亚硒酸钠及抗氧化剂抑制小鼠肺泡Arthus血管炎发生的机制△
作者：石新兰 凌允礼 侯健存
单位：中国医学科学院 中国协和医科大学 基础医学研究所病理室， 北京 100005
关键词：亚硒酸钠；抗氧化剂；活性氧；肺泡血管炎；补体活化反馈环
中国医学科学院学报990404 摘要 目的 以小鼠肺泡血管炎动物模型为研究对象，证明亚硒酸钠及其它抗氧化剂，可通过抑制补体—中性粒细胞(PMN)—活性氧(ROS)正反馈活化环的机制抑制炎症反应。方法 以牛血清白蛋白致敏昆明小鼠建立肺泡Arthus反应性血管炎(即急性肺泡炎)的动物模型，观察口服补体活化抑制剂亚硒酸钠或抗氧化剂类黄酮(flavonoid)和维生素E阻断补体活化正反馈环的运转，以抑制小鼠急性肺泡炎的发生(观察补体活化及释放的活性氧在炎症区PMN上的荧光组化表现)。结果 以上3种补体活化抑制剂及抗氧化剂能在不同程度上抑制小鼠肺泡Arthus血管炎的发生，尤以3种抗氧化剂联合应用效果更佳，其抑制率可达75%(P<0.01)。结论 亚硒酸钠抑制补体的活化、类黄酮及维生素E的抗氧化作用可以通过抑制补体活化反馈机制控制炎症应答，从而进一步证明了补体—PMN—ROS正反馈活化环促进炎症反应机制的存在。
, 百拇医药
中图号 R392.31
The Inhibitory Effect of Selenite and Other Antioxidants on
the Complement Mediated Experimental Pulmonary Alveolitis
Shi Xinlan Lin Yunli Hou Jiancun#
(Department of Pathology, Institute of Basic Medical Sciences, CAMS and PUMC Beijing. 100005)
Objective To test the regulatory effect of selenite and other antioxidants on complement PMN activation feedback mechanism mediated inflammatory response in experimantal pulmonary vasculitis. Methods Mouse model of pulmonary Arthus reaction vasculitis developed with BSA sensitization and antigen inhalation was used for tests of inhibitory effect of oral administration of sodium selenite, glycyrrhizin flavonoids and/or vitamin E on the incidence of developing vasculitis, which could reflect the modulation of inflammatory response and tissue injury. Results A remarkable inhibitory effect of selenite or combined flavonoid and vitamin E on the induction of pulmonary vasculitis were observed as the incidence of vasculitis could drop from 100% of the untreated group down to 25% of the antioxidants treated groups, revealing modulation of inflammatory response. Conclusions It indicated a newer insight into mechanism of the inflammatory response could give a novel approach to the modulation of inflammatory response. An adjuvant therapy of selenium and antioxidants to the interventions of inflammatory disorders has been expected.
, 百拇医药
Key words selenite; antioxidants; reactive oxygen species; alveolar vasculitis; complement activation feedback
炎症应答调控的研究是防治炎症性疾病的关键，但至今对炎症的机制尚未完全阐明。近年来多数学者认为在炎症形成过程中补体起着中心作用[1，2]。笔者曾提出补体介导炎症反应及组织损伤机制的新设想[3]，即补体的活化既能激活中性粒细胞(PMN)及血管内皮细胞(EC)表达粘附分子，介导PMN跨内皮渗出[4]，又能激活PMN释放活性氧(ROS)，引起氧化损伤[5]；而且ROS又能再反馈激活补体，如此形成一个正反馈活化环致使炎症反应持续并扩大。而抑制补体活化或清除ROS，必将阻断该反馈环的运转，从而起到控制炎症反应减轻组织损伤的作用。本组曾以离体试验证实了补体—PMN—ROS正反馈活化环的存在[6]，本研究采用兼有抑制补体活化作用的抗氧化剂亚硒酸钠及甘草类黄酮、维生素E等活性氧清除剂对小鼠肺泡Arthus反应性血管炎动物模型产生的阻断作用，进一步在整体动物水平验证补体介导的活化反馈环调节炎症反应机制的存在。
, http://www.100md.com
1 材料和方法
试剂 牛血清白蛋白(BSA)为天津生化制品厂出品，锰枸橼酸盐缓冲液、DAB显色液与氧合溶液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液(TBR)均按文献[7]方法配制，兔抗小鼠C3为本实验室制备，FITC-羊抗兔IgG为军事医学科学院五所产品，FITC-羊抗鼠IgG为北京生物制品研究所产品，亚硒酸钠(selenase, SS, 100 μg/amp)为德国G. N. PHARM药厂提供，甘草类黄酮(glycyrrhiza flavonoid, GF)为呼和浩特迪科医药高新技术产品开发公司产品，50% Vitamin E(VE, 水溶性)为中国预防医学科学院营养卫生研究所提供。
仪器 OTF恒冷低温切片机(英国，Bright),BH2落射荧光显微镜(日本，Olympus)。
小鼠Arthus反应性肺泡血管炎模型的建立 雄性昆明小鼠(4周龄，体重16～20 g)80只，随机取9只作为正常对照组(N)，其余的按下列方法免疫：腹股沟皮下多点注射BSA，每只每次0.25 mg，第一次加弗氏完全佐剂，此后于第4、6周分别行强化免疫，第3次免疫2周后接受雾化吸入3 mg/ml BSA 90 min,以引发Arthus肺泡血管炎。
, 百拇医药
分组及给药： (1) 单一用药组，将模型小鼠随机分为4组(每组9～10只)：阳性对照组(K1)，不给任何药物；SS组，每只给予5 μg/d SS; VE组， 每只250 μg/d VE; GF组，每只25 μg/d GF。各组喂药3 d,喂药方式：灌胃。第3天行雾化吸入 BSA。(2) 联合用药组，共设3组(每组9只)：阳性对照组(K2)，不给任何药物；EFS组，给予VE+GF+SS； FS组，给予GF+SS。药物剂量与单一用药组相同。喂药第3天行雾化BSA吸入实验。
取材及处理 喂药第3日晨给药2小时后吸入雾化的BSA 90 min。6 h后眼底动脉放血、杀鼠取肺，进行制片和染色。(1) 免疫荧光染色：将最大叶肺纵切成两半，取其一半作低温切片，进行抗C3、抗IgG免疫荧光染色； (2)
组化染色[7,8]：另一半肺叶切成
单位：中国医学科学院 中国协和医科大学 基础医学研究所病理室， 北京 100005
关键词：亚硒酸钠；抗氧化剂；活性氧；肺泡血管炎；补体活化反馈环
中国医学科学院学报990404 摘要 目的 以小鼠肺泡血管炎动物模型为研究对象，证明亚硒酸钠及其它抗氧化剂，可通过抑制补体—中性粒细胞(PMN)—活性氧(ROS)正反馈活化环的机制抑制炎症反应。方法 以牛血清白蛋白致敏昆明小鼠建立肺泡Arthus反应性血管炎(即急性肺泡炎)的动物模型，观察口服补体活化抑制剂亚硒酸钠或抗氧化剂类黄酮(flavonoid)和维生素E阻断补体活化正反馈环的运转，以抑制小鼠急性肺泡炎的发生(观察补体活化及释放的活性氧在炎症区PMN上的荧光组化表现)。结果 以上3种补体活化抑制剂及抗氧化剂能在不同程度上抑制小鼠肺泡Arthus血管炎的发生，尤以3种抗氧化剂联合应用效果更佳，其抑制率可达75%(P<0.01)。结论 亚硒酸钠抑制补体的活化、类黄酮及维生素E的抗氧化作用可以通过抑制补体活化反馈机制控制炎症应答，从而进一步证明了补体—PMN—ROS正反馈活化环促进炎症反应机制的存在。
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中图号 R392.31
The Inhibitory Effect of Selenite and Other Antioxidants on
the Complement Mediated Experimental Pulmonary Alveolitis
Shi Xinlan Lin Yunli Hou Jiancun#
(Department of Pathology, Institute of Basic Medical Sciences, CAMS and PUMC Beijing. 100005)
Objective To test the regulatory effect of selenite and other antioxidants on complement PMN activation feedback mechanism mediated inflammatory response in experimantal pulmonary vasculitis. Methods Mouse model of pulmonary Arthus reaction vasculitis developed with BSA sensitization and antigen inhalation was used for tests of inhibitory effect of oral administration of sodium selenite, glycyrrhizin flavonoids and/or vitamin E on the incidence of developing vasculitis, which could reflect the modulation of inflammatory response and tissue injury. Results A remarkable inhibitory effect of selenite or combined flavonoid and vitamin E on the induction of pulmonary vasculitis were observed as the incidence of vasculitis could drop from 100% of the untreated group down to 25% of the antioxidants treated groups, revealing modulation of inflammatory response. Conclusions It indicated a newer insight into mechanism of the inflammatory response could give a novel approach to the modulation of inflammatory response. An adjuvant therapy of selenium and antioxidants to the interventions of inflammatory disorders has been expected.
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Key words selenite; antioxidants; reactive oxygen species; alveolar vasculitis; complement activation feedback
炎症应答调控的研究是防治炎症性疾病的关键，但至今对炎症的机制尚未完全阐明。近年来多数学者认为在炎症形成过程中补体起着中心作用[1，2]。笔者曾提出补体介导炎症反应及组织损伤机制的新设想[3]，即补体的活化既能激活中性粒细胞(PMN)及血管内皮细胞(EC)表达粘附分子，介导PMN跨内皮渗出[4]，又能激活PMN释放活性氧(ROS)，引起氧化损伤[5]；而且ROS又能再反馈激活补体，如此形成一个正反馈活化环致使炎症反应持续并扩大。而抑制补体活化或清除ROS，必将阻断该反馈环的运转，从而起到控制炎症反应减轻组织损伤的作用。本组曾以离体试验证实了补体—PMN—ROS正反馈活化环的存在[6]，本研究采用兼有抑制补体活化作用的抗氧化剂亚硒酸钠及甘草类黄酮、维生素E等活性氧清除剂对小鼠肺泡Arthus反应性血管炎动物模型产生的阻断作用，进一步在整体动物水平验证补体介导的活化反馈环调节炎症反应机制的存在。
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1 材料和方法
试剂 牛血清白蛋白(BSA)为天津生化制品厂出品，锰枸橼酸盐缓冲液、DAB显色液与氧合溶液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液(TBR)均按文献[7]方法配制，兔抗小鼠C3为本实验室制备，FITC-羊抗兔IgG为军事医学科学院五所产品，FITC-羊抗鼠IgG为北京生物制品研究所产品，亚硒酸钠(selenase, SS, 100 μg/amp)为德国G. N. PHARM药厂提供，甘草类黄酮(glycyrrhiza flavonoid, GF)为呼和浩特迪科医药高新技术产品开发公司产品，50% Vitamin E(VE, 水溶性)为中国预防医学科学院营养卫生研究所提供。
仪器 OTF恒冷低温切片机(英国，Bright),BH2落射荧光显微镜(日本，Olympus)。
小鼠Arthus反应性肺泡血管炎模型的建立 雄性昆明小鼠(4周龄，体重16～20 g)80只，随机取9只作为正常对照组(N)，其余的按下列方法免疫：腹股沟皮下多点注射BSA，每只每次0.25 mg，第一次加弗氏完全佐剂，此后于第4、6周分别行强化免疫，第3次免疫2周后接受雾化吸入3 mg/ml BSA 90 min,以引发Arthus肺泡血管炎。
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分组及给药： (1) 单一用药组，将模型小鼠随机分为4组(每组9～10只)：阳性对照组(K1)，不给任何药物；SS组，每只给予5 μg/d SS; VE组， 每只250 μg/d VE; GF组，每只25 μg/d GF。各组喂药3 d,喂药方式：灌胃。第3天行雾化吸入 BSA。(2) 联合用药组，共设3组(每组9只)：阳性对照组(K2)，不给任何药物；EFS组，给予VE+GF+SS； FS组，给予GF+SS。药物剂量与单一用药组相同。喂药第3天行雾化BSA吸入实验。
取材及处理 喂药第3日晨给药2小时后吸入雾化的BSA 90 min。6 h后眼底动脉放血、杀鼠取肺，进行制片和染色。(1) 免疫荧光染色：将最大叶肺纵切成两半，取其一半作低温切片，进行抗C3、抗IgG免疫荧光染色； (2)
组化染色[7,8]：另一半肺叶切成