二种影响TSH测定结果的因素分析
作者：蔡黎 蔡卫 马杏宝 张宝秀
单位：蔡 黎 马杏宝 张宝秀 上海市疾病预防控制中心，上海 200031；蔡 卫 四川省地方病防治研究所，四川 成都 610031
关键词：TSH；IRMA；ELISA；上海市；四川省；相关系数
中国地方病学杂志990408 摘要 目的 了解影响采样地区和测定方法对TSH测定值的因素。方法 以碘缺乏病重度流行区(四川)和非流行区(上海)新生儿脐带血样，用IRMA法和ELISA法对血样的TSH浓度进行测定。结果 以两种方法对两地的TSH比较和用两地的样本对两种方法的比较，差异均有非常显著性意义(P<0.01)。与其他地区的相关关系的比较表明：虽然IRMA法和ELISA法所测定的TSH值之间存在着相关的联系，但不同测定者之间尚有一定的差异。结论 为说明TSH的测定值与其它指标之间的背离现象提供了一些数据，同时认为有必要进一步对TSH的测定方法做全国性的标准化和对其上限值(切点)进行讨论和确定。
, 百拇医药
中图分类号Q575.14;R446 [文献标识码]A [文章编号]1000-4955(1999)04-0268-03
Study of two factors on TSH measurement
CAI Li,CAI Wei,MA Xing-bao,et al
(Shanghai Municipal Center of Disease Control and Prevention,Shanghai 200031,China)
abstract Objective To determine the effects of different methods and samples from different regions on the TSH value.Methods Two methods (IRMA and ELISA) were used to measure the TSH content of samples from two regions,non(Shanghai Municipal) and severe IDD endemic (Sichuan Province).Results Significant difference was found in TSH level comparison between IRMA and ELISA from both Shanghai and Sichuan with Student's test or median test (P<0.01).Coefficient of correlation of TSH level measured by IRMA and ELISA from Sichuan samples was 0.823,and that from Shanghai samples was 0.833.Analysis of these two coefficients of correlation showed no significant different (u=0.2135,P>0.05).However comparison with coefficiencts reported by other authous showed that although there was correlation of TSH level measured by IRMA and ELISA,there were also some significantly different among different coefficients of correlation.Conclusions TSH as a IDD indicator should be standardized in all over the country,and method for measuring TSH level could be standardized also,and cut point of TSH value should be studied further.
, 百拇医药
Key words TSH；IRMA；ELISA；Shanghai；Sichuan；Coefficient of correlation
在碘缺乏病(IDD)监测中，新生儿脐带血中促甲状腺素(TSH)水平的测定日益受到重视，并成为监测的常规内容之一[1]。为更好地应用TSH水平的资料，同时也对不同IDD流行软件的TSH加以比较，本文对IDD非流行区和重度流行区新生儿的血样以不同的检测方法进行了比较。
1 材料与方法
1.1 对象：IDD重度流行区：选择在四川省4个农村地区县产院或中心医院出生的新生儿为对象；IDD非流行区：选择上海郊区6个区县中心医院，以本地孕妇出生的新生儿为对象。
1.2 采样：在断脐时，挤脐带血数滴于采血滤纸(由中国原子能研究所提供)，血斑直径不小于1cm,待自然干燥后，装入密封袋内，低温保存待测。
, http://www.100md.com
1.3 测定方法
1.3.1 免疫放射分析法(IRMA)：试剂盒由中国原子能研究所提供，按试剂盒内的步骤操作，采用FT-2008γ自动免疫读数仪(西安二六二厂生产)，进行放射读数，计算相应测定值的TSH浓度。
1.3.2 酶联免疫吸附试验(ELISA)：试剂盒由芬兰LAB SYSTEM(上海市飞龙有限公司分装)提供，用酶标检测仪(Multiskan MS芬兰LABSYSTEM公司生产)，测定450nm的光密度(OD)，并经专用软件自动将OD值转换成TSH浓度。
1.3.3 将同一血样分别用IRMA法和ELISA法测定，操作完全按方法的要求，在同一实验室内由一人完成测定。
1.4 质量控制：IRMA法的低中高质控样和ELISA法的低中质控样均符合试剂盒的质量要求。前者的灵敏度为1.5mU/L，平均回收率为91.2%；后者分别为0.75mU/L和95.4%。
, http://www.100md.com
2 结果
2.1 不同地区的TSH水平：用IRMA法测定四川血样的结果表明71.43%样本的TSH水平超过5mU/L，其中最大值为123.00mU/L，另二个超过30mU/L以上样本的TSH值分别为60.4mU/L和45.5mU/L；用ELISA测定相同样本的结果表明只有42.86%的样本超过5mU/L，其中最大值远远低于IRMA法的值，仅为49.3mU/L，另二个较高的样本分别为40.4mU/L和30.1mU/L，其余均低于30.0mU/L。
在上海的血样中，IRMA法测定的结果表明有22.67%的样本超过5mU/L，最大值仅为23.7mU/L；用ELISA法测定的样本中，分别为15.34%和17.9mU/L(附表)。
附表 不同地区TSH水平的构成分布 地区
方法
, http://www.100md.com
n
TSH构成分布(%)
0～
5～
10～
15～
20～
25～
30～
上海
IRMA
ELISA
150
, 百拇医药
150
77.33
84.66
18.00
10.67
3.33
4.00
0.00
0.67
1.34
0.00
0.00
0.00
, 百拇医药
0.00
0.00
四川
IRMA
ELISA
161
161
28.57
57.14
36.03
26.71
18.01
8.70
, http://www.100md.com
9.94
4.97
4.35
0.62
1.24
0.00
1.86
1.86
2.2 不同地区的TSH水平比较：161份四川的血样，用IRMA法测定表明其平均数为9.82±11.82mU/L,中位数为7.97±0.55mU/L;而用ELISA测得的平均数为6.12±6.64mU/L，中位数为4.38±0.35mU/L。
150份上海血样用IRMA法测得的平均数和中位数分别为3.73±3.28mU/L和3.23±0.26mU/L;ELISA法分别为2.54±3.16mU/L和2.95±0.24mU/L。以IRMA法和ELISA法对上海和四川两地的TSH比较，无论是用t检验，还是用中位数检验，差异都显示出有非常显著性意义(P<0.01)。
, 百拇医药
2.3 不同地区两种方法的相关性比较：以两种方法测定四川血样的TSH值，经相关和回归分析表明，其相关系数为0.823，回归方程为：ELISA=1.5698+0.4630×IRMA;
而上海样本分析所得到的相关系数为0.833，回归方程为：ELISA=-0.4600+0.8003×IRMA。
对这两个相关系数进行的比较表明两者差异无显著性意义(u=0.2135,P>0.05)[3]。
3 讨论
在评价一个地区的IDD流行程度时，WHO/UNICEF/ICCIDD[1]曾有一个明确的标准，即可从临床指标和生化指标二个方面来考虑：前者包含了甲状腺的肿大率、克汀病的发病率；后者包括尿碘水平和有关的血清学检查，如TSH和T3、T4的检测。各指标所能代表的方面又各不一样：甲肿率虽然是一个比较恒定的指标，但因触诊法可能随不同个人的感觉和理解程度的不同而有较大的差异;B超法克服了检查的主观意识，是一个比较公正的客观指标；尿碘水平就总体而言能代表采样时段人群碘代谢的水平，但受饮食中碘含量多少和个体的影响太大；TSH水平就理论上来讲，是一个能评价某一时段的人体碘摄入量的指标，有人称之为“是评价人群碘营养状况，判定某一地区是否缺碘的最敏感和可靠指标”。但在实际的检测和评价中，出现了与理论上有一定的差距，与其他指标相比较，“有些则出现了严重的背离”[2]。理论上的肯定性与实际上的不确定性之间的差别，不外乎样本采集和检测手段二个方面。
, 百拇医药
本文采样的对象来自于IDD重度流行区的四川省和非流行区的上海市(单以学龄儿童的甲肿率来定)，前者的甲肿率为37.1%[4]，后者仅为1.5%[5]。对照本文测定的新生儿TSH水平，四川血样的IRMA法TSH>5mU/L的人数占总数的71.43%，ELISA法为42.86%，均属重度流行区，又以IRMA法的测定值显得更为严重；在上海的血样中，IRMA法测定TSH>5mU/L的样本数占总数的22.67%，按这一数值可将上海地区划为IDD的中度流行区；ELISA法中，仅有15.34%样本其测定值超过5mU/L，只能将本地区归属为IDD的轻度流行区。这些数据表明，现行的TSH划分标准无疑是增加了IDD的流行区的严重程度(与甲肿率相比而言)，由此推断的结论可能与实际的情况不相符合，从而在指导面上的防治工作时，可能产生一些不良的作用。
就检测手段而言，当前全国最常用的方法为IRMA法，该法受到放射性元素半衰期的影响，在出厂后的有效期内，仍或多或少地影响到测定的实际值；而ELISA法却无这类缺陷，它不仅有较长的保质期，且无放射性的污染，是一个较为理想的检测方法。从不同地区多个独立的测定结果来看，ELISA的测定值均低于IRMA法的测定值[6～8]。本文的结果与之非常吻合，无论是上海样本，还是四川的样本，其IRMA法的测定值均高于ELISA法的测定值，且有显著性的差别。
, 百拇医药
但有一个很重要的因素尚未得到考虑，那就是采样用的滤纸。本文所采用的采样滤纸为中国原子能研究院提供的滤纸，所进行的测定方法包括IRMA法和ELISA法，并采用相应的试剂盒进行测定，标准也以相应的试剂盒为准。据报道国产滤纸的吸收时间、单位血量的血斑直径、滤纸均匀度、含血量和洗脱率与德国产的S&S903TM型标准滤纸有差异,其中后三相指标的差别有显著性的意义；同时对不同滤纸进行ELISA法的吸光度测定，国产滤纸的均数显著地高于进口滤纸[9]。这是否能说明用国产滤纸进行采样，所得到的测定值会高于实际值，由此产生了用IRMA法所得到的TSH测定值与其它指标(甲肿率、尿碘水平)之间“背离”的现象，这还需进一步的证实。但有一点是肯定的，即有必要对TSH的测定方法做进一步的全国性的标准化，并对其上限的值作进一步的讨论和确定。同时在选定检测方法和试剂盒后，也应选用相应的采血滤纸。
作者简介：蔡 黎，男，1959年生，医学硕士
, http://www.100md.com
参考文献
[1] WHO/UNICEF/ICCIDD.Indicator for Assessing Iodine Dificiency Disorders and their control through salt iodization[R].WHO/NUT,1994.6.1-55.
[2] 吕建国，苏晓辉，孙树秋.全国30个省会城市新生儿TSH水平调查[A].全国第五届碘缺乏病学术会议论文专辑[C].中国地方病学杂志编辑部，1995.49-52.
[3] 顾杏元，金丕焕.直线回归与相关.见金丕焕主编.医用统计方法[M].上海：上海医科大学出版社，1993.100-118.
[4] 四川省地方病防治研究所等.1995年四川省碘缺乏病防治监测报告[J].预防医学情报杂志，1996，12(增刊)：21-24.
, http://www.100md.com
[5] 蔡 黎，马杏宝，张宝秀，等.上海市学生碘营养状况的调查[A].全国第五届碘缺乏病学术会议论文专辑[C].中国地方病杂志编辑部，1995.17-19.
[6] 舒延清，严淑娟，程 柏，等.用IRMA法和ELISA法检测同批新生儿脐血TSH的结果比较[J].中国地方病学杂志，1996,15(4):226.
[7] 陈志辉，何 萌，林曙光.酶联法和免放法对新生儿脐带血滤纸sTSH测定结果的分析[J].中国地方病防治杂志，1996,11(3):156.
[8] 蒋笃强，安广武.酶联法和免放法测定新生儿TSH的对比研究[J].中国地方病防治杂志，1996,11(5):278.
[9] 申红梅，苏晓辉，吕建国.国产滤纸与国际903TM型滤纸在TSH测定中的性能比较[J].中国地方病学杂志，1997,16(6):332-334.
收稿日期1998-03-13；修订日期1998-05-18, http://www.100md.com
单位：蔡 黎 马杏宝 张宝秀 上海市疾病预防控制中心，上海 200031；蔡 卫 四川省地方病防治研究所，四川 成都 610031
关键词：TSH；IRMA；ELISA；上海市；四川省；相关系数
中国地方病学杂志990408 摘要 目的 了解影响采样地区和测定方法对TSH测定值的因素。方法 以碘缺乏病重度流行区(四川)和非流行区(上海)新生儿脐带血样，用IRMA法和ELISA法对血样的TSH浓度进行测定。结果 以两种方法对两地的TSH比较和用两地的样本对两种方法的比较，差异均有非常显著性意义(P<0.01)。与其他地区的相关关系的比较表明：虽然IRMA法和ELISA法所测定的TSH值之间存在着相关的联系，但不同测定者之间尚有一定的差异。结论 为说明TSH的测定值与其它指标之间的背离现象提供了一些数据，同时认为有必要进一步对TSH的测定方法做全国性的标准化和对其上限值(切点)进行讨论和确定。
, 百拇医药
中图分类号Q575.14;R446 [文献标识码]A [文章编号]1000-4955(1999)04-0268-03
Study of two factors on TSH measurement
CAI Li,CAI Wei,MA Xing-bao,et al
(Shanghai Municipal Center of Disease Control and Prevention,Shanghai 200031,China)
abstract Objective To determine the effects of different methods and samples from different regions on the TSH value.Methods Two methods (IRMA and ELISA) were used to measure the TSH content of samples from two regions,non(Shanghai Municipal) and severe IDD endemic (Sichuan Province).Results Significant difference was found in TSH level comparison between IRMA and ELISA from both Shanghai and Sichuan with Student's test or median test (P<0.01).Coefficient of correlation of TSH level measured by IRMA and ELISA from Sichuan samples was 0.823,and that from Shanghai samples was 0.833.Analysis of these two coefficients of correlation showed no significant different (u=0.2135,P>0.05).However comparison with coefficiencts reported by other authous showed that although there was correlation of TSH level measured by IRMA and ELISA,there were also some significantly different among different coefficients of correlation.Conclusions TSH as a IDD indicator should be standardized in all over the country,and method for measuring TSH level could be standardized also,and cut point of TSH value should be studied further.
, 百拇医药
Key words TSH；IRMA；ELISA；Shanghai；Sichuan；Coefficient of correlation
在碘缺乏病(IDD)监测中，新生儿脐带血中促甲状腺素(TSH)水平的测定日益受到重视，并成为监测的常规内容之一[1]。为更好地应用TSH水平的资料，同时也对不同IDD流行软件的TSH加以比较，本文对IDD非流行区和重度流行区新生儿的血样以不同的检测方法进行了比较。
1 材料与方法
1.1 对象：IDD重度流行区：选择在四川省4个农村地区县产院或中心医院出生的新生儿为对象；IDD非流行区：选择上海郊区6个区县中心医院，以本地孕妇出生的新生儿为对象。
1.2 采样：在断脐时，挤脐带血数滴于采血滤纸(由中国原子能研究所提供)，血斑直径不小于1cm,待自然干燥后，装入密封袋内，低温保存待测。
, http://www.100md.com
1.3 测定方法
1.3.1 免疫放射分析法(IRMA)：试剂盒由中国原子能研究所提供，按试剂盒内的步骤操作，采用FT-2008γ自动免疫读数仪(西安二六二厂生产)，进行放射读数，计算相应测定值的TSH浓度。
1.3.2 酶联免疫吸附试验(ELISA)：试剂盒由芬兰LAB SYSTEM(上海市飞龙有限公司分装)提供，用酶标检测仪(Multiskan MS芬兰LABSYSTEM公司生产)，测定450nm的光密度(OD)，并经专用软件自动将OD值转换成TSH浓度。
1.3.3 将同一血样分别用IRMA法和ELISA法测定，操作完全按方法的要求，在同一实验室内由一人完成测定。
1.4 质量控制：IRMA法的低中高质控样和ELISA法的低中质控样均符合试剂盒的质量要求。前者的灵敏度为1.5mU/L，平均回收率为91.2%；后者分别为0.75mU/L和95.4%。
, http://www.100md.com
2 结果
2.1 不同地区的TSH水平：用IRMA法测定四川血样的结果表明71.43%样本的TSH水平超过5mU/L，其中最大值为123.00mU/L，另二个超过30mU/L以上样本的TSH值分别为60.4mU/L和45.5mU/L；用ELISA测定相同样本的结果表明只有42.86%的样本超过5mU/L，其中最大值远远低于IRMA法的值，仅为49.3mU/L，另二个较高的样本分别为40.4mU/L和30.1mU/L，其余均低于30.0mU/L。
在上海的血样中，IRMA法测定的结果表明有22.67%的样本超过5mU/L，最大值仅为23.7mU/L；用ELISA法测定的样本中，分别为15.34%和17.9mU/L(附表)。
附表 不同地区TSH水平的构成分布 地区
方法
, http://www.100md.com
n
TSH构成分布(%)
0～
5～
10～
15～
20～
25～
30～
上海
IRMA
ELISA
150
, 百拇医药
150
77.33
84.66
18.00
10.67
3.33
4.00
0.00
0.67
1.34
0.00
0.00
0.00
, 百拇医药
0.00
0.00
四川
IRMA
ELISA
161
161
28.57
57.14
36.03
26.71
18.01
8.70
, http://www.100md.com
9.94
4.97
4.35
0.62
1.24
0.00
1.86
1.86
2.2 不同地区的TSH水平比较：161份四川的血样，用IRMA法测定表明其平均数为9.82±11.82mU/L,中位数为7.97±0.55mU/L;而用ELISA测得的平均数为6.12±6.64mU/L，中位数为4.38±0.35mU/L。
150份上海血样用IRMA法测得的平均数和中位数分别为3.73±3.28mU/L和3.23±0.26mU/L;ELISA法分别为2.54±3.16mU/L和2.95±0.24mU/L。以IRMA法和ELISA法对上海和四川两地的TSH比较，无论是用t检验，还是用中位数检验，差异都显示出有非常显著性意义(P<0.01)。
, 百拇医药
2.3 不同地区两种方法的相关性比较：以两种方法测定四川血样的TSH值，经相关和回归分析表明，其相关系数为0.823，回归方程为：ELISA=1.5698+0.4630×IRMA;
而上海样本分析所得到的相关系数为0.833，回归方程为：ELISA=-0.4600+0.8003×IRMA。
对这两个相关系数进行的比较表明两者差异无显著性意义(u=0.2135,P>0.05)[3]。
3 讨论
在评价一个地区的IDD流行程度时，WHO/UNICEF/ICCIDD[1]曾有一个明确的标准，即可从临床指标和生化指标二个方面来考虑：前者包含了甲状腺的肿大率、克汀病的发病率；后者包括尿碘水平和有关的血清学检查，如TSH和T3、T4的检测。各指标所能代表的方面又各不一样：甲肿率虽然是一个比较恒定的指标，但因触诊法可能随不同个人的感觉和理解程度的不同而有较大的差异;B超法克服了检查的主观意识，是一个比较公正的客观指标；尿碘水平就总体而言能代表采样时段人群碘代谢的水平，但受饮食中碘含量多少和个体的影响太大；TSH水平就理论上来讲，是一个能评价某一时段的人体碘摄入量的指标，有人称之为“是评价人群碘营养状况，判定某一地区是否缺碘的最敏感和可靠指标”。但在实际的检测和评价中，出现了与理论上有一定的差距，与其他指标相比较，“有些则出现了严重的背离”[2]。理论上的肯定性与实际上的不确定性之间的差别，不外乎样本采集和检测手段二个方面。
, 百拇医药
本文采样的对象来自于IDD重度流行区的四川省和非流行区的上海市(单以学龄儿童的甲肿率来定)，前者的甲肿率为37.1%[4]，后者仅为1.5%[5]。对照本文测定的新生儿TSH水平，四川血样的IRMA法TSH>5mU/L的人数占总数的71.43%，ELISA法为42.86%，均属重度流行区，又以IRMA法的测定值显得更为严重；在上海的血样中，IRMA法测定TSH>5mU/L的样本数占总数的22.67%，按这一数值可将上海地区划为IDD的中度流行区；ELISA法中，仅有15.34%样本其测定值超过5mU/L，只能将本地区归属为IDD的轻度流行区。这些数据表明，现行的TSH划分标准无疑是增加了IDD的流行区的严重程度(与甲肿率相比而言)，由此推断的结论可能与实际的情况不相符合，从而在指导面上的防治工作时，可能产生一些不良的作用。
就检测手段而言，当前全国最常用的方法为IRMA法，该法受到放射性元素半衰期的影响，在出厂后的有效期内，仍或多或少地影响到测定的实际值；而ELISA法却无这类缺陷，它不仅有较长的保质期，且无放射性的污染，是一个较为理想的检测方法。从不同地区多个独立的测定结果来看，ELISA的测定值均低于IRMA法的测定值[6～8]。本文的结果与之非常吻合，无论是上海样本，还是四川的样本，其IRMA法的测定值均高于ELISA法的测定值，且有显著性的差别。
, 百拇医药
但有一个很重要的因素尚未得到考虑，那就是采样用的滤纸。本文所采用的采样滤纸为中国原子能研究院提供的滤纸，所进行的测定方法包括IRMA法和ELISA法，并采用相应的试剂盒进行测定，标准也以相应的试剂盒为准。据报道国产滤纸的吸收时间、单位血量的血斑直径、滤纸均匀度、含血量和洗脱率与德国产的S&S903TM型标准滤纸有差异,其中后三相指标的差别有显著性的意义；同时对不同滤纸进行ELISA法的吸光度测定，国产滤纸的均数显著地高于进口滤纸[9]。这是否能说明用国产滤纸进行采样，所得到的测定值会高于实际值，由此产生了用IRMA法所得到的TSH测定值与其它指标(甲肿率、尿碘水平)之间“背离”的现象，这还需进一步的证实。但有一点是肯定的，即有必要对TSH的测定方法做进一步的全国性的标准化，并对其上限的值作进一步的讨论和确定。同时在选定检测方法和试剂盒后，也应选用相应的采血滤纸。
作者简介：蔡 黎，男，1959年生，医学硕士
, http://www.100md.com
参考文献
[1] WHO/UNICEF/ICCIDD.Indicator for Assessing Iodine Dificiency Disorders and their control through salt iodization[R].WHO/NUT,1994.6.1-55.
[2] 吕建国，苏晓辉，孙树秋.全国30个省会城市新生儿TSH水平调查[A].全国第五届碘缺乏病学术会议论文专辑[C].中国地方病学杂志编辑部，1995.49-52.
[3] 顾杏元，金丕焕.直线回归与相关.见金丕焕主编.医用统计方法[M].上海：上海医科大学出版社，1993.100-118.
[4] 四川省地方病防治研究所等.1995年四川省碘缺乏病防治监测报告[J].预防医学情报杂志，1996，12(增刊)：21-24.
, http://www.100md.com
[5] 蔡 黎，马杏宝，张宝秀，等.上海市学生碘营养状况的调查[A].全国第五届碘缺乏病学术会议论文专辑[C].中国地方病杂志编辑部，1995.17-19.
[6] 舒延清，严淑娟，程 柏，等.用IRMA法和ELISA法检测同批新生儿脐血TSH的结果比较[J].中国地方病学杂志，1996,15(4):226.
[7] 陈志辉，何 萌，林曙光.酶联法和免放法对新生儿脐带血滤纸sTSH测定结果的分析[J].中国地方病防治杂志，1996,11(3):156.
[8] 蒋笃强，安广武.酶联法和免放法测定新生儿TSH的对比研究[J].中国地方病防治杂志，1996,11(5):278.
[9] 申红梅，苏晓辉，吕建国.国产滤纸与国际903TM型滤纸在TSH测定中的性能比较[J].中国地方病学杂志，1997,16(6):332-334.
收稿日期1998-03-13；修订日期1998-05-18, http://www.100md.com