广西沼蛙核型的研究
作者：刘清华
单位：广西医科大学生物学教研室 南宁 530021
关键词：沼蛙；核型；次缢痕
广西医科大学学报990430
摘要 目的：探讨广西沼蛙的核型。方法：沼蛙经秋水仙素处理后，取其骨髓细胞直接制作染色体标本片，并进行核型分析。结果：本实验蛙的二倍体染色体2n＝26，由5对大型染色体和8对小型染色体组成；染色体简式为：8 m+5 sm ；在No.5、6、8、10可见次缢痕，其中No.6具有明显次缢痕。结论：广西沼蛙的核型与广东、四川两地沼蛙核型有差别。
中国图书资料分类法分类号 Q343.21
STUDY OF THE KARYOTYPE OF GUANGXI'S RANA GUENTHERI BOULE-
, http://www.100md.com
NGER
Liu Qinghua
(Department of Biology,Guangxi Medical University,Nanning 530021)
Abstract Objective:To study the karyotype structure of Guangxi's rana guentheri boulenger.Methods:The specimen slice was made by the direct method of marrow cell of rana guentheri boulenger handled by colchicine and the karyotype was analysed.Results:The chromosomes observed in the experiment are diploids,2n=26,which are composed of 5 pairs which are of large type and 8 pairs of small type.The karyotype is a 8 m+5 sm in simplified form.In No.5,6,8,10,the secondary constriction is seen,and it is obvious in No.6.Conclusion:There are the differences between the karyotype of Guangxi's rana guentheri boulenger and that of Guangdong's and Sichuan's rana guentheri boulenger.
, 百拇医药
Key words rana guentheri boulenger;karyotype;secondary constriction
有关无尾两栖类核型的研究国内已有不少报道，有研究发现属于同种类不同地理群——亚种级，其核型有所不同[1～2]。关于广东、四川等地的沼蛙核型研究已有报道，但广西沼蛙核型的研究尚未见报道，为了探讨广西沼蛙核型与其他地区有何差别，本文对此进行了研究，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料：本次实验动物从本地市场所购得，为性成熟蛙，雌雄各4只。
1.2 方法：取材前，以质量浓度为0.05%的秋水仙素按体质量10～15 μg/g注入活体腹腔。3～4 h后，取出前、后肢骨，用质量浓度为0.4 %的KCl溶液冲出骨髓细胞,将其置于27℃水浴箱内低渗30 min，以1 500 r/min离心8～10 min，弃去上清液，用卡诺氏液固定25 min；第二次固定后置于4℃冰箱内过夜，次日按常规空气干燥法制片[3,4]。
, http://www.100md.com
选择10个染色体分散相好、着丝粒清晰、次缢痕清楚的分裂相进行拍照放大，并测量每条染色体长臂、短臂的长度，对其进行计算、配对、排序，并进行核型分析。相对长度以每条染色体的长度占单倍染色体总长的百分值表示。臂比指数以长臂/短臂的比值表示。按Levan(1964年)的计算标准确定染色体着丝粒位置。
2 结 果
臂比及着丝粒指数的测定结果见表1；沼蛙染色体的相对长度，骨髓细胞有丝分裂中期染色体及体细胞核型见图1,2。
表1 沼蛙染色体的相对长度、臂比及
着丝粒指数(
±s) 组别
染色体型号
, 百拇医药 相对长度
臂比
着丝粒指数
类型
A
1
14.39±1.32
1.76±0.10
46.17±2.17
m
B
2
11.62±0.94
, http://www.100md.com
1.97±0.18
33.88±1.96
sm
3
10.78±0.42
1.99±0.21
33.67±2.30
sm
4
10.39±0.44
1.39±0.16
41.87±2.88
, 百拇医药
m
5
9.42±0.39
1.25±0.82
44.65±1.57
m
C
6
6.43±0.39
1.98±0.22
33.04±1.87
sm
7
, http://www.100md.com
6.18±0.33
1.13±0.12
47.15±2.56
m
8
5.88±0.37
1.13±0.08
47.12±1.70
m
9
5.40±0.33
2.19±0.32
, http://www.100md.com
31.76±3.09
sm
10
5.21±0.27
1.22±0.12
45.21±2.40
m
11
5.09±0.23
1.29±0.13
43.88±2.36
m
, 百拇医药
12
4.77±0.27
2.24±0.64
32.34±3.52
sm
13
4.39±0.21
1.38±0.16
42.30±2.73
m
从表1可知，沼蛙核型由中着丝粒(m)和亚中着丝粒(sm)染色体组成，其骨髓细胞二倍体染色体2n＝26，可配成13对染色体，其中大型5对(No.1～5)，小型8对(No.6～13)；染色体简式为：8 m+5 sm。各组染色体特征如下：
, http://www.100md.com
A组(No.1)：是全组染色体中最长的中着丝粒染色体。
B组(No.2～5 )：No.2、3均为亚中着丝粒染色体，No.4、5为中着丝粒染色体。在No.5短臂近着丝粒部位可见次缢痕。
C组(No.6～13)：这组染色体的相对长度显著小于A、B两组，除No.6、9、12是亚中着丝粒染色体外，其余皆为中着丝粒染色体。在No.6长臂有明显的次缢痕，在No.8、10的短臂可见小次缢痕。本实验蛙未发现雌雄间有异型性染色体存在。
图1 沼蛙(♂)骨髓细胞有丝分裂中期染色体
图2 沼蛙(♂)体细胞核型
, 百拇医药
3 讨 论
3.1 同种蛙不同地区核型的异同：广东、四川沼蛙的核型与广西相比较[5，6]，13对染色体相对长度的测量数据基本相似；大型组中的染色体类型均相同，即No.1、4、5为中着丝粒染色体，No.2、3为亚中着丝粒染色体；可见大型组的染色体型态比较稳定。但三地也有明显差异，首先是核型不相同，四川沼蛙核型为9 m+4 sm，广东沼蛙核型为10 m+3 sm，广西沼蛙核型为8 m+5 sm。其次，小型染色体形态有差异，如属于亚中着丝粒染色体的广西沼蛙为No.6、9、12，四川的为No.9、12，广东的为No.9，可见它们小型组中染色体形态差异较大。
3.2 三地区沼蛙次缢痕位置的差异：在大型组中，广西沼蛙的No.5的次缢痕位于短臂近着丝粒部位，而广东、四川见于No.4短臂[5，6]。在小型组中，广西沼蛙在No.6长臂有明显次缢痕，在No.8、10短臂可见微小次缢痕；而广东、四川除在No.7长臂可见次缢痕外，广东在No.10短臂、四川在No.10长臂可见次缢痕。可见两广沼蛙的No.10次缢痕位置是相同的，但与四川不同，这可能是在长期的遗传进化中由于不同的地理环境，次缢痕位置发生断裂造成相互易位，导致上述差异的形成。
, 百拇医药
参考文献
1 谭安鸣，吴政安，赵尔宓.泽蛙的染色体组型、C带和Ag-NoRs研究.两栖爬行动物学报，1986，5(3)：176～180
2 刘清华，马 军，袁志刚.广西黑斑蛙的染色体组型及Ag-NoRs的研究.广西医科大学学报，1998，15(4)：17～19
3 吴贯夫，杨文明，赵尔宓.崇安髭蟾染色体组型的初步观察.两栖爬行动物研究，1981，5(5)：83～88
4 温昌祥，沈础仁，姜书庭.中华大蟾蜍骨髓细胞的染色体标本制备方法及组型分析.蚌埠医学院学报，1981，6(1)：26～28
5 何海宴.广东9种无尾类染色体组型比较研究.两栖爬行动物学报，1986，5(3)：171～175
6 陈文元，王子淑，王喜忠，等.四川6种蛙染色体组型的比较研究.动物学报，1983，4(1)：83～88
收稿日期：1998-12-25, 百拇医药
单位：广西医科大学生物学教研室 南宁 530021
关键词：沼蛙；核型；次缢痕
广西医科大学学报990430
摘要 目的：探讨广西沼蛙的核型。方法：沼蛙经秋水仙素处理后，取其骨髓细胞直接制作染色体标本片，并进行核型分析。结果：本实验蛙的二倍体染色体2n＝26，由5对大型染色体和8对小型染色体组成；染色体简式为：8 m+5 sm ；在No.5、6、8、10可见次缢痕，其中No.6具有明显次缢痕。结论：广西沼蛙的核型与广东、四川两地沼蛙核型有差别。
中国图书资料分类法分类号 Q343.21
STUDY OF THE KARYOTYPE OF GUANGXI'S RANA GUENTHERI BOULE-
, http://www.100md.com
NGER
Liu Qinghua
(Department of Biology,Guangxi Medical University,Nanning 530021)
Abstract Objective:To study the karyotype structure of Guangxi's rana guentheri boulenger.Methods:The specimen slice was made by the direct method of marrow cell of rana guentheri boulenger handled by colchicine and the karyotype was analysed.Results:The chromosomes observed in the experiment are diploids,2n=26,which are composed of 5 pairs which are of large type and 8 pairs of small type.The karyotype is a 8 m+5 sm in simplified form.In No.5,6,8,10,the secondary constriction is seen,and it is obvious in No.6.Conclusion:There are the differences between the karyotype of Guangxi's rana guentheri boulenger and that of Guangdong's and Sichuan's rana guentheri boulenger.
, 百拇医药
Key words rana guentheri boulenger;karyotype;secondary constriction
有关无尾两栖类核型的研究国内已有不少报道，有研究发现属于同种类不同地理群——亚种级，其核型有所不同[1～2]。关于广东、四川等地的沼蛙核型研究已有报道，但广西沼蛙核型的研究尚未见报道，为了探讨广西沼蛙核型与其他地区有何差别，本文对此进行了研究，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料：本次实验动物从本地市场所购得，为性成熟蛙，雌雄各4只。
1.2 方法：取材前，以质量浓度为0.05%的秋水仙素按体质量10～15 μg/g注入活体腹腔。3～4 h后，取出前、后肢骨，用质量浓度为0.4 %的KCl溶液冲出骨髓细胞,将其置于27℃水浴箱内低渗30 min，以1 500 r/min离心8～10 min，弃去上清液，用卡诺氏液固定25 min；第二次固定后置于4℃冰箱内过夜，次日按常规空气干燥法制片[3,4]。
, http://www.100md.com
选择10个染色体分散相好、着丝粒清晰、次缢痕清楚的分裂相进行拍照放大，并测量每条染色体长臂、短臂的长度，对其进行计算、配对、排序，并进行核型分析。相对长度以每条染色体的长度占单倍染色体总长的百分值表示。臂比指数以长臂/短臂的比值表示。按Levan(1964年)的计算标准确定染色体着丝粒位置。
2 结 果
臂比及着丝粒指数的测定结果见表1；沼蛙染色体的相对长度，骨髓细胞有丝分裂中期染色体及体细胞核型见图1,2。
表1 沼蛙染色体的相对长度、臂比及
着丝粒指数(
±s) 组别染色体型号
, 百拇医药 相对长度
臂比
着丝粒指数
类型
A
1
14.39±1.32
1.76±0.10
46.17±2.17
m
B
2
11.62±0.94
, http://www.100md.com
1.97±0.18
33.88±1.96
sm
3
10.78±0.42
1.99±0.21
33.67±2.30
sm
4
10.39±0.44
1.39±0.16
41.87±2.88
, 百拇医药
m
5
9.42±0.39
1.25±0.82
44.65±1.57
m
C
6
6.43±0.39
1.98±0.22
33.04±1.87
sm
7
, http://www.100md.com
6.18±0.33
1.13±0.12
47.15±2.56
m
8
5.88±0.37
1.13±0.08
47.12±1.70
m
9
5.40±0.33
2.19±0.32
, http://www.100md.com
31.76±3.09
sm
10
5.21±0.27
1.22±0.12
45.21±2.40
m
11
5.09±0.23
1.29±0.13
43.88±2.36
m
, 百拇医药
12
4.77±0.27
2.24±0.64
32.34±3.52
sm
13
4.39±0.21
1.38±0.16
42.30±2.73
m
从表1可知，沼蛙核型由中着丝粒(m)和亚中着丝粒(sm)染色体组成，其骨髓细胞二倍体染色体2n＝26，可配成13对染色体，其中大型5对(No.1～5)，小型8对(No.6～13)；染色体简式为：8 m+5 sm。各组染色体特征如下：
, http://www.100md.com
A组(No.1)：是全组染色体中最长的中着丝粒染色体。
B组(No.2～5 )：No.2、3均为亚中着丝粒染色体，No.4、5为中着丝粒染色体。在No.5短臂近着丝粒部位可见次缢痕。
C组(No.6～13)：这组染色体的相对长度显著小于A、B两组，除No.6、9、12是亚中着丝粒染色体外，其余皆为中着丝粒染色体。在No.6长臂有明显的次缢痕，在No.8、10的短臂可见小次缢痕。本实验蛙未发现雌雄间有异型性染色体存在。
图1 沼蛙(♂)骨髓细胞有丝分裂中期染色体
图2 沼蛙(♂)体细胞核型
, 百拇医药
3 讨 论
3.1 同种蛙不同地区核型的异同：广东、四川沼蛙的核型与广西相比较[5，6]，13对染色体相对长度的测量数据基本相似；大型组中的染色体类型均相同，即No.1、4、5为中着丝粒染色体，No.2、3为亚中着丝粒染色体；可见大型组的染色体型态比较稳定。但三地也有明显差异，首先是核型不相同，四川沼蛙核型为9 m+4 sm，广东沼蛙核型为10 m+3 sm，广西沼蛙核型为8 m+5 sm。其次，小型染色体形态有差异，如属于亚中着丝粒染色体的广西沼蛙为No.6、9、12，四川的为No.9、12，广东的为No.9，可见它们小型组中染色体形态差异较大。
3.2 三地区沼蛙次缢痕位置的差异：在大型组中，广西沼蛙的No.5的次缢痕位于短臂近着丝粒部位，而广东、四川见于No.4短臂[5，6]。在小型组中，广西沼蛙在No.6长臂有明显次缢痕，在No.8、10短臂可见微小次缢痕；而广东、四川除在No.7长臂可见次缢痕外，广东在No.10短臂、四川在No.10长臂可见次缢痕。可见两广沼蛙的No.10次缢痕位置是相同的，但与四川不同，这可能是在长期的遗传进化中由于不同的地理环境，次缢痕位置发生断裂造成相互易位，导致上述差异的形成。
, 百拇医药
参考文献
1 谭安鸣，吴政安，赵尔宓.泽蛙的染色体组型、C带和Ag-NoRs研究.两栖爬行动物学报，1986，5(3)：176～180
2 刘清华，马 军，袁志刚.广西黑斑蛙的染色体组型及Ag-NoRs的研究.广西医科大学学报，1998，15(4)：17～19
3 吴贯夫，杨文明，赵尔宓.崇安髭蟾染色体组型的初步观察.两栖爬行动物研究，1981，5(5)：83～88
4 温昌祥，沈础仁，姜书庭.中华大蟾蜍骨髓细胞的染色体标本制备方法及组型分析.蚌埠医学院学报，1981，6(1)：26～28
5 何海宴.广东9种无尾类染色体组型比较研究.两栖爬行动物学报，1986，5(3)：171～175
6 陈文元，王子淑，王喜忠，等.四川6种蛙染色体组型的比较研究.动物学报，1983，4(1)：83～88
收稿日期：1998-12-25, 百拇医药