感染性休克研究现状
作者：刘怀琼
单位：刘怀琼 第三军医大学大坪医院 重庆 630000
关键词：
医学新知杂志990401 摘要 在大鼠脑缺血再灌注损伤实验模型上，观察、测定在脑缺血后对海马组织的兴奋性氨基酸及氧自由基的影响。结果显示缺血后GM1显著减少，诱发其细胞外谷氨酸和天门冬氨酸增高。表明脑缺血再灌注损伤与EAA的过度释放和氧自由基的产生密切相关，而GM1对大鼠脑缺血具有保护作用(P<0.01)。
Effect of EAA and Oxygen Free Radical
of Hippocampus on Experimental
Rat Ischemic Reperfusion Injury
, 百拇医药
Huan Huaijun Xu Renshi Liu Yumin et al
Department of Neurology, the Second Affiliated hospital of
Hubei Medical University, Wuhan 430071
Abstract The effect of excitatory amino acid (EAA) and oxygen free radical on ischemic reperfusion injury was investigated by measuring hippocampus glutamate (Glu), aspartate (Asp) and malonaldehyde (MDA) contents on sham operated. NS-treated and GM1-treated group in 4-vessel occlusion model. We found that the MDA contents significantly increased and the EAA content significatly decreased in NStreated group as compared with the sham operated group respectively (P<0.01). In GM1-treated group, the changes significantly improved (P<0.01). The results suggested that EAA excitotoxin is closely related with the cerebral ischemic reperfusion damage.
, http://www.100md.com
Key words Cerebral ischemic damage; Oxygen free radical;EAA Ganglioside
近年实验研究表明：兴奋性氨基酸(Excitatory Amino Acid, EAA)的神经毒性作用有氧自由基参与其过程[1]。但氧自由基与EAA的关系尚不清楚。曾有报道[2]在沙土鼠两侧颈总动脉阻断的模型上，观察到神经节甙脂(Ganglioside M1，GM1)可显著减少缺血诱发的细胞外兴奋性氨基酸(谷氨酸和天门冬氨酸)水平增高。因此，我们通过应用GM1减少大鼠全脑缺血再灌注期EAA的过度释放来观察丙二醛(MDA)含量的变化，以探讨EAA与氧自由基在缺血再灌注损伤中的关系，为临床脑缺血损伤的治疗提供依据。
1 材料与方法
1.1 动物分组及缺血再灌注模型 成熟健康雄性Wistar大鼠24只，体重200～250 g。随机分为假手术组(控制组)，非GM1治疗组(缺血30 min再灌注60 min NS)和治疗组(缺血30 min再灌注60 min NS及GM1处理)，每组8只。缺血(颈内四血管阻断)再灌注模型在Pulsinelli等[3]法基础上稍作改进。
, http://www.100md.com
1.2 脑海马组织EAA及MDA含量测定 按各组设计要求于实验完成时，迅速断头取脑，冰盘中分离双侧海马，低温匀浆，EAA采前用高效液相色谱仪衍生色谱法测定，MDA采用硫代巴比妥显色法(TBA)[4]测定。
GM1处理组在缺血后5 min给药，按10 mg/kg腹腔内注射GM1。
1.3 统计学处理 数据以
±s表示。组间比较采用t检验，α=0.05。EAA含量与MDA含量作简单直线相关分析。
2 结果
缺血及再灌注EAA、MDA含量变化及GM1的影响结果见附表。
, 百拇医药 附表 缺血再灌注EAA、MDA含量变化及GM1的影响(±s) 观测指标
控制组
脑缺血后30 min 再灌注后60 min
非GM1治疗组
GM1治疗组
谷 氨 酸
7.51 ± 1.05
5.48 ± 0.84*
6.85 ± 0.93
, http://www.100md.com
天门冬氨酸
5.16 ± 0.55
4.04± 0.31*
4.79 ± 0.24
丙二醛酸
82.99±13.33
158.68±14.68*
93.06±18.98△
与控制组、GM1治疗组比较，*P<0.01；与控制组比较，△P>0.053 讨论
目前的研究表明，氧自由基学说在脑缺血再灌注损伤机理中占有重要的地位[5]。脑缺血再灌注早期，细胞外EAA浓度显著增高，EAA启动NMDA受体门控性钙离子通道，使细胞内游离钙堆聚出现钙超载。钙超载可以激活磷脂酶产生自由基，自由基又改变生物膜的结构和功能，钙通道开放，加重钙超载。持续放电Ca++内流又能进一步导致EAA释放的增加，同时使重摄取受阻，进而加重EAA在细胞外堆聚[6]。这种病理过程最终导致兴奋性损伤的发生。自由基对细胞的损伤作用主要是引起生物膜不饱和脂肪酸发生脂质过氧化物，其含量的变化间接地反应了组织中氧自由基含量的变化。因此，通过测定MDA含量的变化间接地估计脑组织中氧自由基水平和脂质过氧化反应的强弱。研究结果示海马组织中EAA在缺血30 min再灌注60 min时显著较假手术组下降(P<0.01)，而MDA则显著升高(P<0.01)。当用GM1处理缺血再灌注大鼠后，随着EAA下降的改善，MDA含量相应地降低(P<0.01)，且同假手术组没有显著性差异(P>0.05)。简单直线相关分析结果表明：天门冬氨酸同MDA含量有显著负相关性(r=-0.494)。因此，我们认为脑缺血再灌注损伤过程中氧自由基的产生和EAA的过度释放之间有着相互协同、互为因果的关系，脑缺血损伤中EAA的兴奋毒性作用可能同氧自由基的介导有着不可分割的关系。
, 百拇医药
参考文献
1 Barth A, Barth L, Newell D W. Combination therapy of MK801 and α phenyltertbutylnitrone enhances protection against ischemic neuronal damage in organotypic hippcampal slice cultures. Exp Neurol, 1996,141(2):330
2 邓小明，朱诚，张光霁.单唾液酸神经节苷与缺血性脑损伤(综述).国外医学(脑血管疾病分册)，1994，2(2)：69
3 Pulsinelli W A, Brierley J B. A new model of bilateral the unanesthatized rat hemispheric ischemia. Stroke, 1997,10(2):267
, 百拇医药
4 田亚军，沈文梅.血清总TBA反应物、LPO及MDA样物质的联合测定.解放军医学情报，1990，(4):322～323
5 Traystman R J,Kirsch J R, Koehler R C. oxygen radical mechanisms of brain injury following ischemia and reperfusion. J Appl Physiol, 1991,71(4):1185
6 Thomas W, Furlow J R. Cerebral ischemia produced by four-vessel occlusion in the rat: a quantitative evaluation of cerebral blood flow. J Appl physiol, 1982,13(6):852
收稿日期：1999-04-0, 百拇医药
单位：刘怀琼 第三军医大学大坪医院 重庆 630000
关键词：
医学新知杂志990401 摘要 在大鼠脑缺血再灌注损伤实验模型上，观察、测定在脑缺血后对海马组织的兴奋性氨基酸及氧自由基的影响。结果显示缺血后GM1显著减少，诱发其细胞外谷氨酸和天门冬氨酸增高。表明脑缺血再灌注损伤与EAA的过度释放和氧自由基的产生密切相关，而GM1对大鼠脑缺血具有保护作用(P<0.01)。
Effect of EAA and Oxygen Free Radical
of Hippocampus on Experimental
Rat Ischemic Reperfusion Injury
, 百拇医药
Huan Huaijun Xu Renshi Liu Yumin et al
Department of Neurology, the Second Affiliated hospital of
Hubei Medical University, Wuhan 430071
Abstract The effect of excitatory amino acid (EAA) and oxygen free radical on ischemic reperfusion injury was investigated by measuring hippocampus glutamate (Glu), aspartate (Asp) and malonaldehyde (MDA) contents on sham operated. NS-treated and GM1-treated group in 4-vessel occlusion model. We found that the MDA contents significantly increased and the EAA content significatly decreased in NStreated group as compared with the sham operated group respectively (P<0.01). In GM1-treated group, the changes significantly improved (P<0.01). The results suggested that EAA excitotoxin is closely related with the cerebral ischemic reperfusion damage.
, http://www.100md.com
Key words Cerebral ischemic damage; Oxygen free radical;EAA Ganglioside
近年实验研究表明：兴奋性氨基酸(Excitatory Amino Acid, EAA)的神经毒性作用有氧自由基参与其过程[1]。但氧自由基与EAA的关系尚不清楚。曾有报道[2]在沙土鼠两侧颈总动脉阻断的模型上，观察到神经节甙脂(Ganglioside M1，GM1)可显著减少缺血诱发的细胞外兴奋性氨基酸(谷氨酸和天门冬氨酸)水平增高。因此，我们通过应用GM1减少大鼠全脑缺血再灌注期EAA的过度释放来观察丙二醛(MDA)含量的变化，以探讨EAA与氧自由基在缺血再灌注损伤中的关系，为临床脑缺血损伤的治疗提供依据。
1 材料与方法
1.1 动物分组及缺血再灌注模型 成熟健康雄性Wistar大鼠24只，体重200～250 g。随机分为假手术组(控制组)，非GM1治疗组(缺血30 min再灌注60 min NS)和治疗组(缺血30 min再灌注60 min NS及GM1处理)，每组8只。缺血(颈内四血管阻断)再灌注模型在Pulsinelli等[3]法基础上稍作改进。
, http://www.100md.com
1.2 脑海马组织EAA及MDA含量测定 按各组设计要求于实验完成时，迅速断头取脑，冰盘中分离双侧海马，低温匀浆，EAA采前用高效液相色谱仪衍生色谱法测定，MDA采用硫代巴比妥显色法(TBA)[4]测定。
GM1处理组在缺血后5 min给药，按10 mg/kg腹腔内注射GM1。
1.3 统计学处理 数据以
±s表示。组间比较采用t检验，α=0.05。EAA含量与MDA含量作简单直线相关分析。2 结果
缺血及再灌注EAA、MDA含量变化及GM1的影响结果见附表。
, 百拇医药 附表 缺血再灌注EAA、MDA含量变化及GM1的影响(
±s) 观测指标控制组
脑缺血后30 min 再灌注后60 min
非GM1治疗组
GM1治疗组
谷 氨 酸
7.51 ± 1.05
5.48 ± 0.84*
6.85 ± 0.93
, http://www.100md.com
天门冬氨酸
5.16 ± 0.55
4.04± 0.31*
4.79 ± 0.24
丙二醛酸
82.99±13.33
158.68±14.68*
93.06±18.98△
与控制组、GM1治疗组比较，*P<0.01；与控制组比较，△P>0.053 讨论
目前的研究表明，氧自由基学说在脑缺血再灌注损伤机理中占有重要的地位[5]。脑缺血再灌注早期，细胞外EAA浓度显著增高，EAA启动NMDA受体门控性钙离子通道，使细胞内游离钙堆聚出现钙超载。钙超载可以激活磷脂酶产生自由基，自由基又改变生物膜的结构和功能，钙通道开放，加重钙超载。持续放电Ca++内流又能进一步导致EAA释放的增加，同时使重摄取受阻，进而加重EAA在细胞外堆聚[6]。这种病理过程最终导致兴奋性损伤的发生。自由基对细胞的损伤作用主要是引起生物膜不饱和脂肪酸发生脂质过氧化物，其含量的变化间接地反应了组织中氧自由基含量的变化。因此，通过测定MDA含量的变化间接地估计脑组织中氧自由基水平和脂质过氧化反应的强弱。研究结果示海马组织中EAA在缺血30 min再灌注60 min时显著较假手术组下降(P<0.01)，而MDA则显著升高(P<0.01)。当用GM1处理缺血再灌注大鼠后，随着EAA下降的改善，MDA含量相应地降低(P<0.01)，且同假手术组没有显著性差异(P>0.05)。简单直线相关分析结果表明：天门冬氨酸同MDA含量有显著负相关性(r=-0.494)。因此，我们认为脑缺血再灌注损伤过程中氧自由基的产生和EAA的过度释放之间有着相互协同、互为因果的关系，脑缺血损伤中EAA的兴奋毒性作用可能同氧自由基的介导有着不可分割的关系。
, 百拇医药
参考文献
1 Barth A, Barth L, Newell D W. Combination therapy of MK801 and α phenyltertbutylnitrone enhances protection against ischemic neuronal damage in organotypic hippcampal slice cultures. Exp Neurol, 1996,141(2):330
2 邓小明，朱诚，张光霁.单唾液酸神经节苷与缺血性脑损伤(综述).国外医学(脑血管疾病分册)，1994，2(2)：69
3 Pulsinelli W A, Brierley J B. A new model of bilateral the unanesthatized rat hemispheric ischemia. Stroke, 1997,10(2):267
, 百拇医药
4 田亚军，沈文梅.血清总TBA反应物、LPO及MDA样物质的联合测定.解放军医学情报，1990，(4):322～323
5 Traystman R J,Kirsch J R, Koehler R C. oxygen radical mechanisms of brain injury following ischemia and reperfusion. J Appl Physiol, 1991,71(4):1185
6 Thomas W, Furlow J R. Cerebral ischemia produced by four-vessel occlusion in the rat: a quantitative evaluation of cerebral blood flow. J Appl physiol, 1982,13(6):852
收稿日期：1999-04-0, 百拇医药