SIEA抗血清抑制日本血吸虫卵肺肉芽肿的研究*
作者：董惠芬 杨明义 余祖江 蒋明森 杨孟祥
单位：湖北医科大学寄生虫学教研室
关键词：SIEA；抗血清；日本血吸虫；肉芽肿
中国人兽共患病杂志990410 摘 要 目的 探讨日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原(SIEA)诱导保护性免疫的效果及机制。方法 将日本血吸虫未成熟卵在RPMI—1640培养液加SIEA免疫血清中培养4天，小鼠尾静脉注射该虫卵，32天后观察并统计小鼠肺内肉芽肿面积。结果 对照组和实验组肺内虫卵肉芽肿面积之间存在显著性差异(P<0.01)。结论 SIEA诱导产生的抗体具有一定的免疫力；抗体可能通过阻塞卵孔或者结合特定抗原，阻止卵内毛蚴发育，达到抗卵胚发育的效果。
THE SIUDY OF SIEA ANTISERA EFFECT ON INHIBITING
, http://www.100md.com
SCHISTOSOMA JAPONICUM GRANULOMA
FOR MATION IN LUNG
Dong Huifen Yang Minyi Yu Zujiang et al
(Department of Parasitology,Hubei Medical University,Wuhan 430071)
ABSTRACT Aim Study on the effect and mechanism of the immunity induced by Schistosoma japoincum soluble immature egg antigen(SIEA).Methods The immature eggs after being cultured with RPMI-1640 containing anti-SIEA serum or control serum were injected into the mice through tail vein.Results 30 days later,there was obvious difference region of granuloma in lung between the two groups.Conclusion The results indicated that SIEA could induce incomplete immunity.Antibody may occlude pore of eggs or combine special antigen to impede development of miracidia or egg maturation.
, 百拇医药
KEY WORDS SIEA Anti-sera Schistosoma japonicum Granuloma
血吸虫病是一种慢性肉芽肿疾病，肝脏虫卵肉芽肿是血吸虫病的主要病理基础。日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原(SIEA)诱导的抗体对虫卵的胚胎发育很可能存在着抑制作用。为了探讨SIEA抗血清抗卵胚胎发育的确切机制，本文观察了SIEA抗血清培养后的日本血吸虫未成熟虫卵在小鼠肺内形成肉芽肿的面积及病理变化。
1. 材料与方法
1.1 免疫血清的制备 昆明系雌性小鼠(由湖北省医科院提供)，随机分为2组。试验组：抗原SIEA0.3mg/只鼠，加完全弗氏佐剂，分3次经皮下注射，每次间隔10天，第3次免疫后第8天，小鼠按常规摘眼球取血，收集SIEA免疫血清，经琼脂双扩散测得效价为1∶4以上。对照组：仅注射生理盐水加完全弗氏佐剂，相同方法收集血清。将收集的血清无菌过滤，并在56℃水浴灭活30min备用。
, http://www.100md.com
1.2 日本血吸虫未成熟卵的提取及培养 取感染日本血吸虫34天的家兔肝脏按汪世平等[1]分级筛网方法快速提取日本血吸虫新鲜未成熟卵。按张龙兴(1983)[2]用无菌生理盐水加氨苄青霉素(浓度为2500U/ml)，在无菌条件下洗涤虫卵4～5次。离心后吸去上清液，将卵转入RPMI—1640含10%血清的培养基中。对照组加对照血清，试验组(SIEA组)加入SIEA免疫血清，37℃培养4天。
1.3 肺脏病理标本的制备及观察 取昆明系雄性小鼠20只，对照组与试验组各10只，由尾静脉分别注入用对照血清和SIEA免疫血清培养后的未成熟虫卵悬液0.5ml，含虫卵1500～2000个。32天后剖杀全部小鼠，取肺脏福尔马林固定。按病理切片常规方法包埋，以5μm厚度连续切片约500μm，常规HE染色，光学显微镜检查。
1.4 虫卵肉芽肿面积测量 用目镜网形测微尺测量单个散在虫卵肉芽肿面积，仅有单层细胞浸润而无肉芽肿者以“0”计，结果经t检验。
, 百拇医药
2 结果
2.1 肺内虫卵肉芽肿面积
从表1可知对照组形成的肉芽肿面积是实验组面积的3倍多，经统计分析两组之间存在着显著性差异(P<0.01)。
表1 肺内肉芽肿面积比较(单位：100μm2)
Table 1 Comparison of granuloma (Gr) areas in lung between
the control group and the SIEA group 组 别
Group
鼠 数
Nu.of mice
, 百拇医药
肉芽肿面积
area of Gr
P值
P value
对照组
Control
10
42.28±31.7327
-
SIEA组
SIEA group
10
13.25±4.4651
, http://www.100md.com
<0.01
2.2 病理观察 在对照组虫卵周围有大量淋巴细胞聚集，呈团状(见图1)；而实验组虫卵周围仅有少量淋巴细胞浸润(见图2)。
图1，图2 分别为对照组和实验组肺内肉芽肿(均为4×10)
Fig1,2 The areas of Gr in lung of control group and test group mice(4×10)
3 讨论
日本血吸虫虫卵肉芽肿反应兼由细胞与体液免疫介导，而以后者占主要地位[2]。在肉芽肿反应中可见明显的“何博礼”现象，提示日本血吸虫虫卵肉芽肿反应可能是局部的抗原抗体反应，该肉芽肿反应可用免疫球蛋白被动转移，而不能被细胞转移[7]。Garcia等(1985)用慢性感染小鼠血清被动传给急性感染的小鼠，可抑制虫卵肉芽肿的形成[8]。此外，B细胞耗竭小鼠产生较大的肉牙肿和较严重的肝纤维化病变，抗独特型抗体致敏可调节体内肉芽肿形成，且慢性的感染小鼠获得抗独特型IgG1抗体在体外模型中可抑制虫卵肉芽肿形成，抑制虫卵可溶性抗原介导的淋巴细胞合成和免疫球蛋白的增殖[7]，因此特异的抗体可以下调虫卵肉芽肿形成。
, 百拇医药
Hirata(1986)等发现抗体可以进入虫卵内，主要是IgG，并可由IFA检出[8]。卵内环卵沉淀试验表现相似机理。日本血吸虫虫卵从产卵到发育成熟需经过一定时期，发育过程中通过卵壳微管道摄取一定的营养物质(如蛋氨酸和脯胺酸)和排泄代谢废物[9]。杨明义等(1997)发现早期未成熟虫卵卵壳有微管道存在[8]，本研究首次利用SIEA免疫血清培养日本血吸虫未成熟虫卵，经尾静脉注入小鼠体内，结果在肺内形成的肉芽肿面积仅为对照组的三分之一，经统计分析，两者存在着显著性差异(P<0.01)，表明SIEA抗血清在一定程度上抑制了未成熟卵的发育，从而使虫卵肉芽肿面积显著减小。由此可见，SIEA存在着抗卵胚胎发育的靶抗原，通过诱导宿主产生特异性抗体，对宿主产生一定的保护力。其机理可能是通过抗体作用卵胚胎特定蛋白或堵塞卵壳微管道，而达到抗卵胚胎发育的效果，这将有待于进一步研究。
参考文献
1.汪世平，易新元，曾宪芳等.日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原初步研究.湖南医科大学学报，1995，20(3)：193.
, http://www.100md.com
2.张龙兴.左旋咪唑对日本血吸虫虫卵芽肿的影响.寄生虫学与寄生虫病杂志，1983，1(3)：150.
3.李允鹤主编.寄生虫病免疫学及免疫诊断.南京：江苏科学技术出版社，1993，181.
4.刘约翰，赵慰先主编.寄生虫病临床免疫学.重庆：重庆出版社，1993，222.
5.Garcia EG,Mitchell GF.Minireview:evidence for and implications of anti-embryonations immunation immunity schistomasis.Exp Parasitol,1994,79(4):546.
6.Mizuki Hirata,Tomoyaki Hieda and Hiroshi Tsutsum.Immunoglobulins inside Schistosoma japonicum eggs from the livers of mice.J Parasitol,1986,72:57.
, 百拇医药
7.Masanori Kawanaka,Shigo Hayashi and Hiroshi Ohtomo.Nutritional requirments of Schistosoma japonicum eggs.J Parasitol,1983,69:857.
8.杨明义，蒋明森，李瑛，等.日本血吸虫未成熟虫卵卵壳的超微结构.寄生虫学与医学昆虫学报，1997，4(3):34.
9.Garcia EG,Mitchell GF,Rivera PT,et al.Schistosoma japonicum:the modulation of lung granuloma and inhibition of egg maturation in mice by human sera.Asian Pac J Allergy Immnol.1985,(3):156., 百拇医药
单位：湖北医科大学寄生虫学教研室
关键词：SIEA；抗血清；日本血吸虫；肉芽肿
中国人兽共患病杂志990410 摘 要 目的 探讨日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原(SIEA)诱导保护性免疫的效果及机制。方法 将日本血吸虫未成熟卵在RPMI—1640培养液加SIEA免疫血清中培养4天，小鼠尾静脉注射该虫卵，32天后观察并统计小鼠肺内肉芽肿面积。结果 对照组和实验组肺内虫卵肉芽肿面积之间存在显著性差异(P<0.01)。结论 SIEA诱导产生的抗体具有一定的免疫力；抗体可能通过阻塞卵孔或者结合特定抗原，阻止卵内毛蚴发育，达到抗卵胚发育的效果。
THE SIUDY OF SIEA ANTISERA EFFECT ON INHIBITING
, http://www.100md.com
SCHISTOSOMA JAPONICUM GRANULOMA
FOR MATION IN LUNG
Dong Huifen Yang Minyi Yu Zujiang et al
(Department of Parasitology,Hubei Medical University,Wuhan 430071)
ABSTRACT Aim Study on the effect and mechanism of the immunity induced by Schistosoma japoincum soluble immature egg antigen(SIEA).Methods The immature eggs after being cultured with RPMI-1640 containing anti-SIEA serum or control serum were injected into the mice through tail vein.Results 30 days later,there was obvious difference region of granuloma in lung between the two groups.Conclusion The results indicated that SIEA could induce incomplete immunity.Antibody may occlude pore of eggs or combine special antigen to impede development of miracidia or egg maturation.
, 百拇医药
KEY WORDS SIEA Anti-sera Schistosoma japonicum Granuloma
血吸虫病是一种慢性肉芽肿疾病，肝脏虫卵肉芽肿是血吸虫病的主要病理基础。日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原(SIEA)诱导的抗体对虫卵的胚胎发育很可能存在着抑制作用。为了探讨SIEA抗血清抗卵胚胎发育的确切机制，本文观察了SIEA抗血清培养后的日本血吸虫未成熟虫卵在小鼠肺内形成肉芽肿的面积及病理变化。
1. 材料与方法
1.1 免疫血清的制备 昆明系雌性小鼠(由湖北省医科院提供)，随机分为2组。试验组：抗原SIEA0.3mg/只鼠，加完全弗氏佐剂，分3次经皮下注射，每次间隔10天，第3次免疫后第8天，小鼠按常规摘眼球取血，收集SIEA免疫血清，经琼脂双扩散测得效价为1∶4以上。对照组：仅注射生理盐水加完全弗氏佐剂，相同方法收集血清。将收集的血清无菌过滤，并在56℃水浴灭活30min备用。
, http://www.100md.com
1.2 日本血吸虫未成熟卵的提取及培养 取感染日本血吸虫34天的家兔肝脏按汪世平等[1]分级筛网方法快速提取日本血吸虫新鲜未成熟卵。按张龙兴(1983)[2]用无菌生理盐水加氨苄青霉素(浓度为2500U/ml)，在无菌条件下洗涤虫卵4～5次。离心后吸去上清液，将卵转入RPMI—1640含10%血清的培养基中。对照组加对照血清，试验组(SIEA组)加入SIEA免疫血清，37℃培养4天。
1.3 肺脏病理标本的制备及观察 取昆明系雄性小鼠20只，对照组与试验组各10只，由尾静脉分别注入用对照血清和SIEA免疫血清培养后的未成熟虫卵悬液0.5ml，含虫卵1500～2000个。32天后剖杀全部小鼠，取肺脏福尔马林固定。按病理切片常规方法包埋，以5μm厚度连续切片约500μm，常规HE染色，光学显微镜检查。
1.4 虫卵肉芽肿面积测量 用目镜网形测微尺测量单个散在虫卵肉芽肿面积，仅有单层细胞浸润而无肉芽肿者以“0”计，结果经t检验。
, 百拇医药
2 结果
2.1 肺内虫卵肉芽肿面积
从表1可知对照组形成的肉芽肿面积是实验组面积的3倍多，经统计分析两组之间存在着显著性差异(P<0.01)。
表1 肺内肉芽肿面积比较(单位：100μm2)
Table 1 Comparison of granuloma (Gr) areas in lung between
the control group and the SIEA group 组 别
Group
鼠 数
Nu.of mice
, 百拇医药
肉芽肿面积
area of Gr
P值
P value
对照组
Control
10
42.28±31.7327
-
SIEA组
SIEA group
10
13.25±4.4651
, http://www.100md.com
<0.01
2.2 病理观察 在对照组虫卵周围有大量淋巴细胞聚集，呈团状(见图1)；而实验组虫卵周围仅有少量淋巴细胞浸润(见图2)。
图1，图2 分别为对照组和实验组肺内肉芽肿(均为4×10)
Fig1,2 The areas of Gr in lung of control group and test group mice(4×10)
3 讨论
日本血吸虫虫卵肉芽肿反应兼由细胞与体液免疫介导，而以后者占主要地位[2]。在肉芽肿反应中可见明显的“何博礼”现象，提示日本血吸虫虫卵肉芽肿反应可能是局部的抗原抗体反应，该肉芽肿反应可用免疫球蛋白被动转移，而不能被细胞转移[7]。Garcia等(1985)用慢性感染小鼠血清被动传给急性感染的小鼠，可抑制虫卵肉芽肿的形成[8]。此外，B细胞耗竭小鼠产生较大的肉牙肿和较严重的肝纤维化病变，抗独特型抗体致敏可调节体内肉芽肿形成，且慢性的感染小鼠获得抗独特型IgG1抗体在体外模型中可抑制虫卵肉芽肿形成，抑制虫卵可溶性抗原介导的淋巴细胞合成和免疫球蛋白的增殖[7]，因此特异的抗体可以下调虫卵肉芽肿形成。
, 百拇医药
Hirata(1986)等发现抗体可以进入虫卵内，主要是IgG，并可由IFA检出[8]。卵内环卵沉淀试验表现相似机理。日本血吸虫虫卵从产卵到发育成熟需经过一定时期，发育过程中通过卵壳微管道摄取一定的营养物质(如蛋氨酸和脯胺酸)和排泄代谢废物[9]。杨明义等(1997)发现早期未成熟虫卵卵壳有微管道存在[8]，本研究首次利用SIEA免疫血清培养日本血吸虫未成熟虫卵，经尾静脉注入小鼠体内，结果在肺内形成的肉芽肿面积仅为对照组的三分之一，经统计分析，两者存在着显著性差异(P<0.01)，表明SIEA抗血清在一定程度上抑制了未成熟卵的发育，从而使虫卵肉芽肿面积显著减小。由此可见，SIEA存在着抗卵胚胎发育的靶抗原，通过诱导宿主产生特异性抗体，对宿主产生一定的保护力。其机理可能是通过抗体作用卵胚胎特定蛋白或堵塞卵壳微管道，而达到抗卵胚胎发育的效果，这将有待于进一步研究。
参考文献
1.汪世平，易新元，曾宪芳等.日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原初步研究.湖南医科大学学报，1995，20(3)：193.
, http://www.100md.com
2.张龙兴.左旋咪唑对日本血吸虫虫卵芽肿的影响.寄生虫学与寄生虫病杂志，1983，1(3)：150.
3.李允鹤主编.寄生虫病免疫学及免疫诊断.南京：江苏科学技术出版社，1993，181.
4.刘约翰，赵慰先主编.寄生虫病临床免疫学.重庆：重庆出版社，1993，222.
5.Garcia EG,Mitchell GF.Minireview:evidence for and implications of anti-embryonations immunation immunity schistomasis.Exp Parasitol,1994,79(4):546.
6.Mizuki Hirata,Tomoyaki Hieda and Hiroshi Tsutsum.Immunoglobulins inside Schistosoma japonicum eggs from the livers of mice.J Parasitol,1986,72:57.
, 百拇医药
7.Masanori Kawanaka,Shigo Hayashi and Hiroshi Ohtomo.Nutritional requirments of Schistosoma japonicum eggs.J Parasitol,1983,69:857.
8.杨明义，蒋明森，李瑛，等.日本血吸虫未成熟虫卵卵壳的超微结构.寄生虫学与医学昆虫学报，1997，4(3):34.
9.Garcia EG,Mitchell GF,Rivera PT,et al.Schistosoma japonicum:the modulation of lung granuloma and inhibition of egg maturation in mice by human sera.Asian Pac J Allergy Immnol.1985,(3):156., 百拇医药