水平
大鼠唾液中变形链球菌水平在0.5%茶多酚组和0.5%茶多酚加0.2%氟化钠组较低,两组间无显著性差异,但与0.2%氟化钠组和蒸馏水组相比,有显著性差异(P<0.01),说明0.5%茶多酚漱口液能抑制变形链球菌生长(表1)。
表1 大鼠唾液中变形链球菌水平(×103CFU/ml,
±s) 组别
n
变形链球菌水平
0.5%茶多酚
12
, 百拇医药
19.80±3.04*
0.2%氟化钠
12
25.50±3.40
0.5%茶多酚加
0.2%氟化钠
12
20.42±4.52*
蒸馏水
12
25.80±5.24
*与蒸馏水组和0.2%氟化钠组比较差异有显著性(P<0.01)2.2 鼠磨牙龋损情况
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0.5%茶多酚组、0.2%氟化钠组和0.5%茶多酚加0.2%氟化钠组的鼠磨牙龋损范围和深度均较蒸馏水组轻,有显著性差异(P<0.01)。其中0.5%茶多酚加0.2%氟化钠组的龋损最轻,与0.5%茶多酚组和0.2%氟化钠组有显著性差异(P<0.01)。结果说明茶多酚能有效地降低大鼠龋的发生,茶多酚与氟联合应用有协同抗龋作用(表2)。
表2 各实验组磨牙龋损情况(±s,n=12) 组别
光滑面龋
窝沟龋
釉质龋
牙本质浅层龋
0.5%茶多酚
, 百拇医药
5.17±0.717
11.83±0.835*
3.58±0.90*
0.2%氟化钠
5.91±0.996*
10.58±1.505*
3.33±0.98*
0.5%茶多酚
加0.2%
氟化钠
, http://www.100md.com
3.92±0.792*△
7.83±1.11*△
1.83±0.94*△
蒸馏水
11.25±0.866
18.75±1.215
6.67±1.07
*与蒸馏水组比较有显著性差异(P<0.01)
△ 与0.2%氟化钠组和0.5%茶多酚组比较有显著性差异(P<0.01)
2.3 大鼠实验前后体重
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实验前后各组间大鼠体重无显著性差异(P>0.05),说明用0.5%茶多酚和0.2%氟化钠漱口对大鼠体重无影响,并且观察到大鼠牙齿无明显色素沉着。
3 讨 论
茶多酚是从茶叶中分离提取的多酚类化合物复合体。许多研究[3～5]表明茶多酚具有抑制变形链球菌生长、产酸和粘附的作用。茶多酚抑制变形链球菌的主要成分是(+)-表儿茶素、(-)-表没食子儿茶素及(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯。茶多酚对变形链球菌最低抑菌浓度是4 mg/ml。变形链球菌长期与低浓度茶多酚接触也不产生耐药性。本实验结果表明茶多酚能抑制变形链球菌生长,还表明茶多酚能明显减少大鼠磨牙龋损。茶多酚的防龋作用可能与抑制菌斑形成有关。①茶多酚能抑制葡糖基转移酶(GTF)活性,从而抑制葡聚糖的生物合成[6]。茶多酚对GTF产生非竞争性、不可逆性抑制,具剂量依赖关系[7];②茶多酚通过其酚基与富脯蛋白(PRPs)形成氢键,使PRPs构型发生改变,形成稳定化合物,抑制细菌的粘附[8];③与细菌表面脂磷壁酸作用,使细菌凝集,有利于细菌清除;④阻断细胞表面糖蛋白样葡聚糖结合位点,抑制葡聚糖诱导的集聚和粘附[9];⑤抑制唾液α-淀粉酶活性[10],阻断淀粉食物供糖途径。
, 百拇医药
本实验结果显示茶多酚与氟化钠联合应用可产生协同防龋作用,使大鼠磨牙龋损明显减少。两者联合应用既能抑制变形链球菌生长和菌斑形成,又能增强釉质抗酸力,促进早期龋再矿化。提示茶多酚加氟可作为一种更为有效的防龋制剂,特别在低氟区既能补充身体所需氟素,又能加强防龋作用。
茶多酚用于防龋具有价廉、来源丰富、安全可靠、无明显色素沉着、无蓄积毒性和遗传毒性等优点。
本课题受四川省科委基金资助
参考文献
1 Keyes PH, Jordan HV. Periodontal lesions in the Syrian hamster-Ⅲ Findings related to an infectious and transmissible component. Arch Oral Biol, 1964, 9(4):377～400
, 百拇医药
2 Keyes PH. Dental caries in the molar teeth of rats: Ⅱ A method for diagnosing and scoring several types of lesions simultaneously. J Dent Res, 1958, 37(6):1088～1099
3 Sakarraka S, Kim M. Antibacterial substances in Japanese green tea against S.mutans a cariogenic bacterium. Agric Biol Chem, 1989, 53(12):2307～2311
4 卢 林.茶多酚对牙菌斑影响的体外及体内实验研究.学位论文,成都:华西医科大学,1997
5 游士奇,洪方耀,李哲光,等.中国绿茶多酚预防龋病的研究.中华口腔医学杂志,1993,28(4):197～199
, 百拇医药
6 Nakahara K, Kawabata S, Ono H, et al. Inhibitory effect of Oolong tea polyphenol on glucosyltransferase of mutans Streptococci. Appl Environ Microbiol, 1993, 59(4):968～973
7 Paolino VJ, Kashket CA, Sparagna CA. Inhibition of dextran synthesis by tannin acid. J Dent Res(Abstract), 1980, 59(Special A):389
8 Thomas NA, John U, Mehansho H, et al. Binding of condensed tannins to salivary proline-rich glycoproteins: the role of carbohydrate. J Agric Food Chem, 1987, 35(3):331～334
, 百拇医药
9 Wu Yuan CD, Tai S, Slade HD. Dextran glucan binding by Streptococcus mutans: The role of molecular size and binding site in the agglutination. Adv Exp Med Biol, 1978, 107(6):737～741
10 Kashket S, Paolino VJ. Inhibition of salivary amylase by water soluble extract of tea. Arch Oral Biol, 1988, 33(11):845～846
(1998-07-30收稿), 百拇医药
单位：杨松 华西医科大学口腔医学院 (现在云南省红十字会医院口腔内科) 610041
关键词：
华西口腔医学杂志990329 茶有防龋作用。经常饮茶者,患龋率较低。通常认为茶的防龋作用是茶中氟化物的作用[1]。随着茶叶中另一主要成分茶多酚对口腔致龋菌和菌斑作用研究的深入,茶多酚防龋的作用已日益受到重视。本文旨在通过茶多酚防龋的动物实验,为茶多酚的临床应用提供科学依据。
1 材料和方法
远缘链球菌(S.sobrinus 6715)由华西医科大学口腔生物工程重点实验室提供。茶多酚纯度大于95%(四川省筠连县茶多酚厂)。
选用25 d鼠龄断乳SD大鼠48只(四川抗生素实验动物中心提供),雌雄各半,随机分为4组,每组12只。分别为0.5%茶多酚组、0.2%氟化钠组、0.5%茶多酚加0.2%氟化钠组和蒸馏水组,记录体重,饲以致龋饲料2000号[1]。26～29 d鼠龄期间给予抗生素(四环素4 mg/g食物、青霉素4000 U/ml饮水)。30～33 d鼠龄期间连续4 d于大鼠口腔中接种远缘链球菌6715。于34～90 d鼠龄期间,各组分别用上述漱口液处理:大鼠取仰位,用钝针头注射器注0.25 ml漱口液于大鼠口腔,维持15 s,每天处理2次,早晚各1次,处理后30 min内禁饮、禁食。连续处理57 d。89 d鼠龄时,记录体重,麻醉大鼠,同时于腹腔注射匹罗卡品(0.75 mg/kg体重)。收集唾液0.5 ml。取0.1 ml唾液作1.0×102倍稀释,取稀释液0.1 ml涂于轻唾液琼脂培养基上,37 ℃厌氧培养48 h,根据菌落形态作变形链球菌菌落计数。实验结束后,处死大鼠,取颌骨标本,根据Keyes[2]经典评分方法,对鼠磨牙龋进行综合评估。实验结果均采用t检验进行统计分析。
, http://www.100md.com
2 结 果
2.1 唾液变形链球菌水平
大鼠唾液中变形链球菌水平在0.5%茶多酚组和0.5%茶多酚加0.2%氟化钠组较低,两组间无显著性差异,但与0.2%氟化钠组和蒸馏水组相比,有显著性差异(P<0.01),说明0.5%茶多酚漱口液能抑制变形链球菌生长(表1)。
表1 大鼠唾液中变形链球菌水平(×103CFU/ml,
±s) 组别n
变形链球菌水平
0.5%茶多酚
12
, 百拇医药
19.80±3.04*
0.2%氟化钠
12
25.50±3.40
0.5%茶多酚加
0.2%氟化钠
12
20.42±4.52*
蒸馏水
12
25.80±5.24
*与蒸馏水组和0.2%氟化钠组比较差异有显著性(P<0.01)2.2 鼠磨牙龋损情况
, http://www.100md.com
0.5%茶多酚组、0.2%氟化钠组和0.5%茶多酚加0.2%氟化钠组的鼠磨牙龋损范围和深度均较蒸馏水组轻,有显著性差异(P<0.01)。其中0.5%茶多酚加0.2%氟化钠组的龋损最轻,与0.5%茶多酚组和0.2%氟化钠组有显著性差异(P<0.01)。结果说明茶多酚能有效地降低大鼠龋的发生,茶多酚与氟联合应用有协同抗龋作用(表2)。
表2 各实验组磨牙龋损情况(
±s,n=12) 组别光滑面龋
窝沟龋
釉质龋
牙本质浅层龋
0.5%茶多酚
, 百拇医药
5.17±0.717
11.83±0.835*
3.58±0.90*
0.2%氟化钠
5.91±0.996*
10.58±1.505*
3.33±0.98*
0.5%茶多酚
加0.2%
氟化钠
, http://www.100md.com
3.92±0.792*△
7.83±1.11*△
1.83±0.94*△
蒸馏水
11.25±0.866
18.75±1.215
6.67±1.07
*与蒸馏水组比较有显著性差异(P<0.01)
△ 与0.2%氟化钠组和0.5%茶多酚组比较有显著性差异(P<0.01)
2.3 大鼠实验前后体重
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实验前后各组间大鼠体重无显著性差异(P>0.05),说明用0.5%茶多酚和0.2%氟化钠漱口对大鼠体重无影响,并且观察到大鼠牙齿无明显色素沉着。
3 讨 论
茶多酚是从茶叶中分离提取的多酚类化合物复合体。许多研究[3～5]表明茶多酚具有抑制变形链球菌生长、产酸和粘附的作用。茶多酚抑制变形链球菌的主要成分是(+)-表儿茶素、(-)-表没食子儿茶素及(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯。茶多酚对变形链球菌最低抑菌浓度是4 mg/ml。变形链球菌长期与低浓度茶多酚接触也不产生耐药性。本实验结果表明茶多酚能抑制变形链球菌生长,还表明茶多酚能明显减少大鼠磨牙龋损。茶多酚的防龋作用可能与抑制菌斑形成有关。①茶多酚能抑制葡糖基转移酶(GTF)活性,从而抑制葡聚糖的生物合成[6]。茶多酚对GTF产生非竞争性、不可逆性抑制,具剂量依赖关系[7];②茶多酚通过其酚基与富脯蛋白(PRPs)形成氢键,使PRPs构型发生改变,形成稳定化合物,抑制细菌的粘附[8];③与细菌表面脂磷壁酸作用,使细菌凝集,有利于细菌清除;④阻断细胞表面糖蛋白样葡聚糖结合位点,抑制葡聚糖诱导的集聚和粘附[9];⑤抑制唾液α-淀粉酶活性[10],阻断淀粉食物供糖途径。
, 百拇医药
本实验结果显示茶多酚与氟化钠联合应用可产生协同防龋作用,使大鼠磨牙龋损明显减少。两者联合应用既能抑制变形链球菌生长和菌斑形成,又能增强釉质抗酸力,促进早期龋再矿化。提示茶多酚加氟可作为一种更为有效的防龋制剂,特别在低氟区既能补充身体所需氟素,又能加强防龋作用。
茶多酚用于防龋具有价廉、来源丰富、安全可靠、无明显色素沉着、无蓄积毒性和遗传毒性等优点。
本课题受四川省科委基金资助
参考文献
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, 百拇医药
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3 Sakarraka S, Kim M. Antibacterial substances in Japanese green tea against S.mutans a cariogenic bacterium. Agric Biol Chem, 1989, 53(12):2307～2311
4 卢 林.茶多酚对牙菌斑影响的体外及体内实验研究.学位论文,成都:华西医科大学,1997
5 游士奇,洪方耀,李哲光,等.中国绿茶多酚预防龋病的研究.中华口腔医学杂志,1993,28(4):197～199
, 百拇医药
6 Nakahara K, Kawabata S, Ono H, et al. Inhibitory effect of Oolong tea polyphenol on glucosyltransferase of mutans Streptococci. Appl Environ Microbiol, 1993, 59(4):968～973
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, 百拇医药
9 Wu Yuan CD, Tai S, Slade HD. Dextran glucan binding by Streptococcus mutans: The role of molecular size and binding site in the agglutination. Adv Exp Med Biol, 1978, 107(6):737～741
10 Kashket S, Paolino VJ. Inhibition of salivary amylase by water soluble extract of tea. Arch Oral Biol, 1988, 33(11):845～846
(1998-07-30收稿), 百拇医药