谷胱甘肽转移酶π在胃癌的表达及与预后的关系
作者：陈晓耕 施作霖 王清水
单位：福建省立医院(福州 350001)陈晓耕，王清水：肿瘤科；旋作霖：病理科
关键词：胃肿瘤；谷胱甘肽转移酶π；免疫组织化学
福建医科大学学报990406
目的 探讨谷胱甘肽转移酶π(GST-π)与胃癌的分型、分期及预后的关系。 方法 应用鼠抗人GST-π单克隆抗体对80例胃癌进行免疫组化研究。 结果 GST-π在癌旁正常组织中的阳性表达与生存期有统计学意义(P<0.05)；在瘤组织中的表达强度与平均生存期有关(P<0.05)。GST-π表达与临床分期及胃癌组织分化程度无关(P>0.05)。不同生存年段中GST-π的表达也无统计学差异(P>0.05)。 结论 GST-π表达与胃癌的分期、分型无关,但其在瘤组织中的表达强度及在癌旁正常组织中的表达均与生存期有关，可做为肿瘤预后指标的参考。
, http://www.100md.com
Study of Glutathione-S-Transferase-π Expression in Stomach
Carcinoma and its Relationship with Prognosis
Chen Xiaogeng1, Wang Qingshui1, Shi Zuolin2
(1.Department of Onclology, 2.Department of Phathology, Fujian Provincial Hospital, Fuzhou, 350001)
Objective To investigate the Glutathione-S-Transferase-π(GST-π) expression and its influences to prognosis of stomach carcinoma patients. Methods 80 cases of paraffin embedded stomach cancer tissues were stained immunohistochemically for GST-π using monoclonal antibody after pressure cooker heating of tissue section and correlated the results with tumor type,clinical stage and prognosis. Results GST-π expressed in 91.1% cancer tissues and 87.5% in normal tissue. The expression wasn't associated with tumor clinical stage(P<0.05),and tissue deferentiation. But its expression in normal tissue shows positive significance with survival time and the strength of expression in tumor tissue also indicates statistical significance with prognosis. Conclusion Expression of GST-π is related to the biologic behaviors of stomach cancer. Immunohistochemical assessment of GST-π expression in stomach carcinoma/in normal tissue might be useful for tailoring chemotherapy and predict prognosis.
, http://www.100md.com
Key words stomach carcinoma; glutathione-S-transferase-π; immunohistochemistry
胃癌为目前最常见的临床肿瘤之一，化疗的有效率仅为30%～50%，二年内复发及转移率达60%，预后差。其主要原因与多药耐药指标谷胱甘肽转移酶π(glutathione-S-transferase-π，GST-π)的表达有关。为了解GST-π的作用，笔者应用免疫组化方法检测了80例胃癌病理组织切片，结合10年的随访资料，探讨其与胃肿瘤的病理类型、临床分期及预后的关系，为临床选择化疗方案，判断预后提供参考依据。
1 材料和方法
1.1 标本取材 随机选取我院1989～1991年间随访资料完整的胃癌手术存档蜡块，共80例；男性58例，女性22例，年龄54±3.2岁(26～72岁)；HE染色确诊。其中未分化癌12例，低分化腺癌30例，高中分化腺癌27例，粘液腺癌6例，印戒细胞癌5例；按UICC.TNM(1989)分期Ⅰ期13例，Ⅱ期19例,Ⅲ期48例。
, http://www.100md.com
1.2 试剂 抗GST-π单克隆抗体，加强型链霉素抗生物素-过氧化酶组化试剂盒购自福州迈新公司；联苯二胺(DAB)显色剂为北京中山生物工程公司产品。
1.3 方法 石蜡标本4 μm厚连续切片，采用柠檬酸-SP免疫组化法，石蜡切片常规脱蜡水化，高压热力修复抗原(柠檬酸缓冲液0.01 ml，121℃ 5 min)，组化染色按说明书流程进行，DAB显色，苏木素复染，逐级脱水透明；用已知肝癌作阳性片对照；用10%正常牛血清代替一抗做阴性对照；光镜下观察。
1.4 结果判断 阳性细胞胞浆呈棕黄色。每张切片随机观察100个细胞，取阳性细胞<5%为阴性，5%～30%(+)，30%～75%(++)，>75%(+++)。
1.5 统计学处理 用EPI.INFO5.00建立数据库，采用t检验、Ridit分析，Gehan比分检验分析及卡方检验。所有统计过程均在EPI、SPSS/PC+统计软件包中进行。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 阳性细胞呈棕色，轮廓清楚，主要位于细胞浆(图1,2)。
图1 癌旁正常组织GST-π表达(×250)
图2 胃癌组织GST-π表达(×250)
, 百拇医药
2.2 GST-π在癌组织中的表达强度与平均生存期的关系(表1)
表1 瘤组织GST-π不同表达强度与生存期的关系(Gehan比分检验法) 标记强度
癌旁正常组织
瘤 组 织
n
中位生存期
(年)
n
中位生存期
(年)*
+
, 百拇医药
30
7.60
17
7.70
++
34
5.90
32
4.40
+++
6
1.70
24
, 百拇医药 1.70
*:P<0.05(下表同).
2.3 瘤组织GST-π表达与病理类型，临床分期的关系(表2)
表2 瘤组织GST-π表达与病理类型，临床分期的关系。
GST-π
-
+
病理类型*
未分化
1
11
低分化
, 百拇医药
1
29
高分化
2
25
粘液腺
2
4
印戒细胞
1
4
临床分期
Ⅰ
3
, 百拇医药
10
Ⅱ
1
18
Ⅲ
3
45
2.4 不同生存年段GST-π表达的统计未见明显差异(P>0.05)。笔者比较GST-π在同样瘤组织表达阳性的情况下, 癌旁正常组织的不同表达其平均生存期有明显差异(阳性为5.3年,阴性为2.5年)，提示GST-π在癌旁正常组织中的表达与预后有关，差异有显著性(P<0.05)。
3 讨 论
3.1 癌旁正常组织表达GST-π的意义 做为新的胃癌标志酶及第二相药物代谢酶[1]，Schipper[2]报道胃癌组织含GST-π 100%，正常粘膜也含100%，粘液细胞97%，主细胞30%，壁细胞67%。本组实验发现,GST-π在癌旁正常组织表达高达87.5%，在癌组织中表达为91.1%。从平均生存期看，表达GST-π阳性者生存期高于阴性者(5.2±3.6年和3.2±2.9年)，提示正常组织表达GST-π在判断预后上有参考意义。笔者同时也比较了GST-π在同样瘤组织表达阳性的情况下，正常组织表达阳性与阴性不同组别平均生存期也有明显差异(P<0.05)。提示GST-π在正常组织中阳性表达者预后较阴性表达者好，但与表达强度无关。通过实验，笔者认为GST-π等耐药指标在正常组织的表达应当受到重视，特别在判断预后方面。GST-π做为人类细胞基因组的正常表达之一，与许多原癌基因如c-fos,c-neu,EGFR等一样相互关联，由同一系列基因调控协调表达[3]，主要作用可能与拮抗外源毒素，排泄代谢产物，甾激素转化及细胞吞噬调节有关，保护细胞免受损害。不同的表达方式是由它们在不同组织类型中癌基因变化或肿瘤发展的生物学特性不同所决定的。笔者认为，正常组织表达耐药提示机体自我保护机能健全，可抵卸外来癌细胞的侵袭和浸润，构成一道屏障。同时由于天然耐药，使得化疗过程中正常细胞得以保护，副作用相对降低，最终达到最大限度杀死癌细胞，延长生存期的目的。所以判断预后不仅看肿瘤细胞是否耐药，还得观察正常组织是否有耐药表达；瘤细胞表达是不利的，癌旁正常组织表达则有利延长生存期。
, http://www.100md.com
3.2 癌组织表达GST-π的意义 胃癌对化疗不敏感，预后差。目前认为，GST-π主要通过加强亲电物质与谷胱甘肽结合及和亲脂性细胞毒药物结合增加其水溶性，促进代谢，降低化疗药的细胞毒作用。Schipper报道癌组织表达GST-π表达与组织类型无关，不宜做预后指标[2]。国内报道GST-π胃癌组织阳性表达率从57.1%～87.1%,高分化组表达高于低分化组，癌前病变阳性表达率高于正常粘膜，阳性颗粒主要分布在胞浆内[4，5]。冯久贤等认为[4]，胃癌组织中GST-π表达与分型无关，但瘤组织与癌旁组织表达差异则有统计学意义。本实验组GST-π表达阳性率为91.1%，表达与分型及分期无关(P>0.05)，不同生存年段GST-π的阳性表达分布显示差异无显著意义(P>0.05)，提示GST-π广泛表达分布于胃的正常组织及癌组织。同级同期的胃癌GST-π含量不同，表达的是对耐药的差异、病理分型，临床分期说明的是肿瘤的分化和浸润程度，代表不了GST-π所介导的耐药性的强弱。有意义的是，本组实验发现，GST-π表达强度不同与平均生存期有统计学差异(P<0.05)，表达强度越高，生存期越短。目前认为，GST-π主要介导与顺铂及阿霉素相关的耐药，尤其在顺铂中起主要作用，GST-π表达强说明耐药强，化疗不敏感，生存期短[7]。笔者认为GST-π表达可作为一个临床预后的参考指标。
, 百拇医药
参考文献
1 Nishimura T,Newkirk K,Sessions RB,et al. Immunohistochemical staining for glutathione-s-transferase predicts response to platinum-based chemotherapy in head and neck cancer. Clin Cancer Res, 1996;1:1859
2 Schipper DI,Wagenmans MJ,Vanhaelst U,et al. Immunohistochemical determination of glutathione-s-transferases gastric carcinoma and in adjacent normal gastric epithelium. Anticancer Res, 1996;16:565
, http://www.100md.com
3 Volm M,Kastec M,Matten J,et al. Expression of resistance factor(P- glycoprotein,glutathione-S-transferase and topoisomerase Ⅱ) and their interrelationship to proto-oncogene products in renal cell carcinomas. Cancer, 1993;71:3981
4 冯久贤，工恩忠，杨友华,等. 谷胱甘肽-S-转移酶在进展期胃癌中的表达和意义. 实用肿瘤杂志, 1995;10：31
5 马 骧，工宏光，尹宗柱,等. 胃癌胎盘型GST-π表达的意义. 新消化病学杂志，19967; 15：691
6 贺青卿,单礼成,范西红,等. 胃癌组织中GST-π表达及其意义. 免疫学杂志, 1998;15:255
7 张 强，施作霖，陈梓甫,等. 肾细胞癌对化疗药物的多种耐药机制及其逆转. 中华泌尿外科杂志， 1999;20:51
(收稿：1999—05—24 修回：1999—10—25), 百拇医药
单位：福建省立医院(福州 350001)陈晓耕，王清水：肿瘤科；旋作霖：病理科
关键词：胃肿瘤；谷胱甘肽转移酶π；免疫组织化学
福建医科大学学报990406
目的 探讨谷胱甘肽转移酶π(GST-π)与胃癌的分型、分期及预后的关系。 方法 应用鼠抗人GST-π单克隆抗体对80例胃癌进行免疫组化研究。 结果 GST-π在癌旁正常组织中的阳性表达与生存期有统计学意义(P<0.05)；在瘤组织中的表达强度与平均生存期有关(P<0.05)。GST-π表达与临床分期及胃癌组织分化程度无关(P>0.05)。不同生存年段中GST-π的表达也无统计学差异(P>0.05)。 结论 GST-π表达与胃癌的分期、分型无关,但其在瘤组织中的表达强度及在癌旁正常组织中的表达均与生存期有关，可做为肿瘤预后指标的参考。
, http://www.100md.com
Study of Glutathione-S-Transferase-π Expression in Stomach
Carcinoma and its Relationship with Prognosis
Chen Xiaogeng1, Wang Qingshui1, Shi Zuolin2
(1.Department of Onclology, 2.Department of Phathology, Fujian Provincial Hospital, Fuzhou, 350001)
Objective To investigate the Glutathione-S-Transferase-π(GST-π) expression and its influences to prognosis of stomach carcinoma patients. Methods 80 cases of paraffin embedded stomach cancer tissues were stained immunohistochemically for GST-π using monoclonal antibody after pressure cooker heating of tissue section and correlated the results with tumor type,clinical stage and prognosis. Results GST-π expressed in 91.1% cancer tissues and 87.5% in normal tissue. The expression wasn't associated with tumor clinical stage(P<0.05),and tissue deferentiation. But its expression in normal tissue shows positive significance with survival time and the strength of expression in tumor tissue also indicates statistical significance with prognosis. Conclusion Expression of GST-π is related to the biologic behaviors of stomach cancer. Immunohistochemical assessment of GST-π expression in stomach carcinoma/in normal tissue might be useful for tailoring chemotherapy and predict prognosis.
, http://www.100md.com
Key words stomach carcinoma; glutathione-S-transferase-π; immunohistochemistry
胃癌为目前最常见的临床肿瘤之一，化疗的有效率仅为30%～50%，二年内复发及转移率达60%，预后差。其主要原因与多药耐药指标谷胱甘肽转移酶π(glutathione-S-transferase-π，GST-π)的表达有关。为了解GST-π的作用，笔者应用免疫组化方法检测了80例胃癌病理组织切片，结合10年的随访资料，探讨其与胃肿瘤的病理类型、临床分期及预后的关系，为临床选择化疗方案，判断预后提供参考依据。
1 材料和方法
1.1 标本取材 随机选取我院1989～1991年间随访资料完整的胃癌手术存档蜡块，共80例；男性58例，女性22例，年龄54±3.2岁(26～72岁)；HE染色确诊。其中未分化癌12例，低分化腺癌30例，高中分化腺癌27例，粘液腺癌6例，印戒细胞癌5例；按UICC.TNM(1989)分期Ⅰ期13例，Ⅱ期19例,Ⅲ期48例。
, http://www.100md.com
1.2 试剂 抗GST-π单克隆抗体，加强型链霉素抗生物素-过氧化酶组化试剂盒购自福州迈新公司；联苯二胺(DAB)显色剂为北京中山生物工程公司产品。
1.3 方法 石蜡标本4 μm厚连续切片，采用柠檬酸-SP免疫组化法，石蜡切片常规脱蜡水化，高压热力修复抗原(柠檬酸缓冲液0.01 ml，121℃ 5 min)，组化染色按说明书流程进行，DAB显色，苏木素复染，逐级脱水透明；用已知肝癌作阳性片对照；用10%正常牛血清代替一抗做阴性对照；光镜下观察。
1.4 结果判断 阳性细胞胞浆呈棕黄色。每张切片随机观察100个细胞，取阳性细胞<5%为阴性，5%～30%(+)，30%～75%(++)，>75%(+++)。
1.5 统计学处理 用EPI.INFO5.00建立数据库，采用t检验、Ridit分析，Gehan比分检验分析及卡方检验。所有统计过程均在EPI、SPSS/PC+统计软件包中进行。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 阳性细胞呈棕色，轮廓清楚，主要位于细胞浆(图1,2)。
图1 癌旁正常组织GST-π表达(×250)
图2 胃癌组织GST-π表达(×250)
, 百拇医药
2.2 GST-π在癌组织中的表达强度与平均生存期的关系(表1)
表1 瘤组织GST-π不同表达强度与生存期的关系(Gehan比分检验法) 标记强度
癌旁正常组织
瘤 组 织
n
中位生存期
(年)
n
中位生存期
(年)*
+
, 百拇医药
30
7.60
17
7.70
++
34
5.90
32
4.40
+++
6
1.70
24
, 百拇医药 1.70
*:P<0.05(下表同).
2.3 瘤组织GST-π表达与病理类型，临床分期的关系(表2)
表2 瘤组织GST-π表达与病理类型，临床分期的关系。
GST-π
-
+
病理类型*
未分化
1
11
低分化
, 百拇医药
1
29
高分化
2
25
粘液腺
2
4
印戒细胞
1
4
临床分期
Ⅰ
3
, 百拇医药
10
Ⅱ
1
18
Ⅲ
3
45
2.4 不同生存年段GST-π表达的统计未见明显差异(P>0.05)。笔者比较GST-π在同样瘤组织表达阳性的情况下, 癌旁正常组织的不同表达其平均生存期有明显差异(阳性为5.3年,阴性为2.5年)，提示GST-π在癌旁正常组织中的表达与预后有关，差异有显著性(P<0.05)。
3 讨 论
3.1 癌旁正常组织表达GST-π的意义 做为新的胃癌标志酶及第二相药物代谢酶[1]，Schipper[2]报道胃癌组织含GST-π 100%，正常粘膜也含100%，粘液细胞97%，主细胞30%，壁细胞67%。本组实验发现,GST-π在癌旁正常组织表达高达87.5%，在癌组织中表达为91.1%。从平均生存期看，表达GST-π阳性者生存期高于阴性者(5.2±3.6年和3.2±2.9年)，提示正常组织表达GST-π在判断预后上有参考意义。笔者同时也比较了GST-π在同样瘤组织表达阳性的情况下，正常组织表达阳性与阴性不同组别平均生存期也有明显差异(P<0.05)。提示GST-π在正常组织中阳性表达者预后较阴性表达者好，但与表达强度无关。通过实验，笔者认为GST-π等耐药指标在正常组织的表达应当受到重视，特别在判断预后方面。GST-π做为人类细胞基因组的正常表达之一，与许多原癌基因如c-fos,c-neu,EGFR等一样相互关联，由同一系列基因调控协调表达[3]，主要作用可能与拮抗外源毒素，排泄代谢产物，甾激素转化及细胞吞噬调节有关，保护细胞免受损害。不同的表达方式是由它们在不同组织类型中癌基因变化或肿瘤发展的生物学特性不同所决定的。笔者认为，正常组织表达耐药提示机体自我保护机能健全，可抵卸外来癌细胞的侵袭和浸润，构成一道屏障。同时由于天然耐药，使得化疗过程中正常细胞得以保护，副作用相对降低，最终达到最大限度杀死癌细胞，延长生存期的目的。所以判断预后不仅看肿瘤细胞是否耐药，还得观察正常组织是否有耐药表达；瘤细胞表达是不利的，癌旁正常组织表达则有利延长生存期。
, http://www.100md.com
3.2 癌组织表达GST-π的意义 胃癌对化疗不敏感，预后差。目前认为，GST-π主要通过加强亲电物质与谷胱甘肽结合及和亲脂性细胞毒药物结合增加其水溶性，促进代谢，降低化疗药的细胞毒作用。Schipper报道癌组织表达GST-π表达与组织类型无关，不宜做预后指标[2]。国内报道GST-π胃癌组织阳性表达率从57.1%～87.1%,高分化组表达高于低分化组，癌前病变阳性表达率高于正常粘膜，阳性颗粒主要分布在胞浆内[4，5]。冯久贤等认为[4]，胃癌组织中GST-π表达与分型无关，但瘤组织与癌旁组织表达差异则有统计学意义。本实验组GST-π表达阳性率为91.1%，表达与分型及分期无关(P>0.05)，不同生存年段GST-π的阳性表达分布显示差异无显著意义(P>0.05)，提示GST-π广泛表达分布于胃的正常组织及癌组织。同级同期的胃癌GST-π含量不同，表达的是对耐药的差异、病理分型，临床分期说明的是肿瘤的分化和浸润程度，代表不了GST-π所介导的耐药性的强弱。有意义的是，本组实验发现，GST-π表达强度不同与平均生存期有统计学差异(P<0.05)，表达强度越高，生存期越短。目前认为，GST-π主要介导与顺铂及阿霉素相关的耐药，尤其在顺铂中起主要作用，GST-π表达强说明耐药强，化疗不敏感，生存期短[7]。笔者认为GST-π表达可作为一个临床预后的参考指标。
, 百拇医药
参考文献
1 Nishimura T,Newkirk K,Sessions RB,et al. Immunohistochemical staining for glutathione-s-transferase predicts response to platinum-based chemotherapy in head and neck cancer. Clin Cancer Res, 1996;1:1859
2 Schipper DI,Wagenmans MJ,Vanhaelst U,et al. Immunohistochemical determination of glutathione-s-transferases gastric carcinoma and in adjacent normal gastric epithelium. Anticancer Res, 1996;16:565
, http://www.100md.com
3 Volm M,Kastec M,Matten J,et al. Expression of resistance factor(P- glycoprotein,glutathione-S-transferase and topoisomerase Ⅱ) and their interrelationship to proto-oncogene products in renal cell carcinomas. Cancer, 1993;71:3981
4 冯久贤，工恩忠，杨友华,等. 谷胱甘肽-S-转移酶在进展期胃癌中的表达和意义. 实用肿瘤杂志, 1995;10：31
5 马 骧，工宏光，尹宗柱,等. 胃癌胎盘型GST-π表达的意义. 新消化病学杂志，19967; 15：691
6 贺青卿,单礼成,范西红,等. 胃癌组织中GST-π表达及其意义. 免疫学杂志, 1998;15:255
7 张 强，施作霖，陈梓甫,等. 肾细胞癌对化疗药物的多种耐药机制及其逆转. 中华泌尿外科杂志， 1999;20:51
(收稿：1999—05—24 修回：1999—10—25), 百拇医药