柔红霉素和三尖杉酯碱对急性髓性白血病细胞体外细胞毒性的相关研究
作者：张绍林 孙慧 孙玲 董见喜 刘少君 邹典斌 席雨人
单位：河南医科大学第一附属医院血液科 邮政编码：郑州市，450052
关键词：白血病，急性/髓性；柔红霉素三尖杉酯碱；体外细胞毒性；化学治疗
临床血液学杂志990403 摘要 目的：化疗药物对急性髓性白血病细胞体外毒性进行相关性研究。方法：用微孔液体培养、MTT法检测柔红霉素(DNR)和三尖杉酯碱(H)对39例急性髓性白血病(AML)患者白血病细胞的细胞毒性。结果：显示二者的细胞毒性呈直线正相关(r=0.7290，P<0.0005)。结论：白血病细胞对上述两种药物有交叉耐药性。
Study on the Correlation Between Cytotoxicity of Daunorubicine and Harringtonine to Acute Myeloblastic Leukemic Cells in Vitro
, http://www.100md.com
Zhang Shaolin,Sun Hui,Sun Ling,et al
Department of Hematology,First Teaching Hospital,Henan Medical University,450052
Abstract Objective:To study the correlation between cytotoxicity of daunorubicine (DNR) and harringtonine (H) to leukemic cells in vitro from 39 patients with acute myeloblastic leukemia (AML).Method: MTT assay in microwell liquid culture was used.Result:It was found there was linear positive correlation between the cytotoxicity of DNR and Harr (r=0.7290，P<0.0005).Conclusion:The results indicated that there was cross-resistance between DNR and Harr for AML cells.
, 百拇医药
Key words Leukemia,acute/myeloblastic Daunorubicine Harringtonine In vitro cytotoxicity Chemotherapy
柔红霉素(DNR)和三尖杉酯碱(H)分别与阿糖胞苷(Ara-C)组成DA方案和HA方案，是目前国内治疗急性髓性白血病(AML)最常用的诱导化疗方案，由于这两种方案疗效高，毒性低，已被认为是AML诱导缓解的“标准”方案。为了探索白血病细胞对DNR和H有无交叉耐药性，本文用MTT〔3-(4，5-Dimethy1-2-thiazolyl)-2，5-diphenyl-2H-tetrazolium-bromid〕法检测细胞毒性，就DNR和H对AML细胞体外细胞毒性的相关性进行了研究。
1 体外细胞毒性检测
1.1 白血病细胞来源 白血病细胞取自39例AML患者的骨髓，符合参考文献〔1〕的诊断标准。男20例，女19例，年龄14～61岁，平均29.4岁M1 6例，M2a 17例，M3 4例，M4 3例，M5a 4例，M5b 5例。应用化疗药物前取骨髓2 ml，肝素抗凝，用比重1.077±0.002淋巴细胞分离液分离单个核细胞，以每ml含青霉素和链霉素各100 U的RPMI 1640培养基洗涤3次，用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基制成2×109/L单个核细胞悬液备用。
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1.2 细胞培养及细胞毒性检测 40孔细胞培养板每孔加入细胞悬液100 μl。所试药物用0.15 mol/LNaCl溶液稀释，DNR和H的工作液浓度分别为0.13 mmol/L及0.02 mmol/L。药物处理孔加入药物工作液10 μl/孔，对照孔加入等量0.15 mol/L NaCl。混匀后置5%CO2、37℃、饱和湿度的培养箱培养24 h后加入12.07 mmol/L的MTT磷酸缓冲液10 μl/孔，继续培养4 h。培养结束后加入0.04 mol/L盐酸异丙醇100 μl/孔终止反应。用移液器反复吸打使甲瓒颗粒充分溶解。以零点孔校正零点，用DG 3022型酶联免疫检测仪测定各孔570 nm和630 nm波长的吸光度(A)。取3孔A值平均数，按下式计算细胞毒性。细胞毒性=(1-处理孔A570-630/对照孔A570-630)×100%〔2〕。
2 结果
DNR和H对白血病细胞的细胞毒性呈高度正相关(r=0.7290，P<0.0005)，见附图。
, 百拇医药
附图 DNR和H对AML细胞体外细胞毒性的散点图
3 讨论
柔红霉素和三尖杉酯碱是治疗AML的两种主要药物，DA方案和HA方案是国内治疗AML最常用的诱导缓解方案。在AML的诱导缓解期，当DA方案或HA方案治疗1疗程后未达到CR时，临床医生根据经验用药选择HA方案或DA方案交替治疗者并非少见。因此，研究DNR和H对AML细胞细胞毒性的相关性对临床合理用药具有指导意义。本文通过DNR和H对39例AML患者的白血病细胞的体外细胞毒性研究显示，DNR和H对白血病细胞的细胞毒性呈高度正相关(r=0.7290，P<0.0005)，提示AML细胞对DNR和H有交叉耐药性。有学者用耐高三尖杉酯碱的K 562细胞株研究发现，白血病细胞对高三尖杉酯碱和柔红霉素之间有交叉耐药性，其耐药机理与耐药相关蛋白(MRP)和多药耐药基因1(MDR1)过度表达有关〔3〕。
参考文献
, http://www.100md.com
1 白血病分类分型讨论会.关于急性非淋巴细胞白血病分型的修改建议.中华血液学杂志，1987，8(3)：181～181
2 张绍林，席雨人.急性白血病化疗药物体外敏感性MTT法的研究.中华血液学杂志，1990，11(3)：116～118
3 Zhou DC,Ramond S,Viguie F,et al.Sequential emergence of MR-and MDR1-gene over-expression as well as MDR1-gene translocation in homoharringtonine-selected K562 human leukemia cell lines.Int J Cancer,1996,65(3):365～371
(1999-01-05 收稿 1999-04-01 修回), http://www.100md.com
单位：河南医科大学第一附属医院血液科 邮政编码：郑州市，450052
关键词：白血病，急性/髓性；柔红霉素三尖杉酯碱；体外细胞毒性；化学治疗
临床血液学杂志990403 摘要 目的：化疗药物对急性髓性白血病细胞体外毒性进行相关性研究。方法：用微孔液体培养、MTT法检测柔红霉素(DNR)和三尖杉酯碱(H)对39例急性髓性白血病(AML)患者白血病细胞的细胞毒性。结果：显示二者的细胞毒性呈直线正相关(r=0.7290，P<0.0005)。结论：白血病细胞对上述两种药物有交叉耐药性。
Study on the Correlation Between Cytotoxicity of Daunorubicine and Harringtonine to Acute Myeloblastic Leukemic Cells in Vitro
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Zhang Shaolin,Sun Hui,Sun Ling,et al
Department of Hematology,First Teaching Hospital,Henan Medical University,450052
Abstract Objective:To study the correlation between cytotoxicity of daunorubicine (DNR) and harringtonine (H) to leukemic cells in vitro from 39 patients with acute myeloblastic leukemia (AML).Method: MTT assay in microwell liquid culture was used.Result:It was found there was linear positive correlation between the cytotoxicity of DNR and Harr (r=0.7290，P<0.0005).Conclusion:The results indicated that there was cross-resistance between DNR and Harr for AML cells.
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Key words Leukemia,acute/myeloblastic Daunorubicine Harringtonine In vitro cytotoxicity Chemotherapy
柔红霉素(DNR)和三尖杉酯碱(H)分别与阿糖胞苷(Ara-C)组成DA方案和HA方案，是目前国内治疗急性髓性白血病(AML)最常用的诱导化疗方案，由于这两种方案疗效高，毒性低，已被认为是AML诱导缓解的“标准”方案。为了探索白血病细胞对DNR和H有无交叉耐药性，本文用MTT〔3-(4，5-Dimethy1-2-thiazolyl)-2，5-diphenyl-2H-tetrazolium-bromid〕法检测细胞毒性，就DNR和H对AML细胞体外细胞毒性的相关性进行了研究。
1 体外细胞毒性检测
1.1 白血病细胞来源 白血病细胞取自39例AML患者的骨髓，符合参考文献〔1〕的诊断标准。男20例，女19例，年龄14～61岁，平均29.4岁M1 6例，M2a 17例，M3 4例，M4 3例，M5a 4例，M5b 5例。应用化疗药物前取骨髓2 ml，肝素抗凝，用比重1.077±0.002淋巴细胞分离液分离单个核细胞，以每ml含青霉素和链霉素各100 U的RPMI 1640培养基洗涤3次，用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基制成2×109/L单个核细胞悬液备用。
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1.2 细胞培养及细胞毒性检测 40孔细胞培养板每孔加入细胞悬液100 μl。所试药物用0.15 mol/LNaCl溶液稀释，DNR和H的工作液浓度分别为0.13 mmol/L及0.02 mmol/L。药物处理孔加入药物工作液10 μl/孔，对照孔加入等量0.15 mol/L NaCl。混匀后置5%CO2、37℃、饱和湿度的培养箱培养24 h后加入12.07 mmol/L的MTT磷酸缓冲液10 μl/孔，继续培养4 h。培养结束后加入0.04 mol/L盐酸异丙醇100 μl/孔终止反应。用移液器反复吸打使甲瓒颗粒充分溶解。以零点孔校正零点，用DG 3022型酶联免疫检测仪测定各孔570 nm和630 nm波长的吸光度(A)。取3孔A值平均数，按下式计算细胞毒性。细胞毒性=(1-处理孔A570-630/对照孔A570-630)×100%〔2〕。
2 结果
DNR和H对白血病细胞的细胞毒性呈高度正相关(r=0.7290，P<0.0005)，见附图。
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附图 DNR和H对AML细胞体外细胞毒性的散点图
3 讨论
柔红霉素和三尖杉酯碱是治疗AML的两种主要药物，DA方案和HA方案是国内治疗AML最常用的诱导缓解方案。在AML的诱导缓解期，当DA方案或HA方案治疗1疗程后未达到CR时，临床医生根据经验用药选择HA方案或DA方案交替治疗者并非少见。因此，研究DNR和H对AML细胞细胞毒性的相关性对临床合理用药具有指导意义。本文通过DNR和H对39例AML患者的白血病细胞的体外细胞毒性研究显示，DNR和H对白血病细胞的细胞毒性呈高度正相关(r=0.7290，P<0.0005)，提示AML细胞对DNR和H有交叉耐药性。有学者用耐高三尖杉酯碱的K 562细胞株研究发现，白血病细胞对高三尖杉酯碱和柔红霉素之间有交叉耐药性，其耐药机理与耐药相关蛋白(MRP)和多药耐药基因1(MDR1)过度表达有关〔3〕。
参考文献
, http://www.100md.com
1 白血病分类分型讨论会.关于急性非淋巴细胞白血病分型的修改建议.中华血液学杂志，1987，8(3)：181～181
2 张绍林，席雨人.急性白血病化疗药物体外敏感性MTT法的研究.中华血液学杂志，1990，11(3)：116～118
3 Zhou DC,Ramond S,Viguie F,et al.Sequential emergence of MR-and MDR1-gene over-expression as well as MDR1-gene translocation in homoharringtonine-selected K562 human leukemia cell lines.Int J Cancer,1996,65(3):365～371
(1999-01-05 收稿 1999-04-01 修回), http://www.100md.com