脾气虚证与胃粘膜P53基因表达关系的实验研究＊
作者：刘晓颖1 陈小野2 张海燕1 邹世洁2 潘李珍1
单位：刘晓颖 张海燕 潘李珍(首都医科大学 北京 100054)；陈小野 邹世洁(中国中医研究院基础理论研究所 北京 100700)
关键词：胃粘膜；癌前病变；脾气虚；P53基因
摘 要 目的 探讨脾气虚证与胃粘膜癌前病变联系的相关癌基因机制 摘 要 目的 探讨脾气虚证与胃粘膜癌前病变联系的相关癌基因机制。方法 胃粘膜癌前病变采用慢性萎缩性胃炎(CAG)造模方法；脾气虚证对癌前病变的影响采用脾气虚证与CAG同时联合造模方法；胃粘膜病理观察及形态学计量；P53基因异常表达采用原位杂交方法。 结果 脾气虚能加重慢性萎缩性胃炎的程度，与正常对照组比较，CAG组与脾气虚型CAG组，胃体粘膜固有层厚度明显减少(P<0.01)；胃体腺腺底相对厚度减少(P<0.05)；胃体粘膜核分裂相频数显著增加(P<0.01)。与CAG组比较，脾气虚型CAG组幽门粘膜核分裂相频数显著增加(P<0.01)，贲门固有层淋巴滤泡频数增加(P<0.05)，小凹上皮异型改变明显。胃粘膜癌前病变中脾气虚证有P53基因的较强表达。结论 P53基因的异常表达与胃癌前病变辨证中脾气虚证有一定的关系，有利于中医对胃粘膜癌前病变的辨证施治。
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Experimental Study on the Relationship between Insufficiency of the Spleen-qi
and Expression of P53 Oncogene on Gastric Mucosa.
Liu Xiaoying1 Chen Xiaoye2 Zhang Haiyan1 Zhou Shijie2 Pan Lizhen1
(1. Capital University of Medical Science Beijing 100054)
(2. Institute of Basic Theory, China Academy of TCM Beijing 100700)
, 百拇医药
Abstracte:Objective:To explore the relative oncogene mechanism of insufficiency of the spleen-qi and precancerosis of stomach. Methods:Precancerosis of stomach were made on the animal models with chronic atrophic gastritis (CAG). Effect of insufficiency of the spleen-qi on precancerosis was observed on the animal models with insufficiency of the speen-qi and CAG. Pathological studies were on the gastric mucosa. Expression of P53 oncogene was detected by in situ hybridization . Results:Insufficiency of the spleen-qi can exacerbate the level of CAG. Compared to the control group, both insufficiency of the spleen-qi group and CAG group were lower in the thickness of proper mucous membrane of the body of stomach(P<0.01),and the thickness of fundus of gland (P<0.05). The two groups were higher in the frequency of mucosa karyokinesis in the body of stomach(P<0.01). Compared to the CAG group, insufficiency of the spleen-qi group were higher in the frequency of mucosa karyokinesis in the pylorus of stomach(P<0.01),the frequency of lymph follicle of proper mucous membrane in cardia of stomach(P<0.05), and higher in the expression of P53 oncogene. Conclusion:Insufficiency of the spleen-qi has certain relation with the expression of P53 oncogene in CAG. This can be good to diagnosis and treatment on precancerosis of gastric mucosa based on the theories of TCM.
, 百拇医药
Key words: Gastric mucosa Precancerosis Insufficiency of the spleen-qi P53 oncogene
胃粘膜癌前病变是胃粘膜从良性病变到恶性病变转化过程的一个重要阶段，其意义在于具有恶变及向正常逆转的双向可能性。中医认为，胃粘膜的良性病变的加重与肝郁证—脾气虚证—脾气虚(脾胃)气滞证证型演变的规律相同，而胃病辨证中脾气虚证是胃粘膜癌前病变的主要相关证型。因此，本实验结合现代医学分子生物学的研究成果及中医辨证施治的特点，在动物模型上探讨脾气虚证与胃粘膜癌前病变癌基因异常表达的关系， 为中医药防治胃粘膜癌前病变提供新的理论依据。
材料与方法
1 实验动物
Wistar雌性大鼠190只，体重180g～220g，由北京医科大学实验动物科学部提供，普通级，合格证号：〈 京动字〉第8910R016号。
, 百拇医药
2 造模药品和试剂
脱氧胆酸钠，北京市海淀区微生物培养基制品厂生产，批号：930901。
阿斯匹林，湖南洞庭制药厂生产，批号：940722。
生药经鉴定，生大黄为Rheumpalmatum,川厚朴为Magnolia officinalis, 枳实为Citrus aurantium。
3 动物分组和造模方法
将实验动物Wistar大鼠随机分为3组，每组60～65只。
3.1 正常对照组：正常饲养。
3.2 单纯CAG组：采用CAG造模方法[1]，用胃组织匀浆免疫注射加胆酸饲养法。取同批Wistar大鼠100只，处死后低温下取出胃，生理盐水充分洗涤，尽量去掉胃外膜结缔组织。加适量PBS(pH7.2)，剪碎，匀浆：4℃保存及自身胃蛋白酶消化。再经低温离心取上清液，冷冻干燥后得胃组织粉末16g，备用。动物购回后预养2周，再用0.3%脱氧胆酸钠和0.6%阿斯匹林做饮水，隔周交替自饮至实验结束，在造模第10d和第24d，取30%胃组织生理盐水溶液，与等量完全弗氏佐剂混合，充分乳化后，足跖部皮内注射，0.1ml/只；第49d取60%胃组织溶液，腹腔注射0.1ml/只。共造模45周。
, 百拇医药
3.3 脾气虚型CAG组：CAG与脾气虚证同时联合造模。CAG造模方法同3.2，脾气虚造模方法：在实验第6周开始，采用耗气破气加饥饱失常法，取川厚朴、枳实、大黄以3∶3∶2比例，100%煎剂隔日灌胃，3ml/只，同时隔日喂饲，共造模45周。
4 观察方法及检测指标
4.1 胃粘膜病理观察和形态计量
于实验45周，常规大鼠胃粘膜取材，石膜包埋切片，HE和ABpH2.5PAS染色，光镜观察并用测微尺作形态计量。
4.2 胃粘膜细胞周期变化及DNA指数及增殖指数测定[2]
采用FACS420型流式细胞仪(美国Becton Dickinson公司)测定。
DNA指数(DI)=实验组胃粘膜G0/1峰道数均值/正常组胃粘膜G0/1峰道数均值
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增殖指数(PI)=(S+G2/M)/(G0/1+S+G2/M)×100%
4.3 原位杂交方法检测胃粘膜P53基因的表达[3]
实验45周，取大鼠胃组织用4%多聚甲醛：PBS(1∶10比例)固定，石蜡切片，经杂交前处理，杂交反应，杂交后处理。其中P53探针为RNA探针，终浓度2mg/L，42℃条件下杂交20h，最后以0.03%H2O2和0.05%DAB显色。阳性细胞的细胞核显示棕黄色颗粒，以颗粒的深浅及多少，用(-)表示阴性，用(±)(+)(++)分别表示阳性的强度。
5 统计学处理
各组实验数据以均值±标准差(
±s)表示，两组间的差异显著性分析用t检验。
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结 果
1 胃粘膜病理观察和形态计量
胃粘膜病理观察可见，单纯CAG组和脾气虚型CAG组胃粘膜固有膜纤维组织增生显著；粘膜下层炎细胞浸润明显；出现程度不同的肠化，小凹上皮异型改变明显加重，特别是脾气虚型CAG组。
胃粘膜形态计量见表1，表2。
表1 各组大鼠胃粘膜形态计量(±s,μm)
分 组
n
胃体粘膜固有层厚度
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胃小凹相对长度
胃体腺腺底相对长度
正常对照组
14
519.42±19.31
0.187±0.014
0.286±0.018
单纯CAG组
14
441.08±17.61**
0.221±0.016
0.228±0.019*
, 百拇医药
脾气虚型CAG组
15
443.58±17.48**
0.231±0.012*
0.221±0.021*
注：与正常对照组比较：*P<0.05,**P<0.01表2 各组大鼠胃粘膜核分裂相频数及淋巴滤泡频数比较(±s,个/视野)
分 组
n
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核分裂相频数
淋巴滤泡频数
胃体
幽门
幽门
贲门
正常对照组
12
0
0.523±0.134
1.063±0.322
0.500±0.202
单纯CAG组
, 百拇医药
11
0.045±0.031**
1.196±0.165**
1.192±0.414
0.083±0.083**
脾气虚型CAG组
12
0.532±0.256**
2.492±0.365**△△
0.714±0.286
, 百拇医药
0.714±0.266△
注：与正常对照组比较：*P<0.05,**P<0.01；与CAG组比较:△P<0.05,△△P<0.01
如表1，表2所示，与正常对照组比较，单纯CAG组与脾气虚型CAG组，胃体粘膜固有层厚度明显减少(P<0.01)；胃体腺腺底相对厚度较少(P<0.05)；胃体与幽门粘膜核分裂相频数显著增加(P<0.01)。脾气虚型CAG组胃小凹相对长度增加(P<0.05)，而单纯型CAG组无变化。与单纯型CAG组比较，脾气虚型CAG组幽门粘膜核分裂相频数显著增加(P<0.01)，贲门固有层淋巴滤泡频数增加(P<0.05)。
2 胃粘膜细胞周期变化及DNA指数和增殖指数比较
各组胃粘膜细胞周期变化见表3。
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表3 各组胃粘膜细胞周期各时相分布变化(±s)
分 组
n
G0/1期(%)
S期(%)
G2/M(%)
正常对照组
6
79.00±1.53
, 百拇医药
7.33±1.84
13.83±1.49
单纯CAG组
6
54.33±9.26
32.67±9.79
13.17±1.38
脾气虚型CAG组
6
60.67±13.25
27.67±13.76
, 百拇医药
11.33±1.56
注：与正常对照组比较: P<0.05
如表3所示，各组大鼠胃粘膜主要以G0/1期细胞为主，但单纯型GAG组G0/1期细胞所占比例低于正常对照组(P<0.05)，S期细胞所占比例高于正常对照组(P<0.05)，而脾气虚型CAG组无明显变化。
各组胃粘膜细胞DNA指数异常率和增殖指数变化见表4。
表4 各组胃粘膜细胞DNA指数和增殖指数比较(±s)
分 组
, 百拇医药
n
PI值
DI值异常率(异/总)
正常对照组
6
21.17±1.58
单纯CAG组
6
45.83±9.48**
4/6
脾气虚型CAG组
6
, 百拇医药
39.00±13.39
3/6
注：与正常对照组比较: ** P<0.05
如表4所示，单纯CAG组PI值增加 (P<0.05)，单纯CAG组和脾气虚型CAG组DI值异常率均显著增加。
3 胃粘膜P53基因的表达
正常对照组，P53基因在胃粘膜的表达为(-)。单纯CAG组，P53基因在胃粘膜的表达为(+)。脾气虚型CAG组，P53基因在胃粘膜的表达为(++)(依次见图1，2，3)。
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讨论
胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，胃癌的发生为一多阶段，多因素过程，要经历多年持续的癌前病变。胃癌前病变是一个病理概念，主要伴存于慢性萎缩性胃炎，而在其基础上发生肠上皮化生或异型增生可能是胃癌发生的组织学基础。若能及早识别和控制癌前病变，以中医辨证分型治疗这些病变，对降低胃癌的发病有重要意义。癌基因的异常表达是近10年来胃粘膜癌前病变研究的一个新领域，研究涉及的癌基因有P53基因[4]。P53基因定位于染色体17P上，有野生型和突变型两种，其野生型对细胞生长繁殖起负调节作用，而突变型P53则促进细胞繁殖，因此野生型P53基因的缺失或失活和突变型P53基因的扩增已被证实是许多肿瘤发生的原因。由于野生型P53基因蛋白的半衰期只有20—30min，所以原位杂交方法实际检测到的只是扩增而稳定的突变型P53，也表明阳性细胞中的P53蛋白具有促癌而非抑癌效应。P53基因蛋白产物是磷酸蛋白，分子量为53KD，它在细胞浆内合成进而定位于细胞核内，因此阳性细胞的染色部位在细胞核内。
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本实验建立脾气虚型CAG模型，并与CAG模型比较，脾气虚型CAG模型体现中医临床辨证与辨病相结合诊疗规范。本实验结果表明，脾气虚型CAG在CAG基础上伴发了不同程度的异型上皮增生，故可用于胃癌前病变机理的研究。流式细胞术是对肿瘤的增殖状态进行评价的先进手段之一，反映肿瘤迅速生长的指标是细胞增殖周期中的S期和G2/M期细胞的比例[5]。本实验，单纯性CAG组，S期细胞比例增高，PI值增加，而单纯型CAG组和脾气虚型CAG组ID值异常率均显著增加，说明两组有较高的增殖活性。脾气虚型CAG组，P53基因在胃粘膜细胞中有较强的表达。本实验从癌基因角度初步揭示了脾气虚证在胃粘膜癌前病变中的重要地位，有利于指导临床对胃粘膜癌前病变的防治及微观辨证。
(致谢：本研究得到了首都医科大学细胞生物系安威主任及其他老师的热情指导，在此表示衷心感谢!)
*国家自然科学基金资助项目(No.39370864)
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作者简介：刘晓颖，女，25岁，助教，首都医科大学细胞室 研究方向：肿瘤的生物治疗。
参考文献
[1] 陈小野，等.大鼠脾虚型萎缩性胃炎模型的实验研究,中医基础与实验研究.第一版.北京：中医古籍出版社，1993
[2] 左连富，刘洪祥，等.流式细胞术检测石蜡包埋肿瘤细胞DNA含量样品制备方法.中华病理学杂志，1988，17：232
[3] 苏慧慈主编.原位杂交.第一版.北京：中国科学技术出版社，1994：115～158
[4] Hao-Y, et al. Abnormal change of P53 gene in gastric and precancerous lesions and APC gene deletion in gastric carcinoma and near tissues. J-Tongji-Med-Univ, 1997,17(2):75～8
[5] Yildiz I, et al. Regional DNA content heterogeneity in wilm'st tumor:incidence and potential clinical relevance. Anticancer Res, 1994,14:1356
(收稿日期 1998—09—03 修回日期 1998—12—27), 百拇医药
单位：刘晓颖 张海燕 潘李珍(首都医科大学 北京 100054)；陈小野 邹世洁(中国中医研究院基础理论研究所 北京 100700)
关键词：胃粘膜；癌前病变；脾气虚；P53基因
摘 要 目的 探讨脾气虚证与胃粘膜癌前病变联系的相关癌基因机制 摘 要 目的 探讨脾气虚证与胃粘膜癌前病变联系的相关癌基因机制。方法 胃粘膜癌前病变采用慢性萎缩性胃炎(CAG)造模方法；脾气虚证对癌前病变的影响采用脾气虚证与CAG同时联合造模方法；胃粘膜病理观察及形态学计量；P53基因异常表达采用原位杂交方法。 结果 脾气虚能加重慢性萎缩性胃炎的程度，与正常对照组比较，CAG组与脾气虚型CAG组，胃体粘膜固有层厚度明显减少(P<0.01)；胃体腺腺底相对厚度减少(P<0.05)；胃体粘膜核分裂相频数显著增加(P<0.01)。与CAG组比较，脾气虚型CAG组幽门粘膜核分裂相频数显著增加(P<0.01)，贲门固有层淋巴滤泡频数增加(P<0.05)，小凹上皮异型改变明显。胃粘膜癌前病变中脾气虚证有P53基因的较强表达。结论 P53基因的异常表达与胃癌前病变辨证中脾气虚证有一定的关系，有利于中医对胃粘膜癌前病变的辨证施治。
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Experimental Study on the Relationship between Insufficiency of the Spleen-qi
and Expression of P53 Oncogene on Gastric Mucosa.
Liu Xiaoying1 Chen Xiaoye2 Zhang Haiyan1 Zhou Shijie2 Pan Lizhen1
(1. Capital University of Medical Science Beijing 100054)
(2. Institute of Basic Theory, China Academy of TCM Beijing 100700)
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Abstracte:Objective:To explore the relative oncogene mechanism of insufficiency of the spleen-qi and precancerosis of stomach. Methods:Precancerosis of stomach were made on the animal models with chronic atrophic gastritis (CAG). Effect of insufficiency of the spleen-qi on precancerosis was observed on the animal models with insufficiency of the speen-qi and CAG. Pathological studies were on the gastric mucosa. Expression of P53 oncogene was detected by in situ hybridization . Results:Insufficiency of the spleen-qi can exacerbate the level of CAG. Compared to the control group, both insufficiency of the spleen-qi group and CAG group were lower in the thickness of proper mucous membrane of the body of stomach(P<0.01),and the thickness of fundus of gland (P<0.05). The two groups were higher in the frequency of mucosa karyokinesis in the body of stomach(P<0.01). Compared to the CAG group, insufficiency of the spleen-qi group were higher in the frequency of mucosa karyokinesis in the pylorus of stomach(P<0.01),the frequency of lymph follicle of proper mucous membrane in cardia of stomach(P<0.05), and higher in the expression of P53 oncogene. Conclusion:Insufficiency of the spleen-qi has certain relation with the expression of P53 oncogene in CAG. This can be good to diagnosis and treatment on precancerosis of gastric mucosa based on the theories of TCM.
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Key words: Gastric mucosa Precancerosis Insufficiency of the spleen-qi P53 oncogene
胃粘膜癌前病变是胃粘膜从良性病变到恶性病变转化过程的一个重要阶段，其意义在于具有恶变及向正常逆转的双向可能性。中医认为，胃粘膜的良性病变的加重与肝郁证—脾气虚证—脾气虚(脾胃)气滞证证型演变的规律相同，而胃病辨证中脾气虚证是胃粘膜癌前病变的主要相关证型。因此，本实验结合现代医学分子生物学的研究成果及中医辨证施治的特点，在动物模型上探讨脾气虚证与胃粘膜癌前病变癌基因异常表达的关系， 为中医药防治胃粘膜癌前病变提供新的理论依据。
材料与方法
1 实验动物
Wistar雌性大鼠190只，体重180g～220g，由北京医科大学实验动物科学部提供，普通级，合格证号：〈 京动字〉第8910R016号。
, 百拇医药
2 造模药品和试剂
脱氧胆酸钠，北京市海淀区微生物培养基制品厂生产，批号：930901。
阿斯匹林，湖南洞庭制药厂生产，批号：940722。
生药经鉴定，生大黄为Rheumpalmatum,川厚朴为Magnolia officinalis, 枳实为Citrus aurantium。
3 动物分组和造模方法
将实验动物Wistar大鼠随机分为3组，每组60～65只。
3.1 正常对照组：正常饲养。
3.2 单纯CAG组：采用CAG造模方法[1]，用胃组织匀浆免疫注射加胆酸饲养法。取同批Wistar大鼠100只，处死后低温下取出胃，生理盐水充分洗涤，尽量去掉胃外膜结缔组织。加适量PBS(pH7.2)，剪碎，匀浆：4℃保存及自身胃蛋白酶消化。再经低温离心取上清液，冷冻干燥后得胃组织粉末16g，备用。动物购回后预养2周，再用0.3%脱氧胆酸钠和0.6%阿斯匹林做饮水，隔周交替自饮至实验结束，在造模第10d和第24d，取30%胃组织生理盐水溶液，与等量完全弗氏佐剂混合，充分乳化后，足跖部皮内注射，0.1ml/只；第49d取60%胃组织溶液，腹腔注射0.1ml/只。共造模45周。
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3.3 脾气虚型CAG组：CAG与脾气虚证同时联合造模。CAG造模方法同3.2，脾气虚造模方法：在实验第6周开始，采用耗气破气加饥饱失常法，取川厚朴、枳实、大黄以3∶3∶2比例，100%煎剂隔日灌胃，3ml/只，同时隔日喂饲，共造模45周。
4 观察方法及检测指标
4.1 胃粘膜病理观察和形态计量
于实验45周，常规大鼠胃粘膜取材，石膜包埋切片，HE和ABpH2.5PAS染色，光镜观察并用测微尺作形态计量。
4.2 胃粘膜细胞周期变化及DNA指数及增殖指数测定[2]
采用FACS420型流式细胞仪(美国Becton Dickinson公司)测定。
DNA指数(DI)=实验组胃粘膜G0/1峰道数均值/正常组胃粘膜G0/1峰道数均值
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增殖指数(PI)=(S+G2/M)/(G0/1+S+G2/M)×100%
4.3 原位杂交方法检测胃粘膜P53基因的表达[3]
实验45周，取大鼠胃组织用4%多聚甲醛：PBS(1∶10比例)固定，石蜡切片，经杂交前处理，杂交反应，杂交后处理。其中P53探针为RNA探针，终浓度2mg/L，42℃条件下杂交20h，最后以0.03%H2O2和0.05%DAB显色。阳性细胞的细胞核显示棕黄色颗粒，以颗粒的深浅及多少，用(-)表示阴性，用(±)(+)(++)分别表示阳性的强度。
5 统计学处理
各组实验数据以均值±标准差(
±s)表示，两组间的差异显著性分析用t检验。, http://www.100md.com
结 果
1 胃粘膜病理观察和形态计量
胃粘膜病理观察可见，单纯CAG组和脾气虚型CAG组胃粘膜固有膜纤维组织增生显著；粘膜下层炎细胞浸润明显；出现程度不同的肠化，小凹上皮异型改变明显加重，特别是脾气虚型CAG组。
胃粘膜形态计量见表1，表2。
表1 各组大鼠胃粘膜形态计量(
±s,μm)分 组
n
胃体粘膜固有层厚度
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胃小凹相对长度
胃体腺腺底相对长度
正常对照组
14
519.42±19.31
0.187±0.014
0.286±0.018
单纯CAG组
14
441.08±17.61**
0.221±0.016
0.228±0.019*
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脾气虚型CAG组
15
443.58±17.48**
0.231±0.012*
0.221±0.021*
注：与正常对照组比较：*P<0.05,**P<0.01表2 各组大鼠胃粘膜核分裂相频数及淋巴滤泡频数比较(
±s,个/视野)分 组
n
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核分裂相频数
淋巴滤泡频数
胃体
幽门
幽门
贲门
正常对照组
12
0
0.523±0.134
1.063±0.322
0.500±0.202
单纯CAG组
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11
0.045±0.031**
1.196±0.165**
1.192±0.414
0.083±0.083**
脾气虚型CAG组
12
0.532±0.256**
2.492±0.365**△△
0.714±0.286
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0.714±0.266△
注：与正常对照组比较：*P<0.05,**P<0.01；与CAG组比较:△P<0.05,△△P<0.01
如表1，表2所示，与正常对照组比较，单纯CAG组与脾气虚型CAG组，胃体粘膜固有层厚度明显减少(P<0.01)；胃体腺腺底相对厚度较少(P<0.05)；胃体与幽门粘膜核分裂相频数显著增加(P<0.01)。脾气虚型CAG组胃小凹相对长度增加(P<0.05)，而单纯型CAG组无变化。与单纯型CAG组比较，脾气虚型CAG组幽门粘膜核分裂相频数显著增加(P<0.01)，贲门固有层淋巴滤泡频数增加(P<0.05)。
2 胃粘膜细胞周期变化及DNA指数和增殖指数比较
各组胃粘膜细胞周期变化见表3。
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表3 各组胃粘膜细胞周期各时相分布变化(
±s)分 组
n
G0/1期(%)
S期(%)
G2/M(%)
正常对照组
6
79.00±1.53
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7.33±1.84
13.83±1.49
单纯CAG组
6
54.33±9.26
32.67±9.79
13.17±1.38
脾气虚型CAG组
6
60.67±13.25
27.67±13.76
, 百拇医药
11.33±1.56
注：与正常对照组比较: P<0.05
如表3所示，各组大鼠胃粘膜主要以G0/1期细胞为主，但单纯型GAG组G0/1期细胞所占比例低于正常对照组(P<0.05)，S期细胞所占比例高于正常对照组(P<0.05)，而脾气虚型CAG组无明显变化。
各组胃粘膜细胞DNA指数异常率和增殖指数变化见表4。
表4 各组胃粘膜细胞DNA指数和增殖指数比较(
±s)分 组
, 百拇医药
n
PI值
DI值异常率(异/总)
正常对照组
6
21.17±1.58
单纯CAG组
6
45.83±9.48**
4/6
脾气虚型CAG组
6
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39.00±13.39
3/6
注：与正常对照组比较: ** P<0.05
如表4所示，单纯CAG组PI值增加 (P<0.05)，单纯CAG组和脾气虚型CAG组DI值异常率均显著增加。
3 胃粘膜P53基因的表达
正常对照组，P53基因在胃粘膜的表达为(-)。单纯CAG组，P53基因在胃粘膜的表达为(+)。脾气虚型CAG组，P53基因在胃粘膜的表达为(++)(依次见图1，2，3)。
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讨论
胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，胃癌的发生为一多阶段，多因素过程，要经历多年持续的癌前病变。胃癌前病变是一个病理概念，主要伴存于慢性萎缩性胃炎，而在其基础上发生肠上皮化生或异型增生可能是胃癌发生的组织学基础。若能及早识别和控制癌前病变，以中医辨证分型治疗这些病变，对降低胃癌的发病有重要意义。癌基因的异常表达是近10年来胃粘膜癌前病变研究的一个新领域，研究涉及的癌基因有P53基因[4]。P53基因定位于染色体17P上，有野生型和突变型两种，其野生型对细胞生长繁殖起负调节作用，而突变型P53则促进细胞繁殖，因此野生型P53基因的缺失或失活和突变型P53基因的扩增已被证实是许多肿瘤发生的原因。由于野生型P53基因蛋白的半衰期只有20—30min，所以原位杂交方法实际检测到的只是扩增而稳定的突变型P53，也表明阳性细胞中的P53蛋白具有促癌而非抑癌效应。P53基因蛋白产物是磷酸蛋白，分子量为53KD，它在细胞浆内合成进而定位于细胞核内，因此阳性细胞的染色部位在细胞核内。
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本实验建立脾气虚型CAG模型，并与CAG模型比较，脾气虚型CAG模型体现中医临床辨证与辨病相结合诊疗规范。本实验结果表明，脾气虚型CAG在CAG基础上伴发了不同程度的异型上皮增生，故可用于胃癌前病变机理的研究。流式细胞术是对肿瘤的增殖状态进行评价的先进手段之一，反映肿瘤迅速生长的指标是细胞增殖周期中的S期和G2/M期细胞的比例[5]。本实验，单纯性CAG组，S期细胞比例增高，PI值增加，而单纯型CAG组和脾气虚型CAG组ID值异常率均显著增加，说明两组有较高的增殖活性。脾气虚型CAG组，P53基因在胃粘膜细胞中有较强的表达。本实验从癌基因角度初步揭示了脾气虚证在胃粘膜癌前病变中的重要地位，有利于指导临床对胃粘膜癌前病变的防治及微观辨证。
(致谢：本研究得到了首都医科大学细胞生物系安威主任及其他老师的热情指导，在此表示衷心感谢!)
*国家自然科学基金资助项目(No.39370864)
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作者简介：刘晓颖，女，25岁，助教，首都医科大学细胞室 研究方向：肿瘤的生物治疗。
参考文献
[1] 陈小野，等.大鼠脾虚型萎缩性胃炎模型的实验研究,中医基础与实验研究.第一版.北京：中医古籍出版社，1993
[2] 左连富，刘洪祥，等.流式细胞术检测石蜡包埋肿瘤细胞DNA含量样品制备方法.中华病理学杂志，1988，17：232
[3] 苏慧慈主编.原位杂交.第一版.北京：中国科学技术出版社，1994：115～158
[4] Hao-Y, et al. Abnormal change of P53 gene in gastric and precancerous lesions and APC gene deletion in gastric carcinoma and near tissues. J-Tongji-Med-Univ, 1997,17(2):75～8
[5] Yildiz I, et al. Regional DNA content heterogeneity in wilm'st tumor:incidence and potential clinical relevance. Anticancer Res, 1994,14:1356
(收稿日期 1998—09—03 修回日期 1998—12—27), 百拇医药