Vogt-Koyanagi-Harada综合征与人类白细胞抗原-DQA1和-DQB1基因相关性研究
作者：刘勤 张美芬 邱长春 胡天圣
单位：刘勤 张美芬 胡天圣(100730中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院眼科)；邱长春(中国医学科学院基础医学研究所)
关键词：沃格特-小柳-原田综合征；人类白细胞抗原基因；单倍型
中华眼科杂志990315 【摘要】 目的 探讨人类白细胞抗原-DQA1和-DQB1(human leukocyte antigen-DQA1 and DQB1，HLA-DQA1and DQB1)基因与沃格特-小柳-原田综合征(Vogt-Koyanagi-Haradasyndrome，VKH)遗传易感的相关性。方法 应用聚合酶链式反应--序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)及聚合酶链式反应--限制性片段长度多态性(PCR-restriction fragment length polymorp hism,PCR-RFLP)方法,检测70例汉族VKH患者及50例正常对照者的HLA-DQA1及DQB1等位基因型别。结果 VKH组，DQA1*0301及DQB1*0401等位基因的频率明显高于正常人(Pc<10-7),相对危险性(RR)分别为16.47及88.00；其两组单倍型DQA1*0301-DQB1*0401的频率差异有非常显著性(78.6%，4.0%；Pc<10-7,RR=88.00);在15例DQA1*0301-DQB1*0401单倍型为阴性的VKH患者中，DQA1*0102-DQB1*0602/3单倍型的频率最高，与正常人比差异有显著性(46.7%，12.5%；Pc=0.01,RR=6.13)。而VKH组的DQA1*0103-DQB1*0601单倍型的频率明显低于对照组，差异有非常显著性(2.9%，24%；Pc=0.001,RR=0.09)。DQA1*0301-DQB1*0401单倍型阳性及阴性的两组VKH患者的临床表现(视力预后、炎症复发及眼部并发症)比较差异无显著性。结论 DQA1*0301-DQB1*0401及DQA1*0102-DQB1*0602/3可能与VKH的易感性相关，前者主要为易感单倍型，但与临床表现无相关性；DQA1*0103和DQB1*0601可能与VKH的抗原性相关，具有保护效应。
, 百拇医药
Associatin of HLA-DQA1 and DQB1 alleles with Vogt-Koyanagi-Harada syndrome in Han Chinese population LIU Qin, ZHANG Meifen, QIU Changchun, et al. Department of Ophthalmology, Peking Union Medical College Hospital, Chinese Aca demy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing 100730
【Abstract】 Objective To access the association of HLA-DQA1 and -DQB1 alleles with Vogt-Koyanagi-Harada syndrome (VKH). Methods The alleles in DQA1 and DQB1 loci of patients with VKH matched with 50 healthy controls were subtyped b y polymerase chain reaction-sequence specific primer (PCR-SSP) and PCR-restri ction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). Results DQA1*0301 and DQB1*040 1 alleles were in close association with VKH sundrome, as compared to the contro ls (Pc<10-7), with the relative risk (RR) 16.47 and 88.00, respectively. The fr equency of DQA1*0301-DQB1*0401 haplotype in patients with VKH was also s igni ficantly higher than that in healthy controls (78.6%, 4.0%, Pc<10-7 , RR=88.00). Among the 15 patients who were negative for the haplotype of DQA1*0301-DQB1 *0 401, 7 of them were found to be positive for DRB1*15-DQA1*0102-DQB1*0602 /3 haplo type, with the frequency significantly higher than that in the controls (46.7%, 12.5%, Pc=0.01, RR=6.13). However, DQA1*0103-DQB1*0601 was th e only one o f the DQA1-DQB1 haplotypes with a significantly lower frequency in patients wit h VKH in comparison with that in the controls (2.9%, 24%, Pc=0.001, RR =0.09). The susceptible haplotype was not related to the clinical features. Conclusions The results suggest that DQA1*0301-DQB1* 0401 and DRB1*15-DQA1*0102-DQB1*0 602/3 be associated with the susceptibility in VKH. On the other hand, DQA1*01 03-DQB1*0601 may play a role in resisting against VKH syndrome.
, 百拇医药
【Key words】 Vogt-Koyanagi-Harada syndrome Human leukocyte antigen gene Haptotype
沃格特-小柳-原田综合征(Vogt-Koyanagi-Harada syndrome，VKH)是以双眼肉芽肿性全葡萄膜炎为主要特征，同时伴有中枢神经系统、皮肤及听觉系统病损的全身性疾病。VKH具有明显的种族特异性，好发于有色人种，我国为VKH的高发区。其发病机制尚不清楚，目前认为是以色素细胞为靶细胞的自身免疫性疾病[1]。自身免疫性疾病的发生与人类白细胞抗原系统(hum an leukocyte antigen,HLA)密切相关,而HLA基因型别的分布在不同种族之间存在差异。因此，对不同种族VKH患者与HLA基因的相关性研究，对寻找VKH的真正相关基因，以及进一步研究其发病机制,具有重要意义。以往用血清学方法研究表明，东、西方人群的VKH患者均与HLA-DR4抗原密切相关[2，3]。国内、外学者在基因水平的研究中进一步证实，DR4抗原阳性的VKH患者，其编码基因多数为DRB1*0405等位基因[4，5]。近年来对HLA-DQ位点的等位基因与VKH的相关性研究发现，DQA1*0301及DQB1*0401的频率在VKH患者中明显高于正常人群[4，6]。目前有关我国VKH患者与HLA-DQA1及DQB1基因的相关研究尚未见报道。为此我们应用聚合酶链式反应--序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence spe cific primer,PCR-SSP)及聚合酶链式反应--限制性片段长度多态性(PCR-restriction fra gm ent length polymorphism,PCR-RFLP)方法，检测中国汉族VKH患者HLA-DQA1及DQB1位点的等位基因及单倍型，研究VKH与HLA-DQ基因的相关性，探讨其生物学意义，并分析HLA基因与VKH临床表现之间的关系。
, 百拇医药
资料与方法
一、研究对象
我院葡萄膜炎专科门诊VKH患者70例，均符合VKH诊断标准[7],男40例，女30例；年龄13～76岁。对照组50例为我院血库健康献血者，男28例，女22例；年龄19～55岁。两组均为汉族。
二、实验材料
蛋白酶K(Merck)及TaqDNA聚合酶(上海复华生物技术开发中心产品),dNTP(美国Sigma公司产品)，DQA1序列特异性引物及DQB1*04特异性3′端引物5′-GAGCTGCAGGTAGTTGTGTCTGCATACG-3′(美国国立眼科研究所合成惠赠)，DQB1通用5′端引物GH28′5′-CTAATATATTGAGTTATAAAGACGCC-GGTGAGGGCCCGGCCTGTGCTACTTCACCAACG-3′和3′端引物GH295′-GAGCTGCAGGTAGTTGTGTCTG-CACAC-3′(上海生物工程公司产品)，内切酶HaeⅢ(德国BowhringMannheim公司产品)，MspI(中国协和医大医学科技开发公司产品)，HhaI、BsaHI(美国Biolabs公司产品)。
, 百拇医药
三、实验方法
1.DNA制备：取受检者外周血5ml，低渗法获取白细胞沉淀，100μg/ml蛋白酶K置于37℃下消化过夜，苯酚或氯仿抽提蛋白质，乙醇沉淀DNA，TE(Tris-EDTA buffer,Tris-EDTA缓冲液)溶解，置4℃保存。
2.HLA-DQA1等位基因分型(PCR-SSP法)：用9个5′端引物及7个3′端引物组合,以扩增DQA1位点的10种等位基因[8]。在25μl反应体系中扩增0.1～0.15μg基因组的DNA，其体系包括dNTP200μmol/L,PCR反应缓冲液(10mmol/LTris.Cl,50mmol/LKCl,1.5mmol/LMgCl2,4%甲酰胺)，两端引物各6.25×10-12pmol，TaqDNA聚合酶0.5U。PCR反应过程为94℃变性40s、63℃退火60s、72℃延伸40s，30～35个循环，第1个循环变性2min，最后1个循环延伸5min。用2%琼脂糖凝胶电泳，0.5mg/L溴化乙啶染色,检测扩增产物，确定每个样本的DQA1等位基因型别(图1)。
, 百拇医药
M示分子量标记(pBR322/MspI) 1～11示DQA1特异性引物基因扩增产物 1示*0101、*0102、*0104(172bp) 2示*0101、*0104(149bp) 3示*0104(195bp) 4示*0102、*0103(149bp) 5示*0103(172bp) 6示*0201(170bp)7示*0301(183bp) 8示*0401(190bp) 9示*0501(186bp) 10示*0601(117bp) 11示除*0104之外的所有DQA1等位基因
图1 DQA1等位基因扩增产物的2%琼脂糖凝胶电泳
, http://www.100md.com 3.HLA-DQB1等位基因分型(PCR-RFLP法)：(1)DQB1位点的PCR扩增：用5′端通用引物分别与3′端通用引物及DQB1*04特异性3′端引物组合，扩增DQB1基因及DQB1*04等位基因。0.2～0.25μg基因组DNA在50μl反应体系中扩增，包括dNTP200μmol/L,PCR反应缓冲液(同DQA1扩增反应)，引物各8×10-12mol，TaqDNA聚合酶1.0U。反应体系经94℃变性60s、60℃退火60s、72℃延伸60s，30个循环，第1个循环变性2min，最后1个循环延伸5min。2%琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。(2)DQB1等位基因的检测(RFLP)：10×酶切缓冲液及10μl的DQB1基因扩增产物4管，分别加入内切酶HaeⅢ、MspⅠ、HhaⅠ和BsaHⅠ各5U，37℃水浴消化3h,酶切产物行12%、20cm×30cm(HaeⅢ)或8%、10cm×15cm(MspⅠ,HhaⅠ和BsaHⅠ)聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染记录结果。根据每个样本的4种酶切图谱综合分析，确定其DQB1等位基因型(图2)。
, 百拇医药
M示分子量标记(pBR322/MspI) 1～8示未加酶的对照(-)和DQB1各种型别的酶切结果。4种内切酶的酶切产物分别为:HaeⅢ,220、132、127、124、96和93bp;MspⅠ,223、178、117、106和72bp;HhaⅠ,190、142、115、113、86和69bp;BsaHⅠ,237、130、107、88和66bp。不同大小片段的组合对应于不同的DQB1型别,小片段产物在图谱中未显示
图2 4种内切酶分别消化DQB1PCR扩增产物的聚丙酰电泳
四、统计学处理
本文数据处理采用χ2检验或Fisher确切概率法，校正P值(Pc)，比较VKH患者与正常人群中各等位基因的分布及相对危险性(RR)。RR=(a×d)/(b×c)，a、b、c、d分别代表某等位基因的阳性患者数、阴性患者数、阳性对照数、阴性对照数。
, 百拇医药
结果
一、VKH组与对照组DQA1及DQB1等位基因分布
在DQA1等位基因中，DQA1*0301是VKH组频率最高的DQA1等位基因(88.6%),与正常对照组(32.0%)比较，差异有非常显著性(Pc<10-7,RR=16.47)(表1)；对照组中频率最高的等位基因为DQA1*0501，占50.0%，VKH组为17.1%，两组间差异有显著性(Pc<10-3,RR=0.21)(表1)。此外，VKH组DQA1*0103的频率低于对照组(8.6%,32.0%；Pc=0.002,RR=0.20)。两组间其他DQA1等位基因的频率分布差异无显著性(表1)。
表1 两组患者DQA1和DQB1等位基因分布的比较 组别
例数
, http://www.100md.com
DQA1
*0101
*0102
*0103
*0104
*0201
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
, 百拇医药 阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
VKH组
70
2
3.9
29
41.4
6
8.6
, http://www.100md.com
3
4.3
10
14.3
对照组
50
6
12.0
13
26.0
16
32.0
4
, 百拇医药 8.0
6
12.0
Pc值
>0.05
>0.05
0.002
>0.05
>0.05
RR值
0.22
2.01
0.02
, http://www.100md.com
0.51
1.28
组别
例数
DQA1
*0301
*0302
*0401
*0501
*0601
阳性数
阳性率(%)
, 百拇医药
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
VKH组
70
62
88.6
0
, http://www.100md.com
0.0
1
1.4
12
17.1
5
7.1
对照组
50
16
32.0
0
0.0
, 百拇医药 2
4.0
25
50.0
6
12.0
Pc值
<10-7
0.00
>0.05
<10-3
>0.05
RR值
, http://www.100md.com
16.47
0.00
0.35
0.21
0.21
组别
例数
DQB1
*0501
*0502
*05031
*05032
, 百拇医药
*0504
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
VKH组
70
, 百拇医药
3
4.3
7
10.0
3
4.3
0
0
0
0
对照组
50
11
22.0
, 百拇医药
4
8.0
4
8.0
0
0
0
0
Pc值
0.01
>0.05
>0.05
0.00
, http://www.100md.com 0.00
RR值
0.16
1.28
0.51
0.00
0.00
组别
例数
DQB1
*0601
*0602/3
*0604/5
, http://www.100md.com
*0201
*0301
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
, 百拇医药
VKH组
70
6
8.5
21
30.0
1
1.4
10
14.3
15
21.4
对照组
, http://www.100md.com 50
13
26.0
11
22.0
1
2.0
11
22.0
22
44.0
Pc值
0.02
, 百拇医药 >0.05
>0.05
>0.05
0.01
RR值
0.27
1.26
0.71
0.59
0.35
组别
例数
DQB1
, 百拇医药
*0302
*0303
*0304
*0401
*0402
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
, http://www.100md.com 阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
VKH组
70
3
4.3
15
21.4
1
1.4
55
, 百拇医药 78.6
0
0.0
对照组
50
4
8.0
11
22.0
1
2.0
2
4.0
2
, 百拇医药
4.0
Pc值
>0.05
>0.05
>0.05
<10-7
>0.05
RR值
0.51
0.97
0.71
88.00
0.00
, http://www.100md.com
DQB1等位基因分型结果表明，DQB1*0401是VKH组频率最高的等位基因，与对照组相比差异有非常显著性(78.6%，4.0%,Pc<10-7，RR=88.00)；而VKH组DQB1*0501、DQB1*0601及DQB1*0301的频率则低于对照组(Pc<0.05)(表1)。
二、VKH组与对照组DQA1-DQB1单倍型分布
所有患者均进行了DQA1-DQB1单倍型分析，结果表明：VKH组DQA1*0301-DQB1*0401单倍型的频率明显高于对照组(78.6%，4.0%；Pc<10-7,RR=88.00)，而VKH组DQA1*0103-DQB1*0601的频率则显著低于对照组(2.9%，24.0%；Pc=0.001,RR=0.09)。两组间其他DQA1-DQB1单倍型的分布差异无显著性(表2)。表2 两组患者DQA1和DQB1单倍型分布的比较 组别
, http://www.100md.com
例数
0101-*0501
0101-*0503
0102-*0502
0102-*0601
0102-*0602/3
0102-*0604/5
阳性数
阳性率(%)
阳性数
, 百拇医药 阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
VKH组
70
2
2.9
, http://www.100md.com
1
1.4
6
8.6
3
4.3
19
27.1
1
1.4
对照组
50
4
8.0
, http://www.100md.com
4
8.0
3
6.0
2
4.0
7
14.0
1
2.0
Pc值
>0.05
>0.05
, 百拇医药 >0.05
>0.05
>0.05
>0.05
RR值
0.35
0.01
1.45
0.72
2.29
0.71
组别
例数
, 百拇医药
0103-*0601
0103-*0602/3
0201-*0201
0201-*0303/4
0301-*0301/2
0301-*0303
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
, http://www.100md.com
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
VKH组
70
2
2.9
1
, http://www.100md.com
1.4
8
11.4
2
2.9
4
5.7
10
14.3
对照组
50
12
24.0
, http://www.100md.com 2
4.0
5
10.0
1
2.0
5
10.0
7
14.0
Pc值
0.001
>0.05
>0.05
, 百拇医药
>0.05
>0.05
>0.05
RR值
0.09
0.36
1.42
1.16
0.56
1.02
组别
例数
0301-*0401
, 百拇医药
0301-*0501
0401-*0402
0501-*0201
0501-*0301
0601-*0301
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
, http://www.100md.com
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
VKH组
70
55
78.6
0
0.0
0
, 百拇医药
0.0
1
1.4
10
14.3
5
7.1
对照组
50
2
4.0
2
4.0
2
, http://www.100md.com
4.0
5
10.0
11
22.0
5
10.0
Pc值
<10-7
>0.05
>0.05
>0.05
>0.05
, http://www.100md.com
>0.05
RR值
88.00
0.00
0.00
0.13
0.59
0.69
三、DQA1*0301或DQB1*0401为阴性的VKH患者的特异等位基因及单倍型
70例VKH患者中，8例DQA1*0301阴性，15例DQB1*0401阴性，其特异DQ等位基因型别显示：8例DQA1*0301阴性的VKH患者中，6例(75.0%)为DQA1*0102阳性；而对照组DQA1*0301为阴性的34例中，仅8例(23.5%)为DQA1*0102阳性，两组间比较差异有显著性(Pc=0.01,RR=9.75)。在15例DQB1*0401阴性的VKH患者中，8例(53.3%)为DQB1*0602/3阳性；对照组48例中，有7例(14.6%)为DQB1*0602/3阳性，两组间相比差异有非常显著性(Pc=0.004,RR=6.69)。进一步对单倍型分析结果显示：15例DQA1*0301-DQB1*0401阴性的VKH患者中，7例(46.7%)为DQA1*0102-DQB1*0602/3阳性；而48例此单倍型阴性的对照组中，仅6例(12.5%)为DQA1*0102-DQB1*0602/3，差异有非常显著性(Pc=0.01,RR=6.13)。
, 百拇医药
四、HLA基因与VKH临床表现的关系
55例DQA1*0301-DQB1*0401单倍型阳性与15例该单倍型阴性的VKH患者比较，两组视力预后、炎症复发及眼部并发症的发生率比较，差异无显著性(表3)。表3 VKHDOA1*0301-DQB1*0401单倍型阳性与阴性组患者的临床表现比较 组别
(单倍型)
眼数
视力
P值
炎症复发
P值
并发症
, 百拇医药
P值
≥0.5
>0.1,<0.5
≤0.1
眼数
百分率
(%)
眼数
百分率
(%)
眼数
百分率(%)
眼数
, http://www.100md.com
百分率(%)
眼数
百分率(%)
阴性
110
67
60.9
34
30.9
9
8.2
0.22
27
, 百拇医药
24.5
0.77
19
26.7
0.56
阳性
30
21
70.0
4
13.0
5
16.7
, http://www.100md.com
8
26.7
4
13.3
讨论
一、与VKH易感性相关的DQA1和DQB1的基因单倍型
本研究结果中，VKH患者DQA1*0301和DQB1*0401等位基因的频率与正常组比较，差异有非常显著性，RR值分别为16.47和88.00(表1)，提示DQA1*0301和DQB1*0401与VKH的易感性呈正相关，与文献报道相似[4，6]。
由于HLA-Ⅱ类基因通常紧密连锁以单倍型遗传。因此，对单倍型的分析可以更有力地说明某些基因与疾病的相关性。本文根据我国人群HLA-Ⅱ类基因连锁规律[9],将VKH患者DQA1-DQB1单倍型的分布进一步分析，在VKH与HLA的相关研究中尚未见报道。本文DQA1*0301阳性的62例VKH患者中，55例与DQB1*0401连锁，其单倍型DQA1*0301-DQB1*0401的频率为78.6%，而对照组仅为4%，两组间差异有显著性，(RR=88.00)(表2)；此外，7例患者所携带的DQA1*0301与其他DQB1等位基因连锁，如DQA1*0301-DQB1*0301及DQA1*0301-DQB1*0303，这些单倍型频率在VKH及对照组间比较，差异无显著性(表2)。从而提示，DQA1*0301频率的升高可能是与DQB1*0401连锁所致。因此，DQA1*0301等位基因可能不是决定VKH易感性的主要基因，或者是DQA1*0301和DQB1*0401共同编码的DQ分子与VKH的易感性相关。另外，根据对少数不携带上述两种基因患者的研究结果，我们推测，DQA1*0102及DQB1*0602/3共同编码的DQ分子可能也与VKH易感性有一定相关性。此外，本研究中尚有8例患者未见上述易感相关基因或单倍型，对照组中2例携带有DQA1*0301-DQB1*0401单倍型，但均未发生VKH，从而提示HLA基因只与VKH易感性相关，而不是VKH的致病基因，VKH发生与否可能是诸多因素综合作用的结果。
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二、与VKH抗原性相关基因
VKH组DQA1*0301和DQB1*0401等位基因频率的显著增高，必然会引起该人群中DQA1或DQB1位点上其他等位基因频率的随机降低。本研究中，VKH组的频率显著低于对照组的等位基因有：DQA1位点的DQA1*0103和DQA1*0501，DQB1位点的DQB1*0501、DQB1*0601及DQB1*0301。日本VKH患者中DQA1*0103和DQB1*0601等位基因的频率也较正常人降低[4，6]。我们认为，在不同种族中均出现这两个等位基因频率的降低，可能并非随机所致。本文对单倍型的进一步分析显示，仅有两个基因连锁组成的单倍型DQA1*0103-DQB1*0601频率在VKH组显著低于对照组，70例VKH患者中，有2例阳性(2.9%)，而对照组为24.0%阳性(Pc=0.001,RR=0.09)(表2)。从而我们认为，DQA1*0103-DQB1*0601编码的DQ分子可能与VKH的抗原性相关，它的缺乏可能导致个体对VKH的易感性增加。
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三、VKH与HLA相关的意义
本文所得到的我国汉族VKH患者易感相关基因DQA1*0301和DQB1*0401，以及文献报道的DRB1*0405[5，6]，均与文献报道相近[4，6]，从而说明上述两个种族VKH患者的HLA遗传易感性相似。东方人群中，DRB1*0405通常与DQA1*0301及DQB1*0401紧密连锁，这三个基因组成的单倍型在高加索人种中极罕见[9]，可能是东方人种的VKH患病率高，而高加索人种患病率极低的原因之一。在VKH的相关HLA基因中，可能是某一个基因，或几个基因共同影响VKH的易感性。这些易感基因与抗原性基因的发现为阐明VKH的确切发病机制奠定了基础，同时有助于VKH的筛选和临床诊断。但不可忽视HLA基因以外的其他因素对VKH的致病也有重要作用。有关VKH与HLA相关的确切分子机制尚有待进一步研究。
, 百拇医药
四、HLA易感基因与VKH临床表现的关系
HLA基因与某些疾病有相关性，不仅表现在对疾病的易感性，还可能与疾病的临床表现及预后有一定关系。Islam等[10]根据VKH病程迁延与否比较了病程6个月以上与6个月以内的两组患者，发现前者的DRB1*0405阳性率显著高于后者，因而认为HLA基因与VKH的临床病程相关。我们认为，将易感基因阳性的患者临床特征与阴性患者进行比较，可以更好地说明该易感基因与疾病临床表现的关系。本文分析DQA1*0301-DQB1*0401单倍型阳性与阴性的两组VKH患者，结果显示：炎症复发、眼部并发症发生率及视力预后，两组差异无显著性，从而提示DQA1*0301-DQB1*0401单倍型与VKH的临床不存在相关性。由于本研究VKH患者多系转诊而来，其以往治疗措施差别较大，而治疗措施对于VKH患者的视力预后、炎症复发及并发症的发生率关系十分密切。因此，只有开展前瞻性研究，采用统一的治疗方法，才有可能准确评价HLA与VKH临床表现的关系。 参考文献
, http://www.100md.com
1 Moorthy RS, Inomata H, Rao RA. Vogt-Koyanagi-Harada syndrome. Surv Ophthalm ol, 1995, 39 : 265-292.
2 Zhang XY, Wang XM, Hu TS. Profiling human leukocyte antig ens in Vogt-Koyanagi-Harada syndrome. Am J Ophthalmol, 1992, 113 : 567-572.
3 Davis JL, Mittal KK, Freidlin V, et al. HLA as sociations and an cestry in Vogt-Koyanagi-Harada disease and sympathetic ophthalmia. Ophthalmolo gy, 1990, 97 : 1137-1142.
, 百拇医药
4 Islam SM, Numaga J, Fujino, et al. HLA class I I genes in Vogt-Koyanagi-Harada disease. Invest Ophthalmol Vis Sci, 1994, 35 : 3890-3896.
5 肖天林，蒋幼芹，游学科. 人类白细胞抗原-DR4基因亚型与Vogt- Koyanagi-Harada 综合征相关性研究. 中华眼科杂志, 1997, 33 : 268-270.
6 Shindo Y, Ohno S, Yamamoto T, et al. Complete association of the HLA-DRB1*04 and -DQB1*04 alleles with Vogt-Koyanagi-Harada′s disease. Hu m Immunol, 1994, 39: 169-176.
, http://www.100md.com
7 Snyder DA, Tessler HH. Vogt-Koyanagi-Harada syndrome. Am J Ophthalmol, 1980, 90 : 69-75.
8 Olerup O, Aldener A, Fogdell A. HLA-DQB1 and -DQA1 typing by PCR amplifica tion with sequence-specific primers (PCR-SSP) in 2 hours. Tissue Antigens, 199 3, 41 : 119-134.
9 Gao X, Serjeantson SW. Diversity in HLA-DR4-related DR, D Q haplotypes in Australia, Oceania and China. Hum Immunol, 1991, 32:269-267.
10 Islam SM, Numaga J, Matsuki K, et al. Influence of HLA-DRB 1 gene variation on the clinical course of Vogt-Koyanagi-Harada disease. Inves t Ophthalmol Vis Sci, 1994, 35:752-756.
(收稿：1999-12-02 修回：1999-02-10), 百拇医药
单位：刘勤 张美芬 胡天圣(100730中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院眼科)；邱长春(中国医学科学院基础医学研究所)
关键词：沃格特-小柳-原田综合征；人类白细胞抗原基因；单倍型
中华眼科杂志990315 【摘要】 目的 探讨人类白细胞抗原-DQA1和-DQB1(human leukocyte antigen-DQA1 and DQB1，HLA-DQA1and DQB1)基因与沃格特-小柳-原田综合征(Vogt-Koyanagi-Haradasyndrome，VKH)遗传易感的相关性。方法 应用聚合酶链式反应--序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)及聚合酶链式反应--限制性片段长度多态性(PCR-restriction fragment length polymorp hism,PCR-RFLP)方法,检测70例汉族VKH患者及50例正常对照者的HLA-DQA1及DQB1等位基因型别。结果 VKH组，DQA1*0301及DQB1*0401等位基因的频率明显高于正常人(Pc<10-7),相对危险性(RR)分别为16.47及88.00；其两组单倍型DQA1*0301-DQB1*0401的频率差异有非常显著性(78.6%，4.0%；Pc<10-7,RR=88.00);在15例DQA1*0301-DQB1*0401单倍型为阴性的VKH患者中，DQA1*0102-DQB1*0602/3单倍型的频率最高，与正常人比差异有显著性(46.7%，12.5%；Pc=0.01,RR=6.13)。而VKH组的DQA1*0103-DQB1*0601单倍型的频率明显低于对照组，差异有非常显著性(2.9%，24%；Pc=0.001,RR=0.09)。DQA1*0301-DQB1*0401单倍型阳性及阴性的两组VKH患者的临床表现(视力预后、炎症复发及眼部并发症)比较差异无显著性。结论 DQA1*0301-DQB1*0401及DQA1*0102-DQB1*0602/3可能与VKH的易感性相关，前者主要为易感单倍型，但与临床表现无相关性；DQA1*0103和DQB1*0601可能与VKH的抗原性相关，具有保护效应。
, 百拇医药
Associatin of HLA-DQA1 and DQB1 alleles with Vogt-Koyanagi-Harada syndrome in Han Chinese population LIU Qin, ZHANG Meifen, QIU Changchun, et al. Department of Ophthalmology, Peking Union Medical College Hospital, Chinese Aca demy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing 100730
【Abstract】 Objective To access the association of HLA-DQA1 and -DQB1 alleles with Vogt-Koyanagi-Harada syndrome (VKH). Methods The alleles in DQA1 and DQB1 loci of patients with VKH matched with 50 healthy controls were subtyped b y polymerase chain reaction-sequence specific primer (PCR-SSP) and PCR-restri ction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). Results DQA1*0301 and DQB1*040 1 alleles were in close association with VKH sundrome, as compared to the contro ls (Pc<10-7), with the relative risk (RR) 16.47 and 88.00, respectively. The fr equency of DQA1*0301-DQB1*0401 haplotype in patients with VKH was also s igni ficantly higher than that in healthy controls (78.6%, 4.0%, Pc<10-7 , RR=88.00). Among the 15 patients who were negative for the haplotype of DQA1*0301-DQB1 *0 401, 7 of them were found to be positive for DRB1*15-DQA1*0102-DQB1*0602 /3 haplo type, with the frequency significantly higher than that in the controls (46.7%, 12.5%, Pc=0.01, RR=6.13). However, DQA1*0103-DQB1*0601 was th e only one o f the DQA1-DQB1 haplotypes with a significantly lower frequency in patients wit h VKH in comparison with that in the controls (2.9%, 24%, Pc=0.001, RR =0.09). The susceptible haplotype was not related to the clinical features. Conclusions The results suggest that DQA1*0301-DQB1* 0401 and DRB1*15-DQA1*0102-DQB1*0 602/3 be associated with the susceptibility in VKH. On the other hand, DQA1*01 03-DQB1*0601 may play a role in resisting against VKH syndrome.
, 百拇医药
【Key words】 Vogt-Koyanagi-Harada syndrome Human leukocyte antigen gene Haptotype
沃格特-小柳-原田综合征(Vogt-Koyanagi-Harada syndrome，VKH)是以双眼肉芽肿性全葡萄膜炎为主要特征，同时伴有中枢神经系统、皮肤及听觉系统病损的全身性疾病。VKH具有明显的种族特异性，好发于有色人种，我国为VKH的高发区。其发病机制尚不清楚，目前认为是以色素细胞为靶细胞的自身免疫性疾病[1]。自身免疫性疾病的发生与人类白细胞抗原系统(hum an leukocyte antigen,HLA)密切相关,而HLA基因型别的分布在不同种族之间存在差异。因此，对不同种族VKH患者与HLA基因的相关性研究，对寻找VKH的真正相关基因，以及进一步研究其发病机制,具有重要意义。以往用血清学方法研究表明，东、西方人群的VKH患者均与HLA-DR4抗原密切相关[2，3]。国内、外学者在基因水平的研究中进一步证实，DR4抗原阳性的VKH患者，其编码基因多数为DRB1*0405等位基因[4，5]。近年来对HLA-DQ位点的等位基因与VKH的相关性研究发现，DQA1*0301及DQB1*0401的频率在VKH患者中明显高于正常人群[4，6]。目前有关我国VKH患者与HLA-DQA1及DQB1基因的相关研究尚未见报道。为此我们应用聚合酶链式反应--序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence spe cific primer,PCR-SSP)及聚合酶链式反应--限制性片段长度多态性(PCR-restriction fra gm ent length polymorphism,PCR-RFLP)方法，检测中国汉族VKH患者HLA-DQA1及DQB1位点的等位基因及单倍型，研究VKH与HLA-DQ基因的相关性，探讨其生物学意义，并分析HLA基因与VKH临床表现之间的关系。
, 百拇医药
资料与方法
一、研究对象
我院葡萄膜炎专科门诊VKH患者70例，均符合VKH诊断标准[7],男40例，女30例；年龄13～76岁。对照组50例为我院血库健康献血者，男28例，女22例；年龄19～55岁。两组均为汉族。
二、实验材料
蛋白酶K(Merck)及TaqDNA聚合酶(上海复华生物技术开发中心产品),dNTP(美国Sigma公司产品)，DQA1序列特异性引物及DQB1*04特异性3′端引物5′-GAGCTGCAGGTAGTTGTGTCTGCATACG-3′(美国国立眼科研究所合成惠赠)，DQB1通用5′端引物GH28′5′-CTAATATATTGAGTTATAAAGACGCC-GGTGAGGGCCCGGCCTGTGCTACTTCACCAACG-3′和3′端引物GH295′-GAGCTGCAGGTAGTTGTGTCTG-CACAC-3′(上海生物工程公司产品)，内切酶HaeⅢ(德国BowhringMannheim公司产品)，MspI(中国协和医大医学科技开发公司产品)，HhaI、BsaHI(美国Biolabs公司产品)。
, 百拇医药
三、实验方法
1.DNA制备：取受检者外周血5ml，低渗法获取白细胞沉淀，100μg/ml蛋白酶K置于37℃下消化过夜，苯酚或氯仿抽提蛋白质，乙醇沉淀DNA，TE(Tris-EDTA buffer,Tris-EDTA缓冲液)溶解，置4℃保存。
2.HLA-DQA1等位基因分型(PCR-SSP法)：用9个5′端引物及7个3′端引物组合,以扩增DQA1位点的10种等位基因[8]。在25μl反应体系中扩增0.1～0.15μg基因组的DNA，其体系包括dNTP200μmol/L,PCR反应缓冲液(10mmol/LTris.Cl,50mmol/LKCl,1.5mmol/LMgCl2,4%甲酰胺)，两端引物各6.25×10-12pmol，TaqDNA聚合酶0.5U。PCR反应过程为94℃变性40s、63℃退火60s、72℃延伸40s，30～35个循环，第1个循环变性2min，最后1个循环延伸5min。用2%琼脂糖凝胶电泳，0.5mg/L溴化乙啶染色,检测扩增产物，确定每个样本的DQA1等位基因型别(图1)。
, 百拇医药
M示分子量标记(pBR322/MspI) 1～11示DQA1特异性引物基因扩增产物 1示*0101、*0102、*0104(172bp) 2示*0101、*0104(149bp) 3示*0104(195bp) 4示*0102、*0103(149bp) 5示*0103(172bp) 6示*0201(170bp)7示*0301(183bp) 8示*0401(190bp) 9示*0501(186bp) 10示*0601(117bp) 11示除*0104之外的所有DQA1等位基因
图1 DQA1等位基因扩增产物的2%琼脂糖凝胶电泳
, http://www.100md.com 3.HLA-DQB1等位基因分型(PCR-RFLP法)：(1)DQB1位点的PCR扩增：用5′端通用引物分别与3′端通用引物及DQB1*04特异性3′端引物组合，扩增DQB1基因及DQB1*04等位基因。0.2～0.25μg基因组DNA在50μl反应体系中扩增，包括dNTP200μmol/L,PCR反应缓冲液(同DQA1扩增反应)，引物各8×10-12mol，TaqDNA聚合酶1.0U。反应体系经94℃变性60s、60℃退火60s、72℃延伸60s，30个循环，第1个循环变性2min，最后1个循环延伸5min。2%琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。(2)DQB1等位基因的检测(RFLP)：10×酶切缓冲液及10μl的DQB1基因扩增产物4管，分别加入内切酶HaeⅢ、MspⅠ、HhaⅠ和BsaHⅠ各5U，37℃水浴消化3h,酶切产物行12%、20cm×30cm(HaeⅢ)或8%、10cm×15cm(MspⅠ,HhaⅠ和BsaHⅠ)聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染记录结果。根据每个样本的4种酶切图谱综合分析，确定其DQB1等位基因型(图2)。
, 百拇医药
M示分子量标记(pBR322/MspI) 1～8示未加酶的对照(-)和DQB1各种型别的酶切结果。4种内切酶的酶切产物分别为:HaeⅢ,220、132、127、124、96和93bp;MspⅠ,223、178、117、106和72bp;HhaⅠ,190、142、115、113、86和69bp;BsaHⅠ,237、130、107、88和66bp。不同大小片段的组合对应于不同的DQB1型别,小片段产物在图谱中未显示
图2 4种内切酶分别消化DQB1PCR扩增产物的聚丙酰电泳
四、统计学处理
本文数据处理采用χ2检验或Fisher确切概率法，校正P值(Pc)，比较VKH患者与正常人群中各等位基因的分布及相对危险性(RR)。RR=(a×d)/(b×c)，a、b、c、d分别代表某等位基因的阳性患者数、阴性患者数、阳性对照数、阴性对照数。
, 百拇医药
结果
一、VKH组与对照组DQA1及DQB1等位基因分布
在DQA1等位基因中，DQA1*0301是VKH组频率最高的DQA1等位基因(88.6%),与正常对照组(32.0%)比较，差异有非常显著性(Pc<10-7,RR=16.47)(表1)；对照组中频率最高的等位基因为DQA1*0501，占50.0%，VKH组为17.1%，两组间差异有显著性(Pc<10-3,RR=0.21)(表1)。此外，VKH组DQA1*0103的频率低于对照组(8.6%,32.0%；Pc=0.002,RR=0.20)。两组间其他DQA1等位基因的频率分布差异无显著性(表1)。
表1 两组患者DQA1和DQB1等位基因分布的比较 组别
例数
, http://www.100md.com
DQA1
*0101
*0102
*0103
*0104
*0201
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
, 百拇医药 阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
VKH组
70
2
3.9
29
41.4
6
8.6
, http://www.100md.com
3
4.3
10
14.3
对照组
50
6
12.0
13
26.0
16
32.0
4
, 百拇医药 8.0
6
12.0
Pc值
>0.05
>0.05
0.002
>0.05
>0.05
RR值
0.22
2.01
0.02
, http://www.100md.com
0.51
1.28
组别
例数
DQA1
*0301
*0302
*0401
*0501
*0601
阳性数
阳性率(%)
, 百拇医药
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
VKH组
70
62
88.6
0
, http://www.100md.com
0.0
1
1.4
12
17.1
5
7.1
对照组
50
16
32.0
0
0.0
, 百拇医药 2
4.0
25
50.0
6
12.0
Pc值
<10-7
0.00
>0.05
<10-3
>0.05
RR值
, http://www.100md.com
16.47
0.00
0.35
0.21
0.21
组别
例数
DQB1
*0501
*0502
*05031
*05032
, 百拇医药
*0504
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
VKH组
70
, 百拇医药
3
4.3
7
10.0
3
4.3
0
0
0
0
对照组
50
11
22.0
, 百拇医药
4
8.0
4
8.0
0
0
0
0
Pc值
0.01
>0.05
>0.05
0.00
, http://www.100md.com 0.00
RR值
0.16
1.28
0.51
0.00
0.00
组别
例数
DQB1
*0601
*0602/3
*0604/5
, http://www.100md.com
*0201
*0301
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
, 百拇医药
VKH组
70
6
8.5
21
30.0
1
1.4
10
14.3
15
21.4
对照组
, http://www.100md.com 50
13
26.0
11
22.0
1
2.0
11
22.0
22
44.0
Pc值
0.02
, 百拇医药 >0.05
>0.05
>0.05
0.01
RR值
0.27
1.26
0.71
0.59
0.35
组别
例数
DQB1
, 百拇医药
*0302
*0303
*0304
*0401
*0402
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
, http://www.100md.com 阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
VKH组
70
3
4.3
15
21.4
1
1.4
55
, 百拇医药 78.6
0
0.0
对照组
50
4
8.0
11
22.0
1
2.0
2
4.0
2
, 百拇医药
4.0
Pc值
>0.05
>0.05
>0.05
<10-7
>0.05
RR值
0.51
0.97
0.71
88.00
0.00
, http://www.100md.com
DQB1等位基因分型结果表明，DQB1*0401是VKH组频率最高的等位基因，与对照组相比差异有非常显著性(78.6%，4.0%,Pc<10-7，RR=88.00)；而VKH组DQB1*0501、DQB1*0601及DQB1*0301的频率则低于对照组(Pc<0.05)(表1)。
二、VKH组与对照组DQA1-DQB1单倍型分布
所有患者均进行了DQA1-DQB1单倍型分析，结果表明：VKH组DQA1*0301-DQB1*0401单倍型的频率明显高于对照组(78.6%，4.0%；Pc<10-7,RR=88.00)，而VKH组DQA1*0103-DQB1*0601的频率则显著低于对照组(2.9%，24.0%；Pc=0.001,RR=0.09)。两组间其他DQA1-DQB1单倍型的分布差异无显著性(表2)。表2 两组患者DQA1和DQB1单倍型分布的比较 组别
, http://www.100md.com
例数
0101-*0501
0101-*0503
0102-*0502
0102-*0601
0102-*0602/3
0102-*0604/5
阳性数
阳性率(%)
阳性数
, 百拇医药 阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
VKH组
70
2
2.9
, http://www.100md.com
1
1.4
6
8.6
3
4.3
19
27.1
1
1.4
对照组
50
4
8.0
, http://www.100md.com
4
8.0
3
6.0
2
4.0
7
14.0
1
2.0
Pc值
>0.05
>0.05
, 百拇医药 >0.05
>0.05
>0.05
>0.05
RR值
0.35
0.01
1.45
0.72
2.29
0.71
组别
例数
, 百拇医药
0103-*0601
0103-*0602/3
0201-*0201
0201-*0303/4
0301-*0301/2
0301-*0303
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
, http://www.100md.com
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
VKH组
70
2
2.9
1
, http://www.100md.com
1.4
8
11.4
2
2.9
4
5.7
10
14.3
对照组
50
12
24.0
, http://www.100md.com 2
4.0
5
10.0
1
2.0
5
10.0
7
14.0
Pc值
0.001
>0.05
>0.05
, 百拇医药
>0.05
>0.05
>0.05
RR值
0.09
0.36
1.42
1.16
0.56
1.02
组别
例数
0301-*0401
, 百拇医药
0301-*0501
0401-*0402
0501-*0201
0501-*0301
0601-*0301
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
, http://www.100md.com
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
阳性数
阳性率(%)
VKH组
70
55
78.6
0
0.0
0
, 百拇医药
0.0
1
1.4
10
14.3
5
7.1
对照组
50
2
4.0
2
4.0
2
, http://www.100md.com
4.0
5
10.0
11
22.0
5
10.0
Pc值
<10-7
>0.05
>0.05
>0.05
>0.05
, http://www.100md.com
>0.05
RR值
88.00
0.00
0.00
0.13
0.59
0.69
三、DQA1*0301或DQB1*0401为阴性的VKH患者的特异等位基因及单倍型
70例VKH患者中，8例DQA1*0301阴性，15例DQB1*0401阴性，其特异DQ等位基因型别显示：8例DQA1*0301阴性的VKH患者中，6例(75.0%)为DQA1*0102阳性；而对照组DQA1*0301为阴性的34例中，仅8例(23.5%)为DQA1*0102阳性，两组间比较差异有显著性(Pc=0.01,RR=9.75)。在15例DQB1*0401阴性的VKH患者中，8例(53.3%)为DQB1*0602/3阳性；对照组48例中，有7例(14.6%)为DQB1*0602/3阳性，两组间相比差异有非常显著性(Pc=0.004,RR=6.69)。进一步对单倍型分析结果显示：15例DQA1*0301-DQB1*0401阴性的VKH患者中，7例(46.7%)为DQA1*0102-DQB1*0602/3阳性；而48例此单倍型阴性的对照组中，仅6例(12.5%)为DQA1*0102-DQB1*0602/3，差异有非常显著性(Pc=0.01,RR=6.13)。
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四、HLA基因与VKH临床表现的关系
55例DQA1*0301-DQB1*0401单倍型阳性与15例该单倍型阴性的VKH患者比较，两组视力预后、炎症复发及眼部并发症的发生率比较，差异无显著性(表3)。表3 VKHDOA1*0301-DQB1*0401单倍型阳性与阴性组患者的临床表现比较 组别
(单倍型)
眼数
视力
P值
炎症复发
P值
并发症
, 百拇医药
P值
≥0.5
>0.1,<0.5
≤0.1
眼数
百分率
(%)
眼数
百分率
(%)
眼数
百分率(%)
眼数
, http://www.100md.com
百分率(%)
眼数
百分率(%)
阴性
110
67
60.9
34
30.9
9
8.2
0.22
27
, 百拇医药
24.5
0.77
19
26.7
0.56
阳性
30
21
70.0
4
13.0
5
16.7
, http://www.100md.com
8
26.7
4
13.3
讨论
一、与VKH易感性相关的DQA1和DQB1的基因单倍型
本研究结果中，VKH患者DQA1*0301和DQB1*0401等位基因的频率与正常组比较，差异有非常显著性，RR值分别为16.47和88.00(表1)，提示DQA1*0301和DQB1*0401与VKH的易感性呈正相关，与文献报道相似[4，6]。
由于HLA-Ⅱ类基因通常紧密连锁以单倍型遗传。因此，对单倍型的分析可以更有力地说明某些基因与疾病的相关性。本文根据我国人群HLA-Ⅱ类基因连锁规律[9],将VKH患者DQA1-DQB1单倍型的分布进一步分析，在VKH与HLA的相关研究中尚未见报道。本文DQA1*0301阳性的62例VKH患者中，55例与DQB1*0401连锁，其单倍型DQA1*0301-DQB1*0401的频率为78.6%，而对照组仅为4%，两组间差异有显著性，(RR=88.00)(表2)；此外，7例患者所携带的DQA1*0301与其他DQB1等位基因连锁，如DQA1*0301-DQB1*0301及DQA1*0301-DQB1*0303，这些单倍型频率在VKH及对照组间比较，差异无显著性(表2)。从而提示，DQA1*0301频率的升高可能是与DQB1*0401连锁所致。因此，DQA1*0301等位基因可能不是决定VKH易感性的主要基因，或者是DQA1*0301和DQB1*0401共同编码的DQ分子与VKH的易感性相关。另外，根据对少数不携带上述两种基因患者的研究结果，我们推测，DQA1*0102及DQB1*0602/3共同编码的DQ分子可能也与VKH易感性有一定相关性。此外，本研究中尚有8例患者未见上述易感相关基因或单倍型，对照组中2例携带有DQA1*0301-DQB1*0401单倍型，但均未发生VKH，从而提示HLA基因只与VKH易感性相关，而不是VKH的致病基因，VKH发生与否可能是诸多因素综合作用的结果。
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二、与VKH抗原性相关基因
VKH组DQA1*0301和DQB1*0401等位基因频率的显著增高，必然会引起该人群中DQA1或DQB1位点上其他等位基因频率的随机降低。本研究中，VKH组的频率显著低于对照组的等位基因有：DQA1位点的DQA1*0103和DQA1*0501，DQB1位点的DQB1*0501、DQB1*0601及DQB1*0301。日本VKH患者中DQA1*0103和DQB1*0601等位基因的频率也较正常人降低[4，6]。我们认为，在不同种族中均出现这两个等位基因频率的降低，可能并非随机所致。本文对单倍型的进一步分析显示，仅有两个基因连锁组成的单倍型DQA1*0103-DQB1*0601频率在VKH组显著低于对照组，70例VKH患者中，有2例阳性(2.9%)，而对照组为24.0%阳性(Pc=0.001,RR=0.09)(表2)。从而我们认为，DQA1*0103-DQB1*0601编码的DQ分子可能与VKH的抗原性相关，它的缺乏可能导致个体对VKH的易感性增加。
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三、VKH与HLA相关的意义
本文所得到的我国汉族VKH患者易感相关基因DQA1*0301和DQB1*0401，以及文献报道的DRB1*0405[5，6]，均与文献报道相近[4，6]，从而说明上述两个种族VKH患者的HLA遗传易感性相似。东方人群中，DRB1*0405通常与DQA1*0301及DQB1*0401紧密连锁，这三个基因组成的单倍型在高加索人种中极罕见[9]，可能是东方人种的VKH患病率高，而高加索人种患病率极低的原因之一。在VKH的相关HLA基因中，可能是某一个基因，或几个基因共同影响VKH的易感性。这些易感基因与抗原性基因的发现为阐明VKH的确切发病机制奠定了基础，同时有助于VKH的筛选和临床诊断。但不可忽视HLA基因以外的其他因素对VKH的致病也有重要作用。有关VKH与HLA相关的确切分子机制尚有待进一步研究。
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四、HLA易感基因与VKH临床表现的关系
HLA基因与某些疾病有相关性，不仅表现在对疾病的易感性，还可能与疾病的临床表现及预后有一定关系。Islam等[10]根据VKH病程迁延与否比较了病程6个月以上与6个月以内的两组患者，发现前者的DRB1*0405阳性率显著高于后者，因而认为HLA基因与VKH的临床病程相关。我们认为，将易感基因阳性的患者临床特征与阴性患者进行比较，可以更好地说明该易感基因与疾病临床表现的关系。本文分析DQA1*0301-DQB1*0401单倍型阳性与阴性的两组VKH患者，结果显示：炎症复发、眼部并发症发生率及视力预后，两组差异无显著性，从而提示DQA1*0301-DQB1*0401单倍型与VKH的临床不存在相关性。由于本研究VKH患者多系转诊而来，其以往治疗措施差别较大，而治疗措施对于VKH患者的视力预后、炎症复发及并发症的发生率关系十分密切。因此，只有开展前瞻性研究，采用统一的治疗方法，才有可能准确评价HLA与VKH临床表现的关系。 参考文献
, http://www.100md.com
1 Moorthy RS, Inomata H, Rao RA. Vogt-Koyanagi-Harada syndrome. Surv Ophthalm ol, 1995, 39 : 265-292.
2 Zhang XY, Wang XM, Hu TS. Profiling human leukocyte antig ens in Vogt-Koyanagi-Harada syndrome. Am J Ophthalmol, 1992, 113 : 567-572.
3 Davis JL, Mittal KK, Freidlin V, et al. HLA as sociations and an cestry in Vogt-Koyanagi-Harada disease and sympathetic ophthalmia. Ophthalmolo gy, 1990, 97 : 1137-1142.
, 百拇医药
4 Islam SM, Numaga J, Fujino, et al. HLA class I I genes in Vogt-Koyanagi-Harada disease. Invest Ophthalmol Vis Sci, 1994, 35 : 3890-3896.
5 肖天林，蒋幼芹，游学科. 人类白细胞抗原-DR4基因亚型与Vogt- Koyanagi-Harada 综合征相关性研究. 中华眼科杂志, 1997, 33 : 268-270.
6 Shindo Y, Ohno S, Yamamoto T, et al. Complete association of the HLA-DRB1*04 and -DQB1*04 alleles with Vogt-Koyanagi-Harada′s disease. Hu m Immunol, 1994, 39: 169-176.
, http://www.100md.com
7 Snyder DA, Tessler HH. Vogt-Koyanagi-Harada syndrome. Am J Ophthalmol, 1980, 90 : 69-75.
8 Olerup O, Aldener A, Fogdell A. HLA-DQB1 and -DQA1 typing by PCR amplifica tion with sequence-specific primers (PCR-SSP) in 2 hours. Tissue Antigens, 199 3, 41 : 119-134.
9 Gao X, Serjeantson SW. Diversity in HLA-DR4-related DR, D Q haplotypes in Australia, Oceania and China. Hum Immunol, 1991, 32:269-267.
10 Islam SM, Numaga J, Matsuki K, et al. Influence of HLA-DRB 1 gene variation on the clinical course of Vogt-Koyanagi-Harada disease. Inves t Ophthalmol Vis Sci, 1994, 35:752-756.
(收稿：1999-12-02 修回：1999-02-10), 百拇医药