电针对佐剂关节炎大鼠脊髓单胺类递质含量的影响
作者：王升旭 洪军 周轶林 赖新生
单位：王升旭 洪军 周轶林(第一军医大学中医系，广州 510515)；赖新生(广州中医药大学针灸推拿学院，广州 510405)
关键词：关节炎，佐剂性/针灸疗法；血清素/化学；多巴胺/化学；去甲肾上腺素/化学；脊髓/针灸效应；穴，太溪；穴，昆仑
广州中医药大学学报990410摘要：为观察电针局部取穴对佐剂关节炎大鼠脊髓单胺类递质含量的影响，将Wistar雄性大鼠 21 只，随机分为正常对照组、佐剂关节炎模型组和电针局部取穴加模型组，电针局部取穴组针刺患侧太溪、昆仑穴，接 G-6805 电针仪，频率 15 Hz，时间 20 min，隔日针刺 1次。于实验后 14 d 上午取脊髓组织，测定 5-羟色胺 (5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NA)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA) 的含量。结果：电针局部取穴组脊髓 5-HT、5-HIAA 含量均显著升高，脊髓NA、DA含量显著下降。结果表明脊髓单胺类递质参与炎性痛大鼠电针镇痛的调制过程。
, http://www.100md.com
分类号：R264.1 文献标识码：A
文章编号：1007-3213(1999)04-0286-03
Influence of Electro-acupuncture on Spinal Monoamine Neurotransmitter Content in Rats with Adjuvant Arthritis
WANG Shengxu ZHOU Yilin
(Dept.of TCM,the First Military Medical University,Guangzhou 510515,China)
HONG Jun
(South Hospital,the First Military Medical University,Guangzhou 510515,China)
, http://www.100md.com
LAI Xinsheng
(Dept.of Acupuncture and Moxibustion,Guangzhou University of TCM,Guangzhou 510405,China)
Abstract:To observe the influence of electro-acupuncture on spinal monoamine neurotransmitter content in rats with adjuvant arthritis(AA),21 male Wistar rats were randomly allocated to 3 groups:the normal control group(Group Ⅰ),AA rat model group (Group Ⅱ)and model group treated with electro-acupuncture(Group Ⅲ).Group Ⅲ were treated with electro-acupuncture to Taixi and Kunlun point of affected limb by G6805 electro-acupuncture instrument at the frequency of 15 Hz for 20 minutes every other day.In 14th day morning,the contents of 5-hydroxytryptamine(5-HT),dopamine(DA),noradrenalin(NA) and 5-hydroxyindoleacetic acid(5-HIAA )in spinal tissue were determined.The results showed that the contents of 5-HT and 5-HIAA in Group Ⅲ were markedly increased, and NA and DA content were decreased.It is concluded that spinal monoamine neurotransmitter participated the analgesic mechanism in AA rat treated with electro-acupuncture.
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Key words:ARTHRITIS,ADJUVANT/acup-mox therapy; SEROTONIN/chemistry;
DOPAMINE/chemistry; NOREPINEPHRINE/chemistry;
SPINAL CORD/acup-mox effects; POINT KI3(TAIXI);
POINT BL60(KUNLUN)
单胺类递质是体内重要的生物活性物质，脊髓内 5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NA)是脑干下行性抑制系统的重要神经递质，参与针刺镇痛的过程。而脊髓内多巴胺(DA)与针刺镇痛的关系则未见报道。局部取穴是针刺镇痛的重要取穴原则，在临床得到广泛应用。有关实验研究结果显示，急性关节炎大鼠电针局部穴位组镇痛效果最好[1]，但电针局部取穴对佐剂关节炎大鼠脊髓单胺类递质含量有何影响尚未见报道。
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1 材料与方法
1.1 动物与分组 Wistar雄性大鼠 21只，体重(180±10)g，由本校动物所提供，常规饲养 5 d 适应环境后，随机分为正常对照组(简称正常组)、佐剂关节炎模型组(简称模型组)和电针局部取穴加模型组(简称电针组)，每组7只。
1.2 动物模型制作 参照文献方法，在大鼠右后肢足垫皮内注入完全弗氏佐剂0.15 mL/只(Sigma公司产品，内含 0.1% 灭活结核杆菌)，即可造成大鼠右后肢急性单发性关节炎。
1.3 针刺方法 电针组在造模后当天即开始针刺。大鼠被固定在特制的鼠笼内，头尾稍可活动，但身体不能转动。电针组针刺患侧太溪、昆仑穴，接 G-6805 电针治疗仪， 频率 15 Hz ，强度以大鼠胡须抖动但不出现挣扎为度，时间 20 min ，隔日针刺 1 次。
1.4 实验方法 正常组及模型组大鼠按电针组同样方法固定，采用 SMZ-Ⅱ 型微电脑辐射热测痛仪每日测量 1 次痛阈，于实验后 14 d 上午将大鼠迅速断头，取脊髓组织，采用荧光分光光度测定法[2，3]，测定脊髓组织 5-HT、DA、NA、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA) 的含量。
, 百拇医药
1.5 统计学处理 采用方差分析及t检验进行显著性检验。
2 结果与分析
实验结果表明，与正常组和模型组相比，电针组脊髓 5-HT、5-HIAA 有显著性升高，正常组和模型组相比无显著性差异。电针组脊髓 NA 含量显著下降，与正常组和模型组比较差异有显著性，而正常组和模型组相比无显著性差异。与正常组比较，模型组和电针组脊髓 DA 含量都有显著下降，尤以电针组下降明显，与模型组比较也有显著性差异。结果见表 1。
表1 3 组大鼠脊髓单胺类递质含量的变化(
±s) 组别
N/只
ρ5-HT/(ng。L-1)
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ρ5-HIAA/(ng。L-1)
ρNA/(ng。L-1)
ρDA/(ng。L-1)
正常组
7
154.84±13.09
153.65±5.71
388.06±11.58
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1592.03±34.45
模型组
7
152.52±17.95
131.94±9.34
402.69±16.93
698.95±34.31**
电针组
7
370.16±22.39**△△
224.96±5.46**△△
, 百拇医药
183.93±10.69**△△
161.95±13.54**△△
**与正常组比较P<0.01；△△与模型组比较P<0.013 讨论
3.1 电针局部取穴镇痛与脊髓 5-羟色胺
脑内 5-HT 是参与针刺镇痛的重要神经递质，针刺产生镇痛效应时，脑内 5-HT 含量增高；针刺无效者，5-HT 水平不变。局部损毁或用 5-HT 受体拮抗剂及合成抑制剂影响 5-HT 通路的任何环节时，可明显减弱针刺镇痛效应。而增强脑内 5-HT 能神经元的活动，人为地升高 5-HT 含量，则针刺镇痛效应大为增强。脑内大部分 5-HT 能神经元分布在中缝核群，参与痛觉调制的中缝大核 5-HT 能神经元轴突下行到脊髓，既有与脊丘束神经元的单突触联系，也有通过背角脑啡肽中间神经元介导与脊丘束神经元的多突触联系。5-HT 直接作用于脊髓，可抑制脊丘束神经元的活动，产生镇痛作用。表明 5-HT 是参与脊髓痛觉调制的重要递质[4]。5-HIAA 是 5-HT 分解代谢的终产物，可反映 5-HT 的代谢水平。上海神经递质与针刺镇痛研究协作组发现，电针镇痛时，全脑(小脑除外) 5-HT 水平显著提高，5-HIAA 的含量也增加。韩济生[5]研究了针刺镇痛过程中中枢 5-HT 含量和更新率，发现电针时端脑、间脑、脑干、脊髓等部位的 5-HT 含量有普遍而显著的增长，5-HIAA 的增长较 5-HT 更为明显；电针时中枢各部分 5-HT 的更新率有不同程度的改变，以合成速度而论，脊髓和脑干增加较多，以利用速度而论，端脑和间脑增加较多。本实验结果也表明，电针局部取穴可显著增加佐剂关节炎大鼠脊髓 5-HT 和 5-HIAA 的水平，表明电针局部取穴的镇痛机理与激活大鼠 5-HT 能下行镇痛系统有关，5-HT 合成增加，释放和利用也增加，但合成速度超过释放和利用速度，故 5-HT 含量增加。
, 百拇医药
3.2 电针局部取穴镇痛与脊髓去甲肾上腺素
NA 随着中枢部位的不同对针刺镇痛的影响不同，脑中 NA 对抗针刺镇痛，而脊髓内的 NA 加强针刺镇痛。针刺镇痛时，下脑干 A1 区及脊髓背角的 NA 释放增加。电针对大鼠中枢 NA 更新率的研究发现，电针两后肢相当于足三里、三阴交处，可使脑和脊髓内 NA 含量降低，表明电针刺激既促进 NE 的合成，也增加其释放利用，由于释放速度大于合成速度，故含量减少[5]。本实验结果显示佐剂关节炎大鼠与正常对照组大鼠脊髓 NA 含量无显著性差异，电针炎症侧太溪、昆仑穴后，佐剂关节炎大鼠脊髓 NA 含量显著减少，表明其释放利用增加，NA 参与电针局部取穴镇痛的脊髓机制。
3.3 电针局部取穴镇痛与脊髓多巴胺
DA 含量占脑内儿茶酚胺含量的 50%，关于 DA 与针刺镇痛的关系，报道结果相互矛盾。金国章[6]报道，大鼠电针镇痛时，脑内 DA 含量无明显变化。但也有报道，大鼠电针镇痛时，端脑、间脑、脑干内 DA 都显著升高。而上海医科大学近年关于药物加强针刺镇痛时中枢阿片肽系统与多巴胺系统的关系的研究表明，应用一些药物抑制中枢多巴胺系统，可使中枢阿片受体功能增强，阿片肽基因表达增强，阿片肽释放增强，从而加强针刺镇痛[7]。而有关针刺镇痛时脊髓内 DA 含量有何变化尚未见报道。本实验发现佐剂关节炎大鼠脊髓 DA 含量较正常大鼠显著降低，而电针局部取穴组又较模型组显著降低，表明疼痛刺激及电针可能抑制大鼠中枢 DA 能神经元的活动，使 DA 合成减少；电针镇痛时这一趋势更为明显，表明脊髓内的 DA 参与对炎症刺激及电针镇痛的调制。
, 百拇医药
基金项目：卫生部科学研究基金立项课题(编号：960367)，本研究是在广州中医药大学就读博士研究生时完成
作者简介：王升旭，男，博士，副教授，本校95级针灸学博士研究生
参考文献：
[1] 朱丽霞.阿片系统在针刺镇痛外周机制中的作用[J].针刺研究，1993(3)：214
[2] 刘怀冰.脑脊液和血液内单胺类神经递质荧光测定法[J].临床检验杂志，1987(2)：64
[3] Shellenberger M K.A rapid,simplified procedure and simultaneous assay of norepinepherine,dopamine and 5-hydroxytryptamine from discrete brain areas[J].Analytical Biochemistry,1971,39:356
, http://www.100md.com
[4] 夏萤，曹小定.针刺对中枢递质的影响[J].针刺研究，1985(2)：81
[5] 韩济生.中枢5-羟色胺在针刺镇痛中的作用[J].中国科学，1978(5)：578
[6] 金国章.脑内5-羟色胺和儿茶酚胺在针刺镇痛中的作用[J].生理学报，1979，31：121
[7] 吴根诚，曹小定.针刺麻醉及针刺镇痛的新进展[C].见：世界针灸学会联合会编.世界针灸学会联合会成立十周年学术大会论文摘要汇编，1997.259
收稿日期：1999-06-16, http://www.100md.com
单位：王升旭 洪军 周轶林(第一军医大学中医系，广州 510515)；赖新生(广州中医药大学针灸推拿学院，广州 510405)
关键词：关节炎，佐剂性/针灸疗法；血清素/化学；多巴胺/化学；去甲肾上腺素/化学；脊髓/针灸效应；穴，太溪；穴，昆仑
广州中医药大学学报990410摘要：为观察电针局部取穴对佐剂关节炎大鼠脊髓单胺类递质含量的影响，将Wistar雄性大鼠 21 只，随机分为正常对照组、佐剂关节炎模型组和电针局部取穴加模型组，电针局部取穴组针刺患侧太溪、昆仑穴，接 G-6805 电针仪，频率 15 Hz，时间 20 min，隔日针刺 1次。于实验后 14 d 上午取脊髓组织，测定 5-羟色胺 (5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NA)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA) 的含量。结果：电针局部取穴组脊髓 5-HT、5-HIAA 含量均显著升高，脊髓NA、DA含量显著下降。结果表明脊髓单胺类递质参与炎性痛大鼠电针镇痛的调制过程。
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分类号：R264.1 文献标识码：A
文章编号：1007-3213(1999)04-0286-03
Influence of Electro-acupuncture on Spinal Monoamine Neurotransmitter Content in Rats with Adjuvant Arthritis
WANG Shengxu ZHOU Yilin
(Dept.of TCM,the First Military Medical University,Guangzhou 510515,China)
HONG Jun
(South Hospital,the First Military Medical University,Guangzhou 510515,China)
, http://www.100md.com
LAI Xinsheng
(Dept.of Acupuncture and Moxibustion,Guangzhou University of TCM,Guangzhou 510405,China)
Abstract:To observe the influence of electro-acupuncture on spinal monoamine neurotransmitter content in rats with adjuvant arthritis(AA),21 male Wistar rats were randomly allocated to 3 groups:the normal control group(Group Ⅰ),AA rat model group (Group Ⅱ)and model group treated with electro-acupuncture(Group Ⅲ).Group Ⅲ were treated with electro-acupuncture to Taixi and Kunlun point of affected limb by G6805 electro-acupuncture instrument at the frequency of 15 Hz for 20 minutes every other day.In 14th day morning,the contents of 5-hydroxytryptamine(5-HT),dopamine(DA),noradrenalin(NA) and 5-hydroxyindoleacetic acid(5-HIAA )in spinal tissue were determined.The results showed that the contents of 5-HT and 5-HIAA in Group Ⅲ were markedly increased, and NA and DA content were decreased.It is concluded that spinal monoamine neurotransmitter participated the analgesic mechanism in AA rat treated with electro-acupuncture.
, http://www.100md.com
Key words:ARTHRITIS,ADJUVANT/acup-mox therapy; SEROTONIN/chemistry;
DOPAMINE/chemistry; NOREPINEPHRINE/chemistry;
SPINAL CORD/acup-mox effects; POINT KI3(TAIXI);
POINT BL60(KUNLUN)
单胺类递质是体内重要的生物活性物质，脊髓内 5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NA)是脑干下行性抑制系统的重要神经递质，参与针刺镇痛的过程。而脊髓内多巴胺(DA)与针刺镇痛的关系则未见报道。局部取穴是针刺镇痛的重要取穴原则，在临床得到广泛应用。有关实验研究结果显示，急性关节炎大鼠电针局部穴位组镇痛效果最好[1]，但电针局部取穴对佐剂关节炎大鼠脊髓单胺类递质含量有何影响尚未见报道。
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1 材料与方法
1.1 动物与分组 Wistar雄性大鼠 21只，体重(180±10)g，由本校动物所提供，常规饲养 5 d 适应环境后，随机分为正常对照组(简称正常组)、佐剂关节炎模型组(简称模型组)和电针局部取穴加模型组(简称电针组)，每组7只。
1.2 动物模型制作 参照文献方法，在大鼠右后肢足垫皮内注入完全弗氏佐剂0.15 mL/只(Sigma公司产品，内含 0.1% 灭活结核杆菌)，即可造成大鼠右后肢急性单发性关节炎。
1.3 针刺方法 电针组在造模后当天即开始针刺。大鼠被固定在特制的鼠笼内，头尾稍可活动，但身体不能转动。电针组针刺患侧太溪、昆仑穴，接 G-6805 电针治疗仪， 频率 15 Hz ，强度以大鼠胡须抖动但不出现挣扎为度，时间 20 min ，隔日针刺 1 次。
1.4 实验方法 正常组及模型组大鼠按电针组同样方法固定，采用 SMZ-Ⅱ 型微电脑辐射热测痛仪每日测量 1 次痛阈，于实验后 14 d 上午将大鼠迅速断头，取脊髓组织，采用荧光分光光度测定法[2，3]，测定脊髓组织 5-HT、DA、NA、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA) 的含量。
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1.5 统计学处理 采用方差分析及t检验进行显著性检验。
2 结果与分析
实验结果表明，与正常组和模型组相比，电针组脊髓 5-HT、5-HIAA 有显著性升高，正常组和模型组相比无显著性差异。电针组脊髓 NA 含量显著下降，与正常组和模型组比较差异有显著性，而正常组和模型组相比无显著性差异。与正常组比较，模型组和电针组脊髓 DA 含量都有显著下降，尤以电针组下降明显，与模型组比较也有显著性差异。结果见表 1。
表1 3 组大鼠脊髓单胺类递质含量的变化(
±s) 组别N/只
ρ5-HT/(ng。L-1)
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ρ5-HIAA/(ng。L-1)
ρNA/(ng。L-1)
ρDA/(ng。L-1)
正常组
7
154.84±13.09
153.65±5.71
388.06±11.58
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1592.03±34.45
模型组
7
152.52±17.95
131.94±9.34
402.69±16.93
698.95±34.31**
电针组
7
370.16±22.39**△△
224.96±5.46**△△
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183.93±10.69**△△
161.95±13.54**△△
**与正常组比较P<0.01；△△与模型组比较P<0.013 讨论
3.1 电针局部取穴镇痛与脊髓 5-羟色胺
脑内 5-HT 是参与针刺镇痛的重要神经递质，针刺产生镇痛效应时，脑内 5-HT 含量增高；针刺无效者，5-HT 水平不变。局部损毁或用 5-HT 受体拮抗剂及合成抑制剂影响 5-HT 通路的任何环节时，可明显减弱针刺镇痛效应。而增强脑内 5-HT 能神经元的活动，人为地升高 5-HT 含量，则针刺镇痛效应大为增强。脑内大部分 5-HT 能神经元分布在中缝核群，参与痛觉调制的中缝大核 5-HT 能神经元轴突下行到脊髓，既有与脊丘束神经元的单突触联系，也有通过背角脑啡肽中间神经元介导与脊丘束神经元的多突触联系。5-HT 直接作用于脊髓，可抑制脊丘束神经元的活动，产生镇痛作用。表明 5-HT 是参与脊髓痛觉调制的重要递质[4]。5-HIAA 是 5-HT 分解代谢的终产物，可反映 5-HT 的代谢水平。上海神经递质与针刺镇痛研究协作组发现，电针镇痛时，全脑(小脑除外) 5-HT 水平显著提高，5-HIAA 的含量也增加。韩济生[5]研究了针刺镇痛过程中中枢 5-HT 含量和更新率，发现电针时端脑、间脑、脑干、脊髓等部位的 5-HT 含量有普遍而显著的增长，5-HIAA 的增长较 5-HT 更为明显；电针时中枢各部分 5-HT 的更新率有不同程度的改变，以合成速度而论，脊髓和脑干增加较多，以利用速度而论，端脑和间脑增加较多。本实验结果也表明，电针局部取穴可显著增加佐剂关节炎大鼠脊髓 5-HT 和 5-HIAA 的水平，表明电针局部取穴的镇痛机理与激活大鼠 5-HT 能下行镇痛系统有关，5-HT 合成增加，释放和利用也增加，但合成速度超过释放和利用速度，故 5-HT 含量增加。
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3.2 电针局部取穴镇痛与脊髓去甲肾上腺素
NA 随着中枢部位的不同对针刺镇痛的影响不同，脑中 NA 对抗针刺镇痛，而脊髓内的 NA 加强针刺镇痛。针刺镇痛时，下脑干 A1 区及脊髓背角的 NA 释放增加。电针对大鼠中枢 NA 更新率的研究发现，电针两后肢相当于足三里、三阴交处，可使脑和脊髓内 NA 含量降低，表明电针刺激既促进 NE 的合成，也增加其释放利用，由于释放速度大于合成速度，故含量减少[5]。本实验结果显示佐剂关节炎大鼠与正常对照组大鼠脊髓 NA 含量无显著性差异，电针炎症侧太溪、昆仑穴后，佐剂关节炎大鼠脊髓 NA 含量显著减少，表明其释放利用增加，NA 参与电针局部取穴镇痛的脊髓机制。
3.3 电针局部取穴镇痛与脊髓多巴胺
DA 含量占脑内儿茶酚胺含量的 50%，关于 DA 与针刺镇痛的关系，报道结果相互矛盾。金国章[6]报道，大鼠电针镇痛时，脑内 DA 含量无明显变化。但也有报道，大鼠电针镇痛时，端脑、间脑、脑干内 DA 都显著升高。而上海医科大学近年关于药物加强针刺镇痛时中枢阿片肽系统与多巴胺系统的关系的研究表明，应用一些药物抑制中枢多巴胺系统，可使中枢阿片受体功能增强，阿片肽基因表达增强，阿片肽释放增强，从而加强针刺镇痛[7]。而有关针刺镇痛时脊髓内 DA 含量有何变化尚未见报道。本实验发现佐剂关节炎大鼠脊髓 DA 含量较正常大鼠显著降低，而电针局部取穴组又较模型组显著降低，表明疼痛刺激及电针可能抑制大鼠中枢 DA 能神经元的活动，使 DA 合成减少；电针镇痛时这一趋势更为明显，表明脊髓内的 DA 参与对炎症刺激及电针镇痛的调制。
, 百拇医药
基金项目：卫生部科学研究基金立项课题(编号：960367)，本研究是在广州中医药大学就读博士研究生时完成
作者简介：王升旭，男，博士，副教授，本校95级针灸学博士研究生
参考文献：
[1] 朱丽霞.阿片系统在针刺镇痛外周机制中的作用[J].针刺研究，1993(3)：214
[2] 刘怀冰.脑脊液和血液内单胺类神经递质荧光测定法[J].临床检验杂志，1987(2)：64
[3] Shellenberger M K.A rapid,simplified procedure and simultaneous assay of norepinepherine,dopamine and 5-hydroxytryptamine from discrete brain areas[J].Analytical Biochemistry,1971,39:356
, http://www.100md.com
[4] 夏萤，曹小定.针刺对中枢递质的影响[J].针刺研究，1985(2)：81
[5] 韩济生.中枢5-羟色胺在针刺镇痛中的作用[J].中国科学，1978(5)：578
[6] 金国章.脑内5-羟色胺和儿茶酚胺在针刺镇痛中的作用[J].生理学报，1979，31：121
[7] 吴根诚，曹小定.针刺麻醉及针刺镇痛的新进展[C].见：世界针灸学会联合会编.世界针灸学会联合会成立十周年学术大会论文摘要汇编，1997.259
收稿日期：1999-06-16, http://www.100md.com