蒲公英水煎液对环磷酰胺诱导的实验性小鼠精子畸形的影响
作者：朱蔚云 庞竹林 汤郡 卢尧
单位：朱蔚云，庞竹林(广州医学院医学遗传学与细胞生物学教研室,广州 510182)；汤郡(广州医学院免疫学教研室)；卢尧(白求恩医科大学基础医学院)
关键词：蒲公英；环磷酰胺；精子畸形
广州医学院学报990404 提要 目的：研究蒲公英水煎液对实验性小鼠生殖细胞遗传物质的影响。方法：应用小鼠精子畸形实验，观察蒲公英水煎液本身能否诱发雄性生殖细胞遗物质的损伤；以及对环磷酰胺诱导的雄性生殖遗传物质损伤是否具有抑制作用。结果：蒲公英水煎液本身不能诱发实验性小鼠精子畸形；对环磷酰胺诱导实验性小鼠精子畸形具有明显抑制作用。结论：蒲公英水煎液具有一定的抗突变作用，可安全应于临床肿瘤治疗。
中图分类号 R285.5
The Effect of Water Boiled Juice of Taraxacum Mongolicum Hand-Mazz on Sperm Aberration Induced by Cyclophosphamide in Mice
, 百拇医药
Zhu Weiyun,Pang Zhulin
(Department of Basic Medicine,Guangzhou Medical College)
Tang Jun
(School of Basic Medicine)
Lu Yao
(Norman Berthun Medical University)
Objective:To analyze the effect of water boiled juice of Taraxacum mongolicum Hand-Mazz(TM) on genetic substances in reproductive cells in male mice.Methods:The mutation rate was indicated with sperm aberration(SA) test. Results:TM did not induce SA in male mice itself,but decreased SA induced by cyclophosphamide(CP) obviously.Conclusion:TM has anti-mutagenesis effect,which could be used safely to treat tumors clinically.
, 百拇医药
Key words Taraxacum mongolicum Hand-Mazz;Cyclophosphamide;Sperm Aberration
中药蒲公英为菊植物蒲公英(Taraxacum mongolicum Hand-Mazz,TM)的干燥全草，含有三萜类、植物甾醇类、黄酮类、胆碱、蛋白质、维生素等物质[1]。据文献报道，蒲公英具有清热解毒、消肿散结、增强免疫等方面的药理作用；并被用做一种常用的治疗肿瘤的药物[2、3]。临床常用的许多抗肿瘤药物在治疗肿瘤的同时会引发正常细胞遗传物质的损害和次发肿瘤的发生。那么蒲公英是否也有这种副作用呢?本文通过蒲公英本身及它与环磷酰胺联合诱发的生殖毒性的研究，探讨蒲公英对生殖细胞遗物质的作用。
1 材料和方法
1.1 药品 中药蒲公英(长春市药材公司提供并鉴定)；注射用环磷酰胺(上海第二制药厂产品)
, 百拇医药
1.2 实验动物 ICR小鼠，雄性，体重20～22g(广州医学院实验动物中心提供)
1.3 蒲公英水煎液的制备 取干燥蒲公英10g，粉碎后加入500ml去离子水，浸泡30min。烧杯中煮沸30min，收集药液。再煎煮两次，收集3次药液于一处，过滤去渣，沸腾水浴浓缩至10ml，使药液浓度相当于1g/ml，4℃冰箱保存待用。
1.4 实验方法
1.4.1 实验分组和给药方法 取小鼠48只，称重后随机分成8组，每组6只动物：阴性对照组为生理盐水；阳性对照组为30mg环磷酰胺(CP)/kg体重。TM诱变组(0.25×103、1.25×103、5.00×103mg/kg体重，即0.5、2.5、10倍人临床常用剂量)；TM抗诱变组(CP+不同剂量TM)。蒲公英水煎液按所需剂量稀释成0.1mg/只小鼠，灌胃给药。抗诱变组同时腹腔注射CP。隔日给药，连续3次。
, 百拇医药
1.4.2 小鼠精子畸形实验方法 首次给药后4周，颈椎脱臼法处死小鼠，参照Wyrobek法制片[4]：取双侧附睾，置生理盐水中充分剪碎，滤除组织碎片，制成精子悬液，常规涂片。甲醇固定，2%伊红染色，于10×40倍显微镜下观察形态。每只动物观察1000个头、尾完整的精子，按无钩、无定形、香蕉形、胖头和双头双尾分别记录畸形精子数及总的精子畸形百分率。
2 实验结果
2.1 TM水煎液对小鼠精子畸形的影响
TM各剂量组诱发的精子畸形率与阴性对照组相比均无显著性差异(P>0.05)。各剂量组之间亦无显著性差异，未表现出剂量-反应效应。见表1。
Tab. 1 Sperm abnormality induced in mice by Taraxacum mongolicum Hand-Mazz(蒲公英) Drug
, 百拇医药
Dose
(mg/kg)
No.of various abnormal sperms
(percentage of various abnormal sperms)
Total
Percentage of
abnormality
Amorphous
Banana-shaped
Hookless
Big-head
, 百拇医药
2 tail& 2 head
N.S
48(13.91)
52(15.07)
78(22.61)
164(47.54)
3(0.70)
345
5.75±1.07
TM
0.25×103
45(15.10)
, 百拇医药
58(19.46)
72(24.16)
117(39.26)
6(2.01)
298
4.97±0.51
TM
1.25×103
37(14.51)
70(27.45)
36(14.12)
111(43.53)
, 百拇医药
1(0.39)
255
4.25±0.46
TM
5.00×103
60(17.91)
66(19.70)
60(17.91)
136(40.60)
13(3.88)
335
5.58±1.66
, http://www.100md.com
CP
30
186(16.32)
210(18.42)
147(12.89)
552(48.42)
45(3.94)
1140
19.00±3.39
2.2 TM水煎液对CP诱发的小鼠精子畸形的抑制作用
CP可使精子畸形率明显增加(比阴性对照组高约3.3倍)，TM能使CP诱发的小鼠精子畸形率明显下降。TM+CP组与阳性对照组相比，均有非常显著性差异(P>0.01)。各剂量组之间未表现出剂量-反应效应。见表2、图1。Tab. 2 Sperm abnormality induced in mice by Taraxacum mongolicum Hand-Mazz(蒲公英)and CP Drug(mg/kg)
, 百拇医药
No.of various abnormal sperms
(Percentage of various abnormal sperms)
Total
Percentage(%)of
abnormality
CP
TM
Amorphous
Banana-shaped
Hookoess
Big-head
, 百拇医药
2 tail& 2 head
N.S
N.S
48(13.91)
52(15.07)
78(22.61)
164(47.54)
3(0.70)
345
5.75±1.07**
30
0.25×103
, 百拇医药
27(6.16)
114(26.03)
101(23.06)
193(44.06)
3(0.68)
438
7.30±0.41**
30
1.25×103
76(14.72)
101(19.57)
, 百拇医药
104(20.16)
218(42.25)
17(3.29)
516
8.60±1.51**
30
5.00×10
32(8.91)
80(22.28)
71(19.78)
169(47.07)
7(1.95)
, http://www.100md.com
359
5.98±0.88**
30
N.S
186(16.32)
210(18.42)
147(12.89)
552(48.42)
45(3.94)
1140
19.00±3.39
, 百拇医药
图1 TM水煎液对CP诱发的小鼠精子畸形的影响
3 讨论
小鼠精子畸形实验是评价环境理化因子对雄性哺乳动物生殖细胞遗传损伤的一种常用的手段。它能特异性地鉴定可传递的遗传性损伤。一般认为在精原细胞后期到精母细胞早期对化学诱变剂较为敏感，故多在首次给药后4～5周取材，此时精子畸形出现率最高[5，6]。在给药次数上，可采用1次给药和多次给药。1次给药实验结果不稳定，而目前常用的连续5次给药，又使小鼠容易产生机械损伤，在实验过程中死亡率较高。本文采用隔日给药的方式，未见饲养过程中小鼠死亡；而多次实验结果也较为稳定。
本实验表明，TM不会诱发小鼠精子畸形，同时对CP诱发的小鼠精子畸形有明显的抑制作用。这与文献记载蒲公英可治疗附睾炎、慢性前列腺炎的结论相一致[7]。这提示TM能使动物生殖细胞遗传物质受到保护，使细胞突变率明显下降。
, 百拇医药
作为一种临床常用的治疗种瘤的药物，TM不象环磷酰胺一样具有很强的诱变性，不会引发体内次发肿瘤的发生。同时，它对环磷酰胺的诱变性具有很强的拮抗作用。这说明它在临床肿瘤的治疗上具有很高的价值。它不仅本身可以治疗肿瘤，而且如与一些毒性很强的化疗药物联合使用，也许会收到更好的效果。
参考文献：
[1]孟志云，徐绥绪.蒲公英的化学与药理.沈阳药科大学学报，1997;14(2)：137～139
[2]吴南生主编.实用临床草药。暨南大学出版社，1991：565～569
[3]俞红，李锦兰.蒲公英对小鼠免疫功能的影响.贵阳医学院学报，1997;22(2)：137～139
[4]Wyrobek AJ,et al.Chemical Induction of Sperm Abnormalities in Mice.Proc Natl Acad Sci USA, 1975;72:4425
, http://www.100md.com
[5]Topham JC.Do induced sperm-head abnormalities in mice specifically identify mammalian mutagens rather than carcinogens? Mutat Res,1980;74:379
[6]Osterloh.J An assessment of the potential testicular toxicity of 10 pesticides using the mouse-sperm morphology assay. Mutat Res,1983;116:407
[7]戴苏林.前列腺康栓对大鼠实验性非菌性前列腺炎的抑制作用.中成药,1990;(8)：27～28
(收稿：1999-07-14), 百拇医药
单位：朱蔚云，庞竹林(广州医学院医学遗传学与细胞生物学教研室,广州 510182)；汤郡(广州医学院免疫学教研室)；卢尧(白求恩医科大学基础医学院)
关键词：蒲公英；环磷酰胺；精子畸形
广州医学院学报990404 提要 目的：研究蒲公英水煎液对实验性小鼠生殖细胞遗传物质的影响。方法：应用小鼠精子畸形实验，观察蒲公英水煎液本身能否诱发雄性生殖细胞遗物质的损伤；以及对环磷酰胺诱导的雄性生殖遗传物质损伤是否具有抑制作用。结果：蒲公英水煎液本身不能诱发实验性小鼠精子畸形；对环磷酰胺诱导实验性小鼠精子畸形具有明显抑制作用。结论：蒲公英水煎液具有一定的抗突变作用，可安全应于临床肿瘤治疗。
中图分类号 R285.5
The Effect of Water Boiled Juice of Taraxacum Mongolicum Hand-Mazz on Sperm Aberration Induced by Cyclophosphamide in Mice
, 百拇医药
Zhu Weiyun,Pang Zhulin
(Department of Basic Medicine,Guangzhou Medical College)
Tang Jun
(School of Basic Medicine)
Lu Yao
(Norman Berthun Medical University)
Objective:To analyze the effect of water boiled juice of Taraxacum mongolicum Hand-Mazz(TM) on genetic substances in reproductive cells in male mice.Methods:The mutation rate was indicated with sperm aberration(SA) test. Results:TM did not induce SA in male mice itself,but decreased SA induced by cyclophosphamide(CP) obviously.Conclusion:TM has anti-mutagenesis effect,which could be used safely to treat tumors clinically.
, 百拇医药
Key words Taraxacum mongolicum Hand-Mazz;Cyclophosphamide;Sperm Aberration
中药蒲公英为菊植物蒲公英(Taraxacum mongolicum Hand-Mazz,TM)的干燥全草，含有三萜类、植物甾醇类、黄酮类、胆碱、蛋白质、维生素等物质[1]。据文献报道，蒲公英具有清热解毒、消肿散结、增强免疫等方面的药理作用；并被用做一种常用的治疗肿瘤的药物[2、3]。临床常用的许多抗肿瘤药物在治疗肿瘤的同时会引发正常细胞遗传物质的损害和次发肿瘤的发生。那么蒲公英是否也有这种副作用呢?本文通过蒲公英本身及它与环磷酰胺联合诱发的生殖毒性的研究，探讨蒲公英对生殖细胞遗物质的作用。
1 材料和方法
1.1 药品 中药蒲公英(长春市药材公司提供并鉴定)；注射用环磷酰胺(上海第二制药厂产品)
, 百拇医药
1.2 实验动物 ICR小鼠，雄性，体重20～22g(广州医学院实验动物中心提供)
1.3 蒲公英水煎液的制备 取干燥蒲公英10g，粉碎后加入500ml去离子水，浸泡30min。烧杯中煮沸30min，收集药液。再煎煮两次，收集3次药液于一处，过滤去渣，沸腾水浴浓缩至10ml，使药液浓度相当于1g/ml，4℃冰箱保存待用。
1.4 实验方法
1.4.1 实验分组和给药方法 取小鼠48只，称重后随机分成8组，每组6只动物：阴性对照组为生理盐水；阳性对照组为30mg环磷酰胺(CP)/kg体重。TM诱变组(0.25×103、1.25×103、5.00×103mg/kg体重，即0.5、2.5、10倍人临床常用剂量)；TM抗诱变组(CP+不同剂量TM)。蒲公英水煎液按所需剂量稀释成0.1mg/只小鼠，灌胃给药。抗诱变组同时腹腔注射CP。隔日给药，连续3次。
, 百拇医药
1.4.2 小鼠精子畸形实验方法 首次给药后4周，颈椎脱臼法处死小鼠，参照Wyrobek法制片[4]：取双侧附睾，置生理盐水中充分剪碎，滤除组织碎片，制成精子悬液，常规涂片。甲醇固定，2%伊红染色，于10×40倍显微镜下观察形态。每只动物观察1000个头、尾完整的精子，按无钩、无定形、香蕉形、胖头和双头双尾分别记录畸形精子数及总的精子畸形百分率。
2 实验结果
2.1 TM水煎液对小鼠精子畸形的影响
TM各剂量组诱发的精子畸形率与阴性对照组相比均无显著性差异(P>0.05)。各剂量组之间亦无显著性差异，未表现出剂量-反应效应。见表1。
Tab. 1 Sperm abnormality induced in mice by Taraxacum mongolicum Hand-Mazz(蒲公英) Drug
, 百拇医药
Dose
(mg/kg)
No.of various abnormal sperms
(percentage of various abnormal sperms)
Total
Percentage of
abnormality
Amorphous
Banana-shaped
Hookless
Big-head
, 百拇医药
2 tail& 2 head
N.S
48(13.91)
52(15.07)
78(22.61)
164(47.54)
3(0.70)
345
5.75±1.07
TM
0.25×103
45(15.10)
, 百拇医药
58(19.46)
72(24.16)
117(39.26)
6(2.01)
298
4.97±0.51
TM
1.25×103
37(14.51)
70(27.45)
36(14.12)
111(43.53)
, 百拇医药
1(0.39)
255
4.25±0.46
TM
5.00×103
60(17.91)
66(19.70)
60(17.91)
136(40.60)
13(3.88)
335
5.58±1.66
, http://www.100md.com
CP
30
186(16.32)
210(18.42)
147(12.89)
552(48.42)
45(3.94)
1140
19.00±3.39
2.2 TM水煎液对CP诱发的小鼠精子畸形的抑制作用
CP可使精子畸形率明显增加(比阴性对照组高约3.3倍)，TM能使CP诱发的小鼠精子畸形率明显下降。TM+CP组与阳性对照组相比，均有非常显著性差异(P>0.01)。各剂量组之间未表现出剂量-反应效应。见表2、图1。Tab. 2 Sperm abnormality induced in mice by Taraxacum mongolicum Hand-Mazz(蒲公英)and CP Drug(mg/kg)
, 百拇医药
No.of various abnormal sperms
(Percentage of various abnormal sperms)
Total
Percentage(%)of
abnormality
CP
TM
Amorphous
Banana-shaped
Hookoess
Big-head
, 百拇医药
2 tail& 2 head
N.S
N.S
48(13.91)
52(15.07)
78(22.61)
164(47.54)
3(0.70)
345
5.75±1.07**
30
0.25×103
, 百拇医药
27(6.16)
114(26.03)
101(23.06)
193(44.06)
3(0.68)
438
7.30±0.41**
30
1.25×103
76(14.72)
101(19.57)
, 百拇医药
104(20.16)
218(42.25)
17(3.29)
516
8.60±1.51**
30
5.00×10
32(8.91)
80(22.28)
71(19.78)
169(47.07)
7(1.95)
, http://www.100md.com
359
5.98±0.88**
30
N.S
186(16.32)
210(18.42)
147(12.89)
552(48.42)
45(3.94)
1140
19.00±3.39
, 百拇医药
图1 TM水煎液对CP诱发的小鼠精子畸形的影响
3 讨论
小鼠精子畸形实验是评价环境理化因子对雄性哺乳动物生殖细胞遗传损伤的一种常用的手段。它能特异性地鉴定可传递的遗传性损伤。一般认为在精原细胞后期到精母细胞早期对化学诱变剂较为敏感，故多在首次给药后4～5周取材，此时精子畸形出现率最高[5，6]。在给药次数上，可采用1次给药和多次给药。1次给药实验结果不稳定，而目前常用的连续5次给药，又使小鼠容易产生机械损伤，在实验过程中死亡率较高。本文采用隔日给药的方式，未见饲养过程中小鼠死亡；而多次实验结果也较为稳定。
本实验表明，TM不会诱发小鼠精子畸形，同时对CP诱发的小鼠精子畸形有明显的抑制作用。这与文献记载蒲公英可治疗附睾炎、慢性前列腺炎的结论相一致[7]。这提示TM能使动物生殖细胞遗传物质受到保护，使细胞突变率明显下降。
, 百拇医药
作为一种临床常用的治疗种瘤的药物，TM不象环磷酰胺一样具有很强的诱变性，不会引发体内次发肿瘤的发生。同时，它对环磷酰胺的诱变性具有很强的拮抗作用。这说明它在临床肿瘤的治疗上具有很高的价值。它不仅本身可以治疗肿瘤，而且如与一些毒性很强的化疗药物联合使用，也许会收到更好的效果。
参考文献：
[1]孟志云，徐绥绪.蒲公英的化学与药理.沈阳药科大学学报，1997;14(2)：137～139
[2]吴南生主编.实用临床草药。暨南大学出版社，1991：565～569
[3]俞红，李锦兰.蒲公英对小鼠免疫功能的影响.贵阳医学院学报，1997;22(2)：137～139
[4]Wyrobek AJ,et al.Chemical Induction of Sperm Abnormalities in Mice.Proc Natl Acad Sci USA, 1975;72:4425
, http://www.100md.com
[5]Topham JC.Do induced sperm-head abnormalities in mice specifically identify mammalian mutagens rather than carcinogens? Mutat Res,1980;74:379
[6]Osterloh.J An assessment of the potential testicular toxicity of 10 pesticides using the mouse-sperm morphology assay. Mutat Res,1983;116:407
[7]戴苏林.前列腺康栓对大鼠实验性非菌性前列腺炎的抑制作用.中成药,1990;(8)：27～28
(收稿：1999-07-14), 百拇医药